【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽药物，具体涉及一种新型双靶点胰岛素类似物及其制备方法和应用。
技术介绍
1、胰高糖素样肽-1(glucagon-likepeptide-1，glp-1)是一种主要由肠道l细胞所产生的激素，属于肠促胰素(incretin)。glp-1以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素，并减少胰岛α细胞分泌胰高糖素，从而降低血糖。胰岛素(insulin)是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来治疗糖尿病。
2、利拉鲁肽由novonordisk公司研发，由31个氨基酸组成，相对分子量为3751da，可通过促进胰岛β细胞分泌胰岛素和抑制胰岛α细胞释放胰高血糖素的方式来降低葡萄糖浓度，达到治疗ii型糖尿病的目的。利拉鲁肽的结构与内源性glp-1的相似性高达97％，是在天然glp-1分子结构的基础上，使用精氨酸取代第34位赖氨酸，并增添一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链到第26位赖氨酸上而获得的。利拉鲁肽与白蛋白的结合率在98％以上，且对dpp-iv降解具有较高的抵抗力，半衰期较长，每日注射1次就可实现24h控制血糖的效果。
3、德谷胰岛素由novonordisk公司研发，于2012年10月在日本上市，批准治疗1、2型糖尿病。德谷胰岛素是在人胰岛素的基础上，去掉b30位的苏氨酸，通过1个l-γ-谷氨酸连接子，将1个16碳脂肪二酸连接b29位赖氨酸上获得的
4、申请人的在先专利cn117771347a提供了glp-1类似物与胰岛素类似物药物组合物制剂及其制备方法和应用。由于glp-1类似物和胰岛素类似物均显示出了理想的降糖效果，该方案尝试将两种多肽药物制备成为一种混合制剂。但是，上述混合制剂还是需要分别制备两种多肽药物，工艺路线相对复杂，并且每种多肽药物特别是胰岛素的稳定性、长效性和作用时间有待进一步提升。亟需对glp-1类似物和胰岛素类似物制剂进行进一步改进，以简化操作工艺和提升药品质量。
技术实现思路
1、本专利技术意在提供一种新型双靶点胰岛素类似物，以解决现有技术中含有glp-1类似物与胰岛素类似物的多肽药物制备工艺复杂以及药物稳定性和长效性不理想的技术问题。
2、为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种新型双靶点胰岛素类似物，其前体的序列的通式为：glp-1序列-fc序列-胰岛素序列；glp-1序列如seq id no.1所示，fc序列如seq id no.2所示，胰岛素序列如seq idno.3所示。
4、进一步，glp-1序列和fc序列之间设置有g4s连接序列。
5、进一步，glp-1序列的n端连接有组氨酸标签。
6、进一步，新型双靶点胰岛素类似物，其前体的氨基酸序列如seq id no.4所示。
7、进一步，新型双靶点胰岛素类似物，其前体的核苷酸序列如seq id no.5所示。
8、进一步，前体经过酶切处理之后，获得双靶点胰岛素类似物；酶切处理的方法为：使用羧肽酶b和kex2酶对前体进行酶切处理，获得双靶点胰岛素类似物；其氨基酸序列如seq id no.7所示。
9、本技术方案还提供了一种新型双靶点胰岛素类似物的制备方法，其特征在于：将序列如seq id no.6所示的dna片段整合在空载体上，获得表达载体；将表达载体转入细菌，获得工程菌；诱导工程菌表达序列如seq id no.4所示的融合蛋白；再经提取纯化和酶切处理之后，获得双靶点胰岛素类似物。
10、进一步，酶切处理的方法为：在ph7.5-7.6、室温条件下，对seq id no.4所示的融合蛋白，使用羧肽酶b和kex2酶进行酶切处理16-24h；羧肽酶b和kex2酶的质量之和与融合蛋白的质量比为1：200，羧肽酶b和kex2酶的质量比为1：1。
11、本技术方案还提供了一种新型双靶点胰岛素类似物在制备改善心血管疾病的药物、控制体重的药物中的应用。
12、本技术方案还提供了一种新型双靶点胰岛素类似物在制备控制血糖的药物中的应用。
13、综上所述，本技术方案的原理在于：
14、双靶点胰岛素，也称为双作用胰岛素或双效胰岛素，是一种糖尿病治疗药物，旨在模拟人体内两种激素—胰岛素和胰高血糖素样肽-1(glp-1)的作用。这种药物结合了胰岛素的血糖降低作用和glp-1受体激动剂的额外益处，从而提供了一种更加全面的糖尿病治疗方案。以下是双靶点胰岛素的主要作用机制：
15、(1)胰岛素的作用：胰岛素是一种由胰腺β细胞分泌的激素，主要功能是促进细胞吸收血糖，用于能量或转化为脂肪储存。通过增加外源性胰岛素，双靶点胰岛素有助于降低血糖水平，尤其是在餐后血糖峰值时。
16、(2)glp-1受体激动剂的作用：glp-1是一种在肠道内分泌的激素，它在血糖控制中发挥作用，包括增强胰岛素分泌(在血糖水平升高时)、减少胰高血糖素分泌(一种提高血糖的激素)、延缓胃排空以及抑制食欲。这些效果有助于降低餐后血糖水平，并可能对体重管理产生积极影响。
