本发明专利技术公开了一种基于m<supgt;7</supgt;G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物及其筛选方法。该方法包含：步骤1，免疫印迹法检测m<supgt;7</supgt;G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的表达；步骤2，实时定量PCR法检测m<supgt;7</supgt;G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的表达；步骤3，PI染色和流式细胞术检测细胞死亡情况；步骤4，探究m<supgt;7</supgt;G RNA甲基化对铜死亡的影响；步骤5，免疫组化检测m<supgt;7</supgt;G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的表达；步骤6，筛选出肺腺癌诊断标志物。本发明专利技术还提供了该方法筛选的肺腺癌诊断标志物。本发明专利技术提供的标志物，适于临床广泛应用，有望改善肺腺癌患者的诊断和治疗效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物医学领域的用于肺腺癌诊断的标记物及其筛选方法，具体地，涉及一种基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物及其筛选方法。
技术介绍
1、肺腺癌(lung adenocarcinoma)是肺癌的一种，属于非小细胞癌。不同于鳞状细胞肺癌，肺腺癌较容易发生于女性及抽烟者。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部x线检查时被发现。表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移。淋巴转移则发生较晚。
2、肺腺癌的鉴别诊断首先应与肺其他类型的肿瘤相鉴别，其次应与胸膜间皮瘤鉴别，主要依赖病理检查鉴别，如获得活组织病理困难，则依靠生物学行为及影像学表现相鉴别，但往往鉴别困难。
3、除了根据影像学进行初步判断以外，对于肺腺癌特异性标志物的研究和确定，能够进一步提高诊断的准确性，并可以完成定性定量的检测。
4、肿瘤标志物又称肿瘤标记物，是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对治疗反应的一类物质。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到。肿瘤标志物非常多，但是单个标记物的敏感性或特异性往往偏低，不能满足临床要求，因此寻找敏感性和特异性都比较高的肿瘤标志物具有非常重要的意义。
r/>技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种用于肺腺癌诊断的标记物及其筛选方法，能够解决现有技术中存在的问题，基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白，筛选得到简便、快速、敏感性与特异性强的标记物，适用于临床广泛应用，有望改善肺腺癌患者的诊断和治疗效果。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其中，该方法包含：步骤1，利用免疫印迹法检测细胞中m7grna甲基化相关蛋白和铜死亡相关蛋白的表达水平；步骤2，通过实时定量pcr法检测细胞及组织样本中m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的表达水平；步骤3，通过pi染色和流式细胞术检测wt和m7g细胞的细胞死亡情况；步骤4，通过试验探究m7g rna甲基化对铜死亡发生的影响；步骤5，通过免疫组化检测组织中m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的表达水平；步骤6，筛选出基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物。
3、进一步地，所述的方法中，m7g rna甲基化相关蛋白和铜死亡相关蛋白包括：fdx1、dlst、sdhb、pold1、mettl1、gapdh、lias、dlat、hsp70、dld、wdr4、gls、pdha1、pdhb、eif3d、dcps、lipt1。
4、进一步地，所述的步骤1中，通过免疫印迹法检测各肺癌细胞系a549、h1975、h838、h1299、pc9、abc-1中m7g rna甲基化相关蛋白的表达情况。
5、进一步地，所述的步骤1中，还通过免疫印迹法验证了在对照细胞和mettl1中wdr4共同过表达的m7g细胞中mettl1和wdr4的表达水平，以及通过免疫印迹法检测对照细胞和m7g细胞中铜死亡相关蛋白的表达水平。
6、进一步地，所述的步骤2中，采用rt-qpcr检测对照组和m7g细胞中铜死亡相关基因的表达水平，还通过rt-qpcr检测了癌旁正常肺组织和肺腺癌组织中m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的表达水平。
7、进一步地，所述的步骤2中，rt-qpcr采用的引物序列包括seq id no.1～seq idno.30。
8、进一步地，所述的步骤3中，通过pi染色和流式细胞术检测不同处理下wt和m7g细胞的细胞死亡情况；不同处理包括采用dmso处理，采用浓度为100nm的铜死亡诱导剂elesclomol和1μm的cucl2处理，以及采用浓度为200nm的铜死亡诱导剂elesclomol和1μm的cucl2处理。
9、进一步地，所述的步骤4中，采用空载体或mettl1和wdr4均过表达的h1299细胞构建cdx小鼠模型实验，并在植入后第10天腹腔注射铜死亡诱导剂elesclomol，剂量频率为每周4次，连用15天，最后观察药物作用效果。
10、进一步地，所述的步骤5中，通过免疫组化法检测癌旁正常肺组织和肺腺癌组织中m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的表达情况。
11、本专利技术还提供了一种上述的方法筛选的作为肺腺癌诊断标志物的m7grna甲基化和铜死亡相关蛋白，其中，所述的肺腺癌诊断标志物包括lipt1、lias、dld蛋白，以及dlat、pdha1、pdhb蛋白。
