【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物样品保存液，具体涉及一种常温状态下，痰液样本微生物菌群及核酸dna保存液。
技术介绍
1、痰液检验包括显微检查、涂片检查、病原微生物检查和高通量ngs方法，可以辅助诊断或确诊某些呼吸系统疾病。病原体分离培养法是确定下呼吸道感染病原体的“金标准”，是临床检验科进行呼吸道分泌物检测的常规方法。而高通量ngs方法既可以鉴别可培养的病原微生物也可以鉴别不可培养的病原微生物，还可以对上呼吸道菌群的多样性进行分析，辅助临床诊断。随着分子生物学技术的发展，tngs、mngs、pcr等分子生物学检测方法可以定性确诊病原体感染，具快速、灵敏、特异性强的优点。该方法需要对痰液提取核酸后进行检测。但痰液中有大量黏液，其内细胞成分不易分离，对核酸提取存在很大困难。而痰液样本不能采集后立刻检测则时间过长有可能会被污染或细菌生长、微生物死亡导致核酸降解等导致检验结果不准确，原样本微生物的组成及丰度也会发生变化无法反映真实情况。采集的样本一般置于-20℃或更低的温度下保存，对样本的转运也会带来很大的不便。肺部感染的微生物可以通过痰液样本的核酸检测进行分析，但是在我国部分地区，由于当地医疗条件差，一些样本需要运输到具备检测能力的医院进行检测。或者地形复杂，崎岖的山路等长时间的运输中，痰液样本中的细菌会进行破裂，导致dna释放。因此，dna在保存液中的稳定性，对痰液样本中微生物菌群多态性的分析及重点微生物的检测具有重要意义。因此，痰液核酸提取前使样本液化均质化处理、防止核酸降解和样本运输非常关键。
2、人类呼吸道菌群组成一个复杂
3、cn111926059a公开了一种痰液中微生物核酸保存液，包括如下按质量份计算的组份：核酸酶抑制剂15～30％；ph值稳定剂1.5～5％；螯合剂0.8～1.5％；粘液溶解剂0.05～0.15％；十二烷基肌氨酸钠0.1～0.5％；异丙醇10～20％；丙三醇2～15％；余量为灭菌水。cn111218444a公开了一种痰液保存液，包含下述含量的下述组分：异硫氰酸胍118g~236g/l，8-羟基喹啉0.01~0.5m，十二烷基肌氨酸钠1 ~10 g/l，乙二胺四乙酸1~10mm，氯化钾1~10g/l，丙三醇1%~10%v/v，异丙醇5~20%v/v。cn111020001a公开了一种唾液保存液，包括如下组分：edta 1-10mmol/l、tris-hcl 1-50mmol/l、氯化钠10-100mmol/l、山梨酸钠0.1-3％(w/v)、双乙酸钠0.1-3％(w/v)、proclin300 0.01-0.1％(v/v)、tween20 0.1-1％(v/v)、np400.1-1％(w/v)、sds 0.1-2％(w/v)。然而上述专利的保存液都需要在低温下才能使用。cn111944876a公开了一种用于痰液的保存液，每1000ml所述保存液包括如下组分：0.5-3.5g二硫苏糖醇、5.0-30g三羟甲基氨基甲烷、0.1-10.5g氯化钠、0.01-2.0g三氯化磷、0.01-2.5g磷酸氢二钠、0.01-2.5g磷酸二氢钾、0.2-3.5g异硫氰酸胍、余量为无核酸水，ph值为5.5-8.5。该专利对保存液配方进行优化配伍，提高了保温温度，但仍需2-8℃保温，且在2-8℃只能保存2-3天，超低温(-70℃)下才能超过10天，仍存在使用上的不便。而且，以上保护液含有异硫氰酸胍有毒成份，对身体健康有害，存在安全运输风险。
4、cn116287120a公开了一种可常温保存且可60℃高温下保存唾液样本中人源细胞核酸dna与rna的保存液，包括以下组分：1，2-环己烷二胺四乙酸cdta，羟基乙基哌嗪-2-乙磺酸，sds，氯化钠，乙醇和tween-20；所述的保存液中，所述1，2-环己烷二胺四乙酸的摩尔浓度为0.1-10m，所述羟基乙基哌嗪-2-乙磺酸的摩尔浓度为0.01-1m，所述sds的百分含量为0.1％-20％v/v，所述氯化钠的百分含量为0.1％-1％w/v,所述乙醇的百分含量为5％－80％v/v,所述tween-20的摩尔浓度为0.5－1m，所述保存液的ph为6.0-10.0。该专利保存液可以在60℃条件下稳定保存唾液中的核酸7天。
5、cn112438253a公开了一种唾液保存液，包括细胞稳定剂、核酸酶抑制剂、表面活性剂、蛋白质变性剂和防腐剂；所述防腐剂为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮中的一种或两种组合。该专利通过加入防腐剂使保存液保存温度提高至室温。