17、通过这两种机制的结合，双靶点胰岛素旨在提供更有效的血糖控制，同时减少传统胰岛素治疗中常见的副作用，如体重增加和低血糖风险。此外，glp-1受体激动剂的加入可能有助于改善胰岛β细胞的功能，并对心血管健康产生积极影响。
18、本技术方案的有益效果在于：
19、双靶点胰岛素(也称为双作用胰岛素或胰岛素-glp-1受体激动剂复合制剂)结合了胰岛素和glp-1受体激动剂的作用，旨在提供比传统胰岛素更全面的糖尿病治疗效果。这种复合制剂的主要优势包括：
20、(1)改善血糖控制：双靶点胰岛素通过同时模拟胰岛素和glp-1的作用，可以更有效地控制血糖水平。glp-1成分有助于增强胰岛素的分泌、降低胰高血糖素的分泌、减慢胃排空速度，并可能改善胰岛β细胞的健康。这种双重作用可提供更稳定的血糖控制，并减少血糖波动。
21、(2)降低低血糖风险：传统胰岛素治疗有时会导致低血糖(低血糖症)事件，尤其是在努力控制血糖水平非常接近正常范围时。双靶点胰岛素因其glp-1成分的存在，可能有助于降低低血糖的风险，因为glp-1的胰岛素释放作用是葡萄糖依赖性的，即只有在血糖水平升高时才会增强胰岛素分泌。
22、(3)体重管理：许多使用传统胰岛素的患者会经历体重增加，这是由于胰岛素促进葡萄糖转化为脂肪和减少脂肪分解的作用。双靶点胰岛素中的glp-1成分可以帮助控制体重，甚至可能导致体重下降，因为glp-1可以增加饱腹感，减少食物摄入量，并可能本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的序列的通式为：GLP-1序列-Fc序列-胰岛素序列；GLP-1序列如SEQ ID NO.1所示，Fc序列如SEQ ID NO.2所示，胰岛素序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：GLP-1序列和Fc序列之间设置有G4S连接序列。
3.根据权利要求2所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：GLP-1序列的N端连接有组氨酸标签。
4.根据权利要求3所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求4所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
6.根据权利要求6所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：前体经过酶切处理之后，获得双靶点胰岛素类似物；酶切处理的方法为：使用羧肽酶B和Kex2酶对前体进行酶切处理，获得双靶点胰岛素类似物；其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
7.根
8.根据权利要求7所述的一种新型双靶点胰岛素类似物的制备方法，其特征在于：酶切处理的方法为：在pH7.5-7.6、室温条件下，对SEQ ID NO.4所示的融合蛋白，使用羧肽酶B和Kex2酶进行酶切处理16-24h；羧肽酶B和Kex2酶的质量之和与融合蛋白的质量比为1：200，羧肽酶B和Kex2酶的质量比为1：1。
9.根据权利要求1-6任一项所述的一种新型双靶点胰岛素类似物在制备改善心血管疾病的药物、控制体重的药物中的应用。
10.根据权利要求1-6任一项所述的一种新型双靶点胰岛素类似物在制备控制血糖的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的序列的通式为：glp-1序列-fc序列-胰岛素序列；glp-1序列如seq id no.1所示，fc序列如seq id no.2所示，胰岛素序列如seq id no.3所示。
2.根据权利要求1所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：glp-1序列和fc序列之间设置有g4s连接序列。
3.根据权利要求2所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：glp-1序列的n端连接有组氨酸标签。
4.根据权利要求3所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的氨基酸序列如seq id no.4所示。
5.根据权利要求4所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：其前体的核苷酸序列如seq id no.5所示。
6.根据权利要求6所述的一种新型双靶点胰岛素类似物，其特征在于：前体经过酶切处理之后，获得双靶点胰岛素类似物；酶切处理的方法为：使用羧肽酶b和kex2酶对前体进行酶切处理，获得双靶点胰岛素类似...
【专利技术属性】
技术研发人员：李红亮，罗吉鸿，陈俊林，
申请(专利权)人：乐普健糖药业重庆有限公司，
类型：发明
国别省市：
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