12、本专利技术提供的基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物及其筛选方法具有以下优点：
13、本专利技术提供了一种基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌(luad)诊断标志组合物。该诊断标志组合物的优势在于其操作简便、成本低廉且结果准确可靠，为肺腺癌的早期诊断和治疗选择提供了重要依据。通过检测患者样本中的m7g甲基化和铜死亡相关蛋白水平，可以有效实现早期干预和治疗。因此，本专利技术的诊断标志组合物适用于临床广泛应用，有望改善肺腺癌患者的诊断和治疗效果。
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【技术保护点】
1.一种基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，该方法包含：
2.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的方法中，m7G RNA甲基化相关蛋白和铜死亡相关蛋白包括：FDX1、DLST、SDHB、POLD1、METTL1、GAPDH、LIAS、DLAT、HSP70、DLD、WDR4、GLS、PDHA1、PDHB、EIF3D、DCPS、LIPT1。
3.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤1中，通过免疫印迹法检测各肺癌细胞系A549、H1975、H838、H1299、PC9、ABC-1中m7G RNA甲基化相关蛋白的表达情况。
4.如权利要求3所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤1中，还通过免疫印迹法验证了在对照细胞与METTL1和WDR4共同过表达的m7G细胞中METTL1和WDR4的表达水平，以及通过免疫印迹法检测对照细胞和m7G细胞中铜死亡相关蛋白的表达水平。
5.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤2中，采用RT-qPCR检测对照组和m7G细胞中铜死亡相关基因的表达水平，还通过RT-qPCR检测了癌旁正常肺组织和肺腺癌组织中m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的表达水平。
6.如权利要求5所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤2中，RT-qPCR采用的引物序列包括SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.30。
7.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤3中，通过PI染色和流式细胞术检测不同处理下WT和m7G细胞的细胞死亡情况；不同处理包括采用DMSO处理，采用浓度为100nM的铜死亡诱导剂Elesclomol和1μM的CuCl2处理，以及采用浓度为200nM的铜死亡诱导剂Elesclomol和1μM的CuCl2处理。
8.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤4中，采用空载体或METTL1和WDR4均过表达的H1299细胞构建CDX小鼠模型实验，并在植入后第10天腹腔注射铜死亡诱导剂Elesclomol，剂量频率为每周4次，连用15天，最后观察药物作用效果。
9.如权利要求1所述的基于m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤5中，通过免疫组化法检测癌旁正常肺组织和肺腺癌组织中m7G RNA甲基化和铜死亡相关蛋白的表达情况。
10.一种如权利要求1～9中任意一项所述的方法筛选的作为肺腺癌诊断标志物的m7GRNA甲基化和铜死亡相关蛋白，其特征在于，所述的肺腺癌诊断标志物包括LIPT1、LIAS、DLD蛋白，以及DLAT、PDHA1、PDHB蛋白。
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【技术特征摘要】
1.一种基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，该方法包含：
2.如权利要求1所述的基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的方法中，m7g rna甲基化相关蛋白和铜死亡相关蛋白包括：fdx1、dlst、sdhb、pold1、mettl1、gapdh、lias、dlat、hsp70、dld、wdr4、gls、pdha1、pdhb、eif3d、dcps、lipt1。
3.如权利要求1所述的基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤1中，通过免疫印迹法检测各肺癌细胞系a549、h1975、h838、h1299、pc9、abc-1中m7g rna甲基化相关蛋白的表达情况。
4.如权利要求3所述的基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤1中，还通过免疫印迹法验证了在对照细胞与mettl1和wdr4共同过表达的m7g细胞中mettl1和wdr4的表达水平，以及通过免疫印迹法检测对照细胞和m7g细胞中铜死亡相关蛋白的表达水平。
5.如权利要求1所述的基于m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的肺腺癌诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的步骤2中，采用rt-qpcr检测对照组和m7g细胞中铜死亡相关基因的表达水平，还通过rt-qpcr检测了癌旁正常肺组织和肺腺癌组织中m7g rna甲基化和铜死亡相关蛋白的表达水平。
6.如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丽芳，黄依雯，曹雷群，徐鑫，
申请(专利权)人：上海市胸科医院，
类型：发明
国别省市：
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