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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子标记的,具体涉及gdf10基因片段作为影响绵羊尾部脂肪沉积性状的分子标记及其在绵羊育种中的应用。
技术介绍
1、湖羊是绵羊的一种,作为原产于我国的短肥尾品种,因其繁殖性能高、生长快、适应性强、性成熟早、常年发情、产羔量大、泌乳能力强等特点,受到广大养殖户的广泛欢迎。随着室内养羊生产系统的发展以及人们消费观念的改变,尾脂的过度沉积限制了羔羊的商业价值,肥尾已成为一种不太受欢迎和不太必要的特征。尾脂重占胴体重的比例是影响胴体质量的重要指标,尾脂沉积过多会降低饲料转化率,增加饲养成本、影响家畜肉质、动物的交配以及正常运动。因此,降低湖羊尾部脂肪的沉积势在必行。
2、gdf10(生长分化因子10)又称为骨形态发成蛋白3b(bmp-3b),是bmp家族中的一员,是一种重要的生长因子蛋白。gdf10基因编码蛋白质tgf-β(转化生长因子-β)超家族的分泌配体,结合各种tgf-β受体,导致调节基因表达的smad家族转录因子的募集和激活。该基因编码的前原蛋白经过蛋白水解处理产生与二硫键连接的同型二聚体的亚基,这促进了中风后的神经修复。这种蛋白还可能充当肿瘤抑制因子,并且该基因的表达降低与口腔癌有关。此外,该基因参与成骨和脂肪生成,在通过smad2/3通路的成骨细胞分化过程中起抑制作用,并在脂肪生成过程中起抑制作用。akiyoshi uezumi等的研究表明bmp3b在间充质祖细胞中特异性表达,其表达水平在衰老或脂肪形成分化过程中显著降低。tamana ryousof等的研究表明,bmi升高的儿童血浆gdf10水平明
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题,本专利技术提供一种作为与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记及其应用。
2、本专利技术的分子标记是从绵羊gdf10基因中扩增得到,其具体核苷酸序列如seq idno.1所示。通过扩增绵羊gdf10基因的dna序列并测序,寻找gdf10基因的多态性位点,分析不同的基因型与绵羊尾部脂肪沉积性状相关性,并建立含多态性位点的分子标记的检测方法,并可将该分子标记应用于降低绵羊的尾部脂肪沉积新品种的培育中。
3、为实现上述目的,本专利技术采用以下的技术方案为:
4、一种与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记在育种中的应用,所述分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示,其中第614bp位的w表示a或t,由于上述序列在第614位碱基处有一个a/t突变,从而导致了绵羊gdf10基因在该位点的a/t多态性。
5、检测上述与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的引物对在绵羊育种中的应用,所述引物对包括上游引物和下游引物,上游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示,下游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。
6、检测上述与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的aqp snp引物对在绵羊育种中的应用,所述aqp snp引物对包括检测allelea的正向引物、检测allelet的正向引物和通用反向引物,其中,检测allelea的正向引物的核苷酸序列如seq id no.4所示,测allelet的正向引物的核苷酸序列如seq id no.5所示,通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.6所示。
7、检测上述与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的试剂盒在绵羊育种中的应用,所述试剂盒包含了检测上述分子标记的pcr引物对或aqp snp引物对。
8、检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的方法,具体检测方法包括如下步骤:
9、s1、使用上述的pcr引物对、aqp snp引物对或包含上述引物对的试剂盒,对绵羊基因组dna进行扩增;
10、s2、对步骤s1获得的扩增产物的多态性位点进行鉴定。
11、其中,在步骤s2中,上述分型鉴定的方法包括但不限于直接测序法、荧光探针法、基因芯片法、高分辨率溶解曲线法。
12、利用上述引物对检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关分子标记的方法,包括如下步骤:
13、a)以绵羊血液为样品提取基因组dna,利用核苷酸序列如seq id no.4、seq idno.5和seq id no.6所示的引物对进行aqp分型;
14、b)扩增结束后,利用c1000 touch thermal cycler仪器检测荧光信号并查看分型结果。
15、如上述所述的检测方法在绵羊尾部脂肪沉积性状检测中的应用,通过在待测绵羊的基因组dna中检测本专利技术的分子标记,并分析多态性位点的类型,从而可以确定绵羊尾部脂肪的高低,进而筛选出尾部脂肪沉积较少的绵羊品种,携带at基因型羊尾脂相对胴体重显著低于携带aa基因型的羊,携带at基因型羊的尾部脂肪沉积低于携带aa和tt基因型的羊。
16、如上所述的检测方法在绵羊育种中的应用,所述育种为选育出低尾脂型的绵羊品种,若待检样品的基因型为at型,则该基因型的羊为低尾脂型。携带at基因型羊的尾部脂肪沉积低于携带aa和tt基因型的羊,留选基因型为at型用于育种。