6、cn106561631a公开了一种唾液保存液，包括：dna稳定剂，所述dna稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠盐和酒石酸；微生物抑制剂，所述微生物抑制剂包括青霉素、链霉素和遗传霉素(g418)；以及缓冲液，包括te缓冲液；其中，以唾液保存液每升计，乙二胺四乙酸二钠盐(edta·2na)为1mm～10mm，酒石酸为26.65mm～66.63mm，青霉素为50u/ml～200u/ml，链霉素为86.00mm～343.9mm，遗传霉素(g418)为0.144mm～0.577mm，te缓冲液中的三羟甲基氨基甲烷-hcl(tris-hcl)为5mm～20mm。该专利通过加入微生物抑制剂维护细胞形态，使其不发生裂解，又能抑制微生物生长，可以常温条件下长期保存。但是需要将细胞裂解进而得到细胞中的核酸，增加提取的时间和程序。
7、由于菌群结构和dna保存环境不同的差异，上述专利在保持dna完整性的同时，没有考虑菌群的保存的多样性和完整性，往往dna完整性和菌群的完整性顾此失彼，不能兼顾。在保存过程中，菌群的种类以及比例会发生较大变化，甚至有些菌群消失，导致失去通过痰液菌群结构评估呼吸道疾病病程的检测和免疫评估能力的机会。
技术实现思路
1、基于上述背景，为了克服现有痰液保存液在菌群结构和dna难以同时得到很好的保存的问题。现有技术对于痰液样本的实用性较差，存在以下问题：难以常温保存，难以同时兼顾抑制核酸酶的活性和液化处理；抑菌效果差，微本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种痰液样本微生物菌群核酸DNA保存液，其特征在于，包括以下质量份的组分：0.5-2份三羟甲基氨基甲烷，0.2-1份粘液消化剂，3-6份N-辛基吡啶溴盐，20-50份固定剂，0.6-1.5份辅助固定剂，1-2份螯合剂，0.5-3份无机盐，所述螯合剂中包括至少50wt%的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸；所述辅助固定剂选自柠檬酸钠、柠檬酸钾中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸DNA保存液，其特征在于，包括以下质量份的组分：1.2-1.8份三羟甲基氨基甲烷，0.5-0.8份粘液消化剂，4-5份溴化N-辛基吡啶，0.7-1.5份无机盐，30-40份固定剂，0.8-1.3份辅助固定剂，1.3-1.8份螯合剂。
3.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸DNA保存液，其特征在于，所述粘液消化剂选自DTT、N-乙酰基-L-半胱氨酸、TCEP中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸DNA保存液，其特征在于，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化锂、硫酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。<...
【技术特征摘要】
1.一种痰液样本微生物菌群核酸dna保存液，其特征在于，包括以下质量份的组分：0.5-2份三羟甲基氨基甲烷，0.2-1份粘液消化剂，3-6份n-辛基吡啶溴盐，20-50份固定剂，0.6-1.5份辅助固定剂，1-2份螯合剂，0.5-3份无机盐，所述螯合剂中包括至少50wt%的1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸；所述辅助固定剂选自柠檬酸钠、柠檬酸钾中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸dna保存液，其特征在于，包括以下质量份的组分：1.2-1.8份三羟甲基氨基甲烷，0.5-0.8份粘液消化剂，4-5份溴化n-辛基吡啶，0.7-1.5份无机盐，30-40份固定剂，0.8-1.3份辅助固定剂，1.3-1.8份螯合剂。
3.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸dna保存液，其特征在于，所述粘液消化剂选自dtt、n-乙酰基-l-半胱氨酸、tcep中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的痰液样本微生物菌群核酸dna保存液，其特征在于，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化锂、硫酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。
5.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：张泓泰，古勇，辛若雷，曹汴川，李传友，罗明，陈红梅，庞艳华，田丽丽，赵维国，鹿锋信，
申请(专利权)人：北京市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：
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