【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因组编辑，具体地涉及gs12-10核酸内切酶变体及其介导的基因编辑系统。
技术介绍
1、遗传变异是进行育种改进的基础，而动物育种的目的正是创造和利用这些遗传变异。在动物遗传育种的漫长历史中，主要采用了四种策略：杂交育种、基因组选择育种、转基因育种和基因组编辑育种。传统的动物育种，即杂交育种，通过有目的杂交，结合理想表型选择，通过性重组在提高动物遗传改良方面发挥了重要作用。然而，由于杂交育种只能引入亲本基因组中已有的性状，优良种质中的低遗传多样性限制了这种技术的潜力。基因组选择是一种应用分子标记效应进行育种值估计的方法，不依赖系谱估计遗传联系，可以解决上述问题。应用基因组选择技术，在现有核心群基础上优化育种资源配置上，可以使我国猪遗传评估更准确，促进我国种猪联合育种持续、稳定、有效地开展，进而提高我国种猪育种整体效率。然而同样存在天然变异难以聚合的缺点。转基因育种是动物育种的一个关键突破，它通过将其他生物体的基因或性状引入动物基因组中，从而提高生长速度、抵抗疾病感染和改善肉质等。然而，到目前为止，只有少数性状能通过转基因实现，因为这种技术将外源dna随机整合到动物基因组中，这些转基因生物(gmos)受到政府的严格监管。
2、基因组编辑技术的发展，使得在动物中引入精确和可预测的基因组修改成为可能，以获得所需的性状。这些技术正在定义下一代动物育种，即精准育种技术。此外，该技术也可用于人类基因治疗。特别是crispr-cas技术已经成为改造动物基因组的最先进工具之一。这项技术已经迅速扩展并应用于人类疾病治疗、
技术实现思路
1、本专利技术通过同时对gs12-10核酸内切酶的氨基酸序列和crrna scaffold的支架环区进行突变，筛选最佳组合，开发出了一种基于crispr/gs12-10max系统介导的高效基因编辑技术。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种crispr/gs12-10系统中的核酸内切酶变体，包括以下蛋白：
4、i、seq id no.1所示氨基酸序列的gs12-10max蛋白，相对于野生型gs12-10核酸内切酶而言，第156位氨基酸由glu突变为arg；
5、ii、与seq id no.1所示的氨基酸序列相比，具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加的蛋白，并且基本保留了其源自序列的生物学功能。
6、融合蛋白，包上述蛋白和其他修饰部分。
7、多核苷酸，所述多核苷酸为编码上述核酸内切酶变体的多核苷酸，或编码上述融合蛋白的多核苷酸。包含所述多核苷酸的载体或宿主细胞。
8、上述核酸内切酶变体在基因编辑中的应用，包括原核生物基因组、真核生物基因组或体外基因的修饰基因、敲除基因、改变基因产物的表达、修复突变或插入多核苷酸。
9、一种crispr/gs12-10max基因编辑系统，包括述上述核酸内切酶变体，或上述融合蛋白，或上述多核苷酸，或上述载体，或上述宿主细胞；还包括crrna，所述crrna的scaffold支架序列如seq id no.2所示，所述crrna中靶向基因编辑位点的长度为23nt。
10、本专利技术的技术方案具有如下主要的有益效果：
11、1.本专利技术首次提供了gs12-10max、crrna变体及其最佳组合方式，相对于未改造的crispr/gs12-10系统而言，其提高了基因编辑活性。
12、2.本专利技术开发了crispr/gs12-10max系统介导的高效基因编辑技术，在基因组定点修饰领域具有广阔的应用前景。
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1.一种CRISPR/Gs12-10系统中的核酸内切酶变体，其特征在于，包括以下蛋白：
2.融合蛋白，其特征在于，包含权利要求1所述蛋白和其他修饰部分。
3.多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述核酸内切酶变体的多核苷酸，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸。
4.载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸。
5.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求3所述的多核苷酸或权利要求4所述的载体。
6.权利要求1所述的核酸内切酶变体，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的宿主细胞在基因编辑中的应用。
7.一种CRISPR/Gs12-10MAX基因编辑系统，其特征在于，包括权利要求1所述的核酸内切酶变体，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要5所述的宿主细胞。
8.根据权利要求7所述的基因编辑系统，其特征在于，还包括crRNA，所述crRNA的scaffold
...【技术特征摘要】
1.一种crispr/gs12-10系统中的核酸内切酶变体，其特征在于，包括以下蛋白：
2.融合蛋白，其特征在于，包含权利要求1所述蛋白和其他修饰部分。
3.多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述核酸内切酶变体的多核苷酸，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸。
4.载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸。
5.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求3所述的多核苷酸或权利要求4所述的载体。
6.权利要求1所述的核酸内切酶变体，或权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵书红，谢胜松，李新云，陶大刚，李晟，阮进学，
申请(专利权)人：湖北洪山实验室，
类型：发明
国别省市：
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