【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于昆虫生物防治，具体涉及一种可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac及其应用。
技术介绍
1、草地贪夜蛾spodopterafrugiperda(j.e.smith)又叫“秋粘虫”(fallarmyworm)，属鳞翅目lepidoptera夜蛾科noctuidae，具有寄主范围广、繁殖能力高、迁移能力强、产生抗药性快、适生区域广、突发危害严重等特点。草地贪夜蛾原产于美洲的亚热带和热带地区，2018年末，草地贪夜蛾从缅甸入侵我国云南，截止到2022年9月，草地贪夜蛾累计在我国27个省份846个县发生3,531万亩(https://www.natesc.org.cn)，给我国的粮食安全带来了巨大威胁。
2、草地贪夜蛾寄主范围广，可以取食超过353种植物，喜食玉米。一个世代约30d(28℃)，较冷的月份则可延长至60-90d，卵期3-4d，幼虫有6个龄期，低龄幼虫聚集危害，高龄后分散，4龄后进入暴食期，显现自残习性。老熟幼虫入土化蛹，蛹期7-37d。成虫平均寿命10d左右，需补充营养后生殖器官才能发育成熟。草地贪夜蛾危害玉米后，玉米的产量损失为15％至73％。
3、苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(autographa california multiplenuclearpolyhedrosis virus，acmnpv)是杆状病毒属的模式病毒，已被广泛应用于重组蛋白表达和害虫生物防治。acmnpv可以侵染鳞翅目的50多个物种，以acmnpv为基础的杀虫剂已在多个国家被开发为商业产品。ac
4、苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis，bt)是一种革兰氏阳性(g+)细菌，属于芽孢杆菌科、蜡样芽孢杆菌属，是一种天然存在的昆虫病原细菌。作为一种对生态安全性较高的微生物农药，bt已在世界上被广泛使用。bt之所以可以作为生物杀虫剂防治农林业害虫，是因为其能形成特异性毒杀害虫的杀虫蛋白，包括杀虫晶体蛋白(insecticidalcrystal proteins,icps)、营养期杀虫蛋白(vegetativeinsecticidalprotein,vip)等。icps在有害昆虫生物防治方面发挥了重要作用，但由于其长时间大面积使用，许多昆虫对其产生了较强的抗性，vip蛋白通常不以晶体形式存在，但是与cry蛋白相比，vip蛋白具有广泛的杀虫谱。
技术实现思路
1、为了发挥acmnpv和vip在杀灭草地贪夜蛾方面的优势，本专利技术公开了一种可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac及其应用。经实验证明，表达vip3a基因后acmnpv对草地贪夜蛾幼虫的毒力明显提升，且将vip3a基因表达在病毒表面，进一步提高了病毒对草地贪夜蛾幼虫的杀灭作用。重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac对草地贪夜蛾具有显著的防治效果，在草地贪夜蛾的生物防治中具有良好的应用前景。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac，所述重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac已于2024年8月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.46096，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(autographa california multiplenuclearpolyhedrosisvirus)；
4、所述重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac的基因组中含有ph基因、svt基因，所述ph基因的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述svt融合基因的核苷酸序列如seq id no.3所示；
5、所述svt基因为在vip3a基因序列n端插入杆状病毒囊膜糖蛋白gp64的信号肽sp序列与在c端插入结构域tmd序列融合而成，所述vip3a基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
6、一种制备上述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac的方法，包括以下步骤：
7、1)将ph基因克隆至pfastbac dual载体，获得转移载体pfastbac-dual-ph；所述ph基因的核苷酸序列如seq id no.2所示；
8、2)将svt基因克隆至转移载体pfastbac-dual-ph，获得转移载体pfastbac-dual-ph-svt；所述svt基因的核苷酸序列如seq id no.3所示；
9、3)将转移载体pfastbac-dual-ph-svt转化dh10bac，获得重组bacmid质粒；
10、4)将重组bacmid质粒转染sf9昆虫细胞，获得表面表达vip3a蛋白的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac。
11、上述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac在防治草地贪夜蛾中的应用；
12、所述应用为：将重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac饲喂草地贪夜蛾。
13、上述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac在制备防治草地贪夜蛾制剂中的应用。
14、一种防治草地贪夜蛾的制剂，所述制剂包括上述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac。
15、一种增强苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾毒力的方法，所述方法为：将vip3a基因重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒基因组中，从而提高苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾的毒力；所述vip3a基因的核苷酸序列如seq id no.1所示；
16、优选的，所述方法为：将vip3a蛋白表达于苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒表面；所述vip3a蛋白由vip3a基因所编码，所述vip3a基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
18、本专利技术利用acmnpv和vip在杀灭草地贪夜蛾方面的优势，将vip表达在acmnpv表面，成功获得了可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac，重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac对草地贪夜蛾的半致死浓度lc50为1.065×106pib/ml。
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1.一种可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC，其特征在于：所述重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC已于2024年8月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.46096，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（Autographa california multiplenuclearpolyhedrosis virus）。
2.根据权利要求1所述的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC，其特征在于：所述重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC的基因组中含有ph基因、svt基因，所述ph基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述svt基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求2所述的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC，其特征在于：所述svt基因在Vip3A基因序列的N端插入杆状病毒囊膜糖蛋白gp64的信号肽sp序列与在C端插入跨膜结构域tmd序列融合而成，所述Vip3A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种制备权利
5.如权利要求1~3任一项所述的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC在防治草地贪夜蛾中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：将重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC饲喂草地贪夜蛾。
7.如权利要求1~3任一项所述的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC在制备防治草地贪夜蛾制剂中的应用。
8.一种防治草地贪夜蛾的制剂，其特征在于：所述制剂包括权利要求1~3任一项所述的重组昆虫杆状病毒PH-SVT/AC。
9.一种增强苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾毒力的方法，其特征在于：将Vip3A基因重组到苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒基因组中，从而提高苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对草地贪夜蛾的毒力；所述Vip3A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：将Vip3A蛋白表达于苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒表面；所述Vip3A蛋白由Vip3A基因所编码，所述Vip3A基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
...【技术特征摘要】
1.一种可高效杀灭草地贪夜蛾的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac，其特征在于：所述重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac已于2024年8月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.46096，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（autographa california multiplenuclearpolyhedrosis virus）。
2.根据权利要求1所述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac，其特征在于：所述重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac的基因组中含有ph基因、svt基因，所述ph基因的核苷酸序列如seq idno.2所示，所述svt基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。
3.根据权利要求2所述的重组昆虫杆状病毒ph-svt/ac，其特征在于：所述svt基因在vip3a基因序列的n端插入杆状病毒囊膜糖蛋白gp64的信号肽sp序列与在c端插入跨膜结构域tmd序列融合而成，所述vip3a基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
4.一种制备权利要求1~3任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：王竹红，葛均青，徐腾，董志刚，马小龙，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：
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