【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于预防或治疗有需要的受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的aav载体，所述aav载体包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(frataxin，fxn)的核酸。
技术介绍
1、弗里德赖希共济失调是常染色体隐性、进行性、神经退行性运动障碍，其中典型的发作年龄介于10岁与15岁之间。临床表现包括步态不稳和频繁跌倒，对活动和协调产生进行性影响。
2、弗里德赖希共济失调由9q214上常染色体fxn基因的突变引起。fxn蛋白被引导至线粒体(lupoli 2018；febs lett,592:718-27)。百分之九十六(96％)的fa患者对于第一内含子内的gaa三核苷酸扩增是纯合的，其通过涉及表观遗传变化的机制引起转录沉默，从而最终导致与正常健康受试者相比，fxn信使rna(mrna)的水平降低。受影响的个体在所有组织中具有fxn蛋白的减少(puccio 2000；hum mol genet,9:887-92)。其余受试者(4％)对于gaa扩增和其他等位基因上更经典的突变(点突变、小缺失或插入)是复合杂合的，从而导致fxn蛋白的功能丧失(campuzano 1996；science,271:1423-7)。
3、fxn基因由分布在85kb基因组dna上的七个外显子构成(pandolfo 2006；geneticinstabilities and neurological diseases:第17章)。主要转录物(1.3kb)由位于40kb区间内的前5个外显子
4、fxn水平降低导致线粒体功能障碍，伴有铁-硫(fe-s)簇酶活性(顺乌头酸酶和呼吸链复合物i-iii)丧失、线粒体铁积累和对氧化应激的敏感性增加(adinolfi 2009；natstruct mol biol,16:390-6；huynen2001；hum mol genet,10:2463-8；muhlenhoff 2002；jbiol chem,277:29810-6；puccio 2001；schmucker 2011；plos one,6:e16199；tsai 2010；biochemistry,49:9132-9)。
5、公开了一种编码人fxn基因的aav载体。将该aav载体静脉内输注。rh10衣壳经特意设计以靶向递送至心肌，在心肌中，该衣壳递送fxn基因的正常拷贝，从而导致心肌细胞中fxn的表达增加。假设该载体可稳定和/或改善与fa相关的心肌病，如通过心肺运动试验(cpet)和心脏磁共振成像(mri)所测量的。
技术实现思路
1、本公开提供了一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(aav)载体，其中所述载体以约1.0×1010gc/kg至约6.0×1014gc/kg范围内的剂量静脉内施用于所述受试者。
2、本公开提供了一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(aav)载体，其中所述aav载体包含seq idno:9中所示的核酸序列，其中所述载体以约1.8×1011gc/kg或约5.6×1011gc/kg的剂量静脉内施用于所述受试者。
3、在一些方面，aav载体在5'至3'方向上包含：第一aav itr序列；增强子序列；启动子序列；嵌合内含子；编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列；polya序列；和第二itr序列。
4、在一些方面，编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列包含seq idno:3中所示的核酸序列。在一些方面，第一itr序列包含seq id no:1中所示的核酸序列。在一些方面，第二itr序列包含seq id no:2中所示的核酸序列。在一些方面，增强子序列包含seq id no:5中所示的核酸序列。在一些方面，启动子序列包含seq id no:6中所示的核酸序列。在一些方面，polya序列包含seq id no:8中所示的核酸序列。在一些方面，aav载体包含seq id no:9中所示的核酸序列。
5、在一些方面，aav载体被包装为包含aav衣壳蛋白的aav病毒载体。在一些方面，aav衣壳蛋白是aav1衣壳蛋白、aav2衣壳蛋白、aav4衣壳蛋白、aav5衣壳蛋白、aav6衣壳蛋白、aav7衣壳蛋白、aav8衣壳蛋白、aav9衣壳蛋白、aav10衣壳蛋白、aav11衣壳蛋白、aav12衣壳蛋白、aav13衣壳蛋白、aavphp.b衣壳蛋白、aavrh74衣壳蛋白或aavrh.10衣壳蛋白。在一些方面，aav衣壳蛋白是aavrh10衣壳蛋白。
6、在一些方面，剂量为约1.8×1011gc/kg。在一些方面，剂量为约5.6×1011gc/kg。
7、在一些方面，受试者还被施用泼尼松。在一些方面，泼尼松如下施用：在aav病毒载体施用前24小时每天一次以40mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第1周至第8周每天一次以40mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第9周每天一次以30mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第10周每天一次以20mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第11周每天一次以10mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第12周每天一次以5mg的剂量施用；在aav病毒载体施用后第13周每天一次以2.5mg的剂量施用；以及在aav病毒载体施用后第14周每隔一天以2.5mg的剂量施用。
8、在一些方面，静脉内施用在约60分钟内进行。
9、在一些方面，相对于aav载体施用前的基线，受试者在aav载体施用后经历峰值vo2增加。
10、在一些方面，在aav载体施用后约12周、约24周、约36周、约52周、约18个月、约2年、约3年、约4年和/或约5年测量受试者中的峰值vo2。在一些方面，通过心肺运动试验(cpet)使用手臂测力法(arm ergometry)来测量峰值vo2。...