17、本专利技术通过对绵羊代表品种湖羊的gdf10基因进行pcr扩增和测序,发现在扩增片段的第614位存在一个a/t多态性位点,并通过检测795只湖羊多态性和建立的最小二乘模型,确定了一种与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记,该分子标记可以用于低尾脂沉积性状型绵羊的选育,为绵羊尾部脂肪沉积性状的遗传改良提供了有效的基因工程手段,具有重大的实际应用价值。
18、本专利技术的有益效果在于:
19、本专利技术提供了与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记在绵羊育种中的应用,分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示,其中第614bp位的w表示a或t,携带at基因型的羊尾脂相对胴体重显著低于aa基因型;携带at基因型为低尾脂型,在育种时可选留at基因型。通过检测该多态性位点的基因型来有效鉴别是否为低尾脂型的绵羊,为低尾脂型绵羊的选育提供有效的检测手段。
20、本专利技术还建立了与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记多态性位点的检测方法,可确定待测绵羊的多态性位点的基因型,可用于选留基因为aa纯合型绵羊作为种羊用于育种,用以降低尾部脂肪的沉积,提高绵羊的品质,有助于提高养殖业的经济效益。
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1.一种与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记在绵羊育种中的应用,其特征在于,分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其中第614bp处的W表示A或T,该突变导致分子标记的A/T多态性。
2.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的引物对在绵羊育种中的应用,其特征在于,引物对包括引物R-F和引物R-R,引物R-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,引物R-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的AQP SNP引物对在绵羊育种中的应用,AQP SNP引物对包括检测AlleleA的正向引物、检测AlleleT的正向引物和通用反向引物,其中,检测AlleleA的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示,测AlleleT的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,通用反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
4.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的检测试剂盒在绵羊育种中的应用,其特征在于,检测试剂盒包含引物对或AQP SNP引物对,其中,引物对包括引物R
5.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的方法,其特征在于,所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其中第614bp位的W表示A或T,检测方法包括如下步骤:
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤S2中的分型鉴定方法为测序法、基因芯片法、荧光探针法或高分辨率溶解曲线法。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,利用AQP SNP引物对进行PCR扩增时,扩增结束后,利用C1000 Touch Thermal Cycler仪器检测荧光信号并查看分型结果。
8.权利要求5-7任一项所述的方法在绵羊尾部脂肪沉积性状检测中的应用,用于筛选出尾部脂肪沉积较少的小尾型的绵羊品种,携带AT基因型羊尾脂相对胴体重显著低于携带AA基因型的羊。
9.权利要求5-7中任一项所述的方法在绵羊育种中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,其育种目的是为挑选出低尾脂型绵羊。
...【技术特征摘要】
1.一种与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记在绵羊育种中的应用,其特征在于,分子标记的核苷酸序列如seq id no.1所示,其中第614bp处的w表示a或t,该突变导致分子标记的a/t多态性。
2.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的引物对在绵羊育种中的应用,其特征在于,引物对包括引物r-f和引物r-r,引物r-f的核苷酸序列如seq id no.2所示,引物r-r的核苷酸序列如seq id no.3所示。
3.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的aqp snp引物对在绵羊育种中的应用,aqp snp引物对包括检测allelea的正向引物、检测allelet的正向引物和通用反向引物,其中,检测allelea的正向引物的核苷酸序列如seq id no.4所示,测allelet的正向引物的核苷酸序列如seq id no.5所示,通用反向引物的核苷酸序列如seq id no.6所示。
4.检测与绵羊尾部脂肪沉积性状相关的分子标记的检测试剂盒在绵羊育种中的应用,其特征在于,检测试剂盒包含引物对或aqp snp引物对,其中,引物对包括引物r...
【专利技术属性】
技术研发人员:王维民,闫成琪,田慧彬,赵源,张煜坤,李晓龙,
申请(专利权)人:兰州大学,
类型:发明
国别省市:
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