【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及骨吸收检测，具体而言，涉及一种检测骨吸收的试剂盒及其应用和骨吸收检测材料的制备方法。
技术介绍
1、骨吸收与骨形成平衡是维持骨骼正常功能代谢的重要基础，目前的很多骨疾病都是由于骨的吸收异常导致，包括骨质疏松，骨肿瘤，骨硬化症等。所以在基础研究领域急需一种能够有效检测骨吸收功能的产品，为进一步研究骨吸收提供确实可靠全面的检测数据。
2、目前，已经通过研究破骨细胞的骨吸收功能，发现了影响破骨细胞形成的双膦酸盐类药物，主要用于临床的骨质疏松患者，但是这一药物对于未成年人及骨折骨质疏松患者的使用存在一定的局限性，破骨细胞是骨转化的关键因素，双膦酸盐能有效的抑制破骨细胞的生成，同时也会抑制骨转化导致未成年人骨发育抑制，也会抑制骨折患者骨修复。为了研究和开放出更多适用于不同患者的骨吸收药物，深入探索不同疾病的骨吸收异常原理，还需要更好的骨吸收检查手段和更加完善的数据。
3、骨吸收是破骨细胞的主要功能，在体内破骨细胞粘附在骨基质，通过自身吸收环与骨表面形成一个密闭独立的微环境，并且释放h+，使吸收环形成一个局部酸性微环境，酸性环境溶解局部的骨基质，造成吸收坑。吸收坑是破骨细胞骨吸收功能最直接的效果，其数量，大小，深度都反映骨吸收能力的强弱。
4、市面上已有的检测骨吸收的产品有2款，第一类是骨片，主要来自牛骨，但是加工复杂，生产条件苛刻，价格昂贵，由于骨片消毒不彻底会携带一定的病原微生物影响实验的进行等因素已经不再使用和生产。第二类是孔板底部包被骨吸收材料，主要是通过在孔板底部铺一层羟基磷灰石(
5、另外，目前对破骨细胞细胞器及蛋白水平的研究都是在无吸收状态下的，材料无法实现在破骨吸收状态下观察细胞器或者检测蛋白等表达和定位。目前的骨片由于密度过大，不宜制备为薄片，并且透光性差，不能镜下观察。骨吸收板材料太薄，且松散，易于吸收，不能维持破骨吸收状态。所以为了更好的研究破骨细胞的骨吸收调控机制，急需寻找新的骨吸收材料能够观察骨吸收状态的破骨细胞形态，细胞器及蛋白的表达和定位。
6、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种检测骨吸收的试剂盒及其应用和骨吸收检测材料的制备方法以解决上述技术问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种用于骨吸收检测的试剂盒，其包括：多孔板、由蛋壳制备的骨吸收检测材料。
4、第二方面，本专利技术提供了试剂盒在破骨细胞骨吸收检测或筛选骨吸收药物中的应用，应用包括如下任意一种应用方式：
5、(1)将试剂盒的微孔板与破骨细胞接触，检测吸收坑；
6、(2)将试剂盒的微孔板与破骨细胞接触，获得细胞图像；
7、(3)将试剂盒的微孔板与破骨细胞接触，获得细胞图像后进行吸收坑的检测。
8、第三方面，本专利技术提供了骨吸收检测材料的制备方法，其包括如下(1)-(3)任一项所示的方法：
9、(1)将去除蛋液和蛋膜的蛋壳内壁与处理剂接触；
10、(2)将去除蛋液和蛋膜的蛋壳内壁进行打磨；
11、(3)将去除蛋液和蛋膜的蛋壳内壁进行超声处理。
12、本专利技术具有以下有益效果：
13、本专利技术提供了一种用于骨吸收检测的试剂盒，该试剂盒不仅能够观察骨吸收功能和量化(吸收坑的数量、大小和深度等参数)，并且能够观察骨吸收状态下的细胞的形态数量和大小，提供更加真实的骨吸收细胞的研究状态。而现有的骨吸收检测产品骨片透光性差，不能观察到细胞的形态，而孔板包被的羟基磷灰石材料太薄很容易被破骨细胞吸收导致材料破损，无法观察到吸收材料的细胞状态。
14、蛋壳上的细胞更加接近体内细胞状态，当蛋壳厚度达到0.1mm的状态下仍可以进行免疫组化和化学染料染色，对骨吸收机制的研究更加真实。
15、本专利技术提供的试剂盒，能够实现吸收坑的多维观察(三维或更多维度的分析)，而包被羟基磷灰石材料的孔板材料由于太薄只能看到吸收面积，没有厚度，而且潜在的吸收坑的厚度差异容易被忽视。
16、此外，本专利技术提供的试剂盒在破骨细胞骨吸收检测或筛选骨吸收药物中具有良好的应用前景。
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1.一种用于骨吸收检测的试剂盒，其特征在于，其包括：多孔板、由蛋壳制备的骨吸收检测材料。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述多孔板设置有多个细胞培养孔，所述骨吸收检测材料设置于所述细胞培养孔内。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：免疫组化试剂和/或活性染料；
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：细胞清除剂，所述细胞清除剂的有效成分为弱碱试剂；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述弱碱的pH小于7.8～8.5。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述骨吸收检测材料是由蛋壳经过去膜制得；
7.如权利要求1-6任一项所述的试剂盒在破骨细胞骨吸收检测或筛选骨吸收药物中的应用，其特征在于，所述应用包括如下任意一种应用方式：
8.骨吸收检测材料的制备方法，其特征在于，其包括如下(1)-(3)任一项所示的方法：
9.根据权利要求8所述的骨吸收检测材料的制备方法，其特征在于，所述方法还包括：根据待减薄的蛋壳的厚度
10.根据权利要求8所述的骨吸收检测材料的制备方法，其特征在于，按照(1)-(3)任一项所示的方法对蛋壳进行处理后，还包括对处理后的蛋壳进行切割。
...【技术特征摘要】
1.一种用于骨吸收检测的试剂盒，其特征在于，其包括：多孔板、由蛋壳制备的骨吸收检测材料。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述多孔板设置有多个细胞培养孔，所述骨吸收检测材料设置于所述细胞培养孔内。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：免疫组化试剂和/或活性染料；
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：细胞清除剂，所述细胞清除剂的有效成分为弱碱试剂；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述弱碱的ph小于7.8～8.5。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：赖萍琳，
申请(专利权)人：南方医科大学第三附属医院广东省骨科研究院，
类型：发明
国别省市：
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