【技术保护点】
1.一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(FXN)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(AAV)载体，其中所述AAV载体在5'至3'方向上包含：
2.一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(FXN)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(AAV)载体，其中所述AAV载体包含SEQ ID NO:9中所示的核酸序列，其中所述载体以约1.8×1011gc/kg或约5.6×1011gc/kg的剂量静脉内施用于所述受试者。
3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述编码弗里德赖希共济失调蛋白(FXN)多肽的核酸序列包含SEQ ID NO:3中所示的核酸序列。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一ITR序列包含SEQ ID NO:1中所示的核酸序列。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二ITR序列包含SEQ ID NO:2中所示的核
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述增强子序列包含SEQ ID NO:5中所示的核酸序列。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述启动子序列包含SEQ ID NO:6中所示的核酸序列。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述polyA序列包含SEQ ID NO:8中所示的核酸序列。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述AAV载体包含SEQ ID NO:9中所示的核酸序列。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述AAV载体被包装为包含AAV衣壳蛋白的AAV病毒载体。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳蛋白是AAV1衣壳蛋白、AAV2衣壳蛋白、AAV4衣壳蛋白、AAV5衣壳蛋白、AAV6衣壳蛋白、AAV7衣壳蛋白、AAV8衣壳蛋白、AAV9衣壳蛋白、AAV10衣壳蛋白、AAV11衣壳蛋白、AAV12衣壳蛋白、AAV13衣壳蛋白、AAVPHP.B衣壳蛋白、AAVrh74衣壳蛋白或AAVrh.10衣壳蛋白。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述AAV衣壳蛋白是AAVrh10衣壳蛋白。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量为约1.8×1011gc/kg。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量为约5.6×1011gc/kg。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者还被施用泼尼松。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述泼尼松如下施用：
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述静脉内施用在约60分钟内进行。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于AAV载体施用前的基线，所述受试者在AAV载体施用后经历峰值VO2增加。
19.如权利要求18所述的方法，其中在AAV载体施用后约12周、约24周、约36周、约52周、约18个月、约2年、约3年、约4年和/或约5年测量所述受试者中的所述峰值VO2。
20.如权利要求18或19所述的方法，其中通过心肺运动试验(CPET)使用手臂测力法来测量所述峰值VO2。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于AAV载体施用前的基线，所述受试者在AAV载体施用后经历左心室质量指数(LVMi)降低。
22.如权利要求21所述的方法，其中在AAV载体施用后约12周、约24周、约36周、约52周、AAV载体施用后约18个月、约2年、约3年、约4年和/或约5年测量所述LVMi降低。
23.如权利要求21或22所述的方法，其中通过心脏MRI来测量所述LVMi降低。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于AAV载体施用前的基线，所述受试者在AAV载体施用后经历以下中的一者或多者：整体纵向应变降低、每搏输出量增加、左心室射血分数(LVEF)增加和心脏纤维化降低或稳定，如通过心脏MRI进行测量的。
25.如权利要求24所述的方法，其中通过心脏MRI进行的测量发生在AAV载体施用后约12周、约24周、约36周、约52周、约18个月、约2年、约3年、约4年和/或约5年。
26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于AAV载体施用前的基线，所述受试者在AAV载体施用后经历血清NTproBNP、hsTNT和CK-MB水平降低。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(aav)载体，其中所述aav载体在5'至3'方向上包含：
2.一种治疗或预防受试者的与弗里德赖希共济失调相关的心肌病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列或其片段的腺相关病毒(aav)载体，其中所述aav载体包含seq id no:9中所示的核酸序列，其中所述载体以约1.8×1011gc/kg或约5.6×1011gc/kg的剂量静脉内施用于所述受试者。
3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述编码弗里德赖希共济失调蛋白(fxn)多肽的核酸序列包含seq id no:3中所示的核酸序列。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一itr序列包含seq id no:1中所示的核酸序列。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二itr序列包含seq id no:2中所示的核酸序列。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述增强子序列包含seq id no:5中所示的核酸序列。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述启动子序列包含seq id no:6中所示的核酸序列。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述polya序列包含seq id no:8中所示的核酸序列。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述aav载体包含seq id no:9中所示的核酸序列。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述aav载体被包装为包含aav衣壳蛋白的aav病毒载体。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述aav衣壳蛋白是aav1衣壳蛋白、aav2衣壳蛋白、aav4衣壳蛋白、aav5衣壳蛋白、aav6衣壳蛋白、aav7衣壳蛋白、aav8衣壳蛋白、aav9衣壳蛋白、aav10衣壳蛋白、aav11衣壳蛋白、aav12衣壳蛋白、aav13衣壳蛋白、aavphp.b衣壳蛋白、aavrh74衣壳蛋白或aavrh.10衣壳蛋白。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述aav衣壳蛋白是aavrh10衣壳蛋白。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量为约1.8×1011gc/kg。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量为约5.6×1011gc/kg。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者还被施用泼尼松。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述泼尼松如下施用：
17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述静脉内施用在约60分钟内进行。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于aav载体施用前的基线，所述受试者在aav载体施用后经历峰值vo2增加。
19.如权利要求18所述的方法，其中在aav载体施用后约12周、约24周、约36周、约52周、约18个月、约2年、约3年、约4年和/或约5年测量所述受试者中的所述峰值vo2。
20.如权利要求18或19所述的方法，其中通过心肺运动试验(cpet)使用手臂测力法来测量所述峰值vo2。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中相对于aav载体施用前的基线，所述受试者在aav载体施用后经历左心室质量指数(lvmi)降低。
22.如权利要求21所述的方法，其中在aav载...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·G·克里斯塔尔，S·M·卡明斯基，D·松迪，J·A·巴斯，R·卡纳，
申请(专利权)人：康奈尔大学，
类型：发明
国别省市：
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