【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，涉及病毒性脑膜炎相关病原体，如骨髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型、柯萨奇病毒a6、柯萨奇病毒a10、腮腺炎病毒的检测并进行区分的组合物和用途。
技术介绍
1、手足口病(hand-foot-mouth disease,hfmd)是由肠道病毒引起的一种传染病，近年来的流调数据发现柯萨奇病毒a6(coxsackievirus a6，cv a6)和柯萨奇病毒a10型(coxsackievirus a10，cv a10)的感染病例显著升高，在部分地区已超过肠道病毒71型(ev71)和cv a16成为导致hfmd的主要病原体。大多数cva6和cva10感染导致儿童出现轻度的自限性发作(发热和疱疹性咽峡炎)，但在某些情况下可导致严重的神经系统疾病和死亡。其中神经系统感染则主要表现为神经反射异常，如频繁惊跳、共济失调、眼球震颤、眼球运动障碍、肢体抖动或头痛等。有研究认为，病毒通过运动神经进而侵犯中枢神经系统、造成神经损害，而在病毒侵犯中枢神经系统过程中，神经组织小血管内皮受损，出现广泛的血管周围及实质细胞炎症、血栓等，引发缺血、梗死，同时小脑、脑干、大脑皮质等部位受损，进而引发频繁惊跳，若中枢神经系统损害进一步加深，出现缺血、坏死，病变影响呼吸中枢，易引发神经源性肺水肿、呼吸异常，导致患儿病情进一步加重，进而引起脑炎等严重并发症，而脑干受损则易导致颅内压升高，进而引发呕吐。因此呕吐对于短期内患儿病情进展具有一定参考价值；而持续高热同样可加重中枢神经系统损伤，进而引发抽搐等一系列症状，不利
2、可见，柯萨奇病毒a6型、柯萨奇病毒a10型、肠道病毒71型、柯萨奇病毒16型、骨髓灰质炎病毒以及腮腺炎病毒都能够通过特定的方式参与脑炎疾病的发展。由于上述六种病原体诱发脑炎疾病的方式、病原体耐药性不同，因此需要针对具体的病原体制定有效的脑炎疾病治疗策略。
3、因此，本领域需求一种能够简单、快速地检测上述病原体并且灵敏度高、特异性好的产品，有利于为临床及时提供治疗策略。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种检测病毒性脑膜炎相关病原体的组合物，包括检测如下病毒性脑膜炎相关病原体中至少4种的上下游引物和探针：
2、如seq id no:1～3所示的检测骨髓灰质炎病毒的上下游引物和探针；
3、如seq id no:4～6所示的检测柯萨奇病毒a16型的上下游引物和探针；
4、如seq id no:7～9所示的检测肠道病毒71型的上下游引物和探针；
5、如seq id no:10～12所示的检测柯萨奇病毒a6的上下游引物和探针；
6、如seq id no:13～15所示的检测柯萨奇病毒a10的上下游引物和探针；或
7、如seq id no:16～18所示的检测腮腺炎病毒的上下游引物和探针。
8、本专利技术提供的联检组合物，主要利用多重荧光pcr分析方法对病毒性脑膜炎相关病原体进行检测，从而在单管反应体系中同时实现骨髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒a16型、肠道病毒71型、柯萨奇病毒a6、柯萨奇病毒a10、腮腺炎病毒中至少4种病原体的检测和区分，以便为后续治疗提供针对性策略。同时，本专利技术的组合物，其检测的灵敏度更高，达到200拷贝/ml，检测更为准确，有利于及时提供预防政策。
9、进一步地，本专利技术提供一种检测病毒性脑膜炎相关病原体的组合物，包括：
10、如seq id no:1～3所示的检测骨髓灰质炎病毒的上下游引物和探针；
11、如seq id no:4～6所示的检测柯萨奇病毒a16型上下游引物和探针；
12、如seq id no:7～9所示的检测肠道病毒71型的上下游引物和探针；
13、如seq id no:10～12所示的检测柯萨奇病毒a6的上下游引物和探针；
14、如seq id no:13～15所示的检测柯萨奇病毒a10的上下游引物和探针；以及
15、如seq id no:16～18所示的检测腮腺炎病毒的上下游引物和探针。
16、进一步地，所述组合物包括检测内标的上下游引物及探针。
17、在一些具体的实施方案中，内标是人源内标基因。
18、在一个具体的实施方案中，内标是人管家基因。
19、进一步地，本专利技术组合物不同探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
20、在本文中，“互不相同且互不干扰”是指组合物中每个探针所用的荧光基团是不一样的，并且不会影响彼此的检测，即可以利用不同的通道进行检测。例如可以使用atto425、quasar705、fam、hex、rox、cy5以及cy5.5等，这些基团吸光值不接近，能选择不同的通道，因而不会互相干扰。
21、进一步地，在一些实施方案中，本专利技术的组合物可以同时包括上述引物和探针对中的一对或多对。在本专利技术中，“对”是指检测一个靶点的互相匹配的上游、下游引物和探针。
22、本专利技术的组合物可以任意组合成检测对应6个靶点的任意组合形式。本领域技术人员可以根据需要进行组合，检测哪几个靶点，即把对应靶点的引物和探针对进行组合即可。这些组合形式均包括在本专利技术中。
23、举例来说，可以包括上述6对引物和探针中的任意5对，可以包括上述6对引物和探针中的任意4对，可以包括上述6对引物和探针中的任意3对，可以包括上述6对引物和探针中的任意2对，也可以包括上述6对引物和探针中的任意1对。
24、在一些具体的实施方案中，本专利技术组合物用于荧光pcr。
25、在一个具体的实施方案中，骨髓灰质炎病毒探针的荧光报告基团为atto 425；柯萨奇病毒a16型的探针的荧光报告基团为fam；肠道病毒71型探针的荧光报告基团为hex；柯萨奇病毒a6的探针的荧光报告基团为rox；柯萨奇病毒a10探针的荧光报告基团为cy5；腮腺炎病毒的探针的荧光报告基团为quasar 705。
26、进一步地，探针的3’末端还具有非荧光淬灭剂。
27、进一步地，探针的3’末端还具有淬灭基团，例如mgb、dabcyl bhq-0、bhq1、bhq2或bhq3。
28、进一步地，所述组合物中单条引物的用量为0.2～0.5μm；所述组合物中单条探针的用量为0.06～0.2μm。
29、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分分别存在于单独包装中。
30、在一个具体的实施方案中，本专利技术的组合物的各成分存在于同一个包装中。
31、进一步地，本专利技术的组合物的各成分以混合的形式存在。
32、第二方面，本专利技术提供了上述本专利技术的组合物本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测病毒性脑膜炎相关病原体的组合物，包括检测如下病毒性脑膜炎相关病原体中至少4种的上下游引物和探针：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物不同探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，骨髓灰质炎病毒探针的荧光报告基团为ATTO 425；柯萨奇病毒A16型的探针的荧光报告基团为FAM；肠道病毒71型探针的荧光报告基团为HEX；柯萨奇病毒A6的探针的荧光报告基团为ROX；柯萨奇病毒A10探针的荧光报告基团为CY5；腮腺炎病毒的探针的荧光报告基团为Quasar 705。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述探针的3’末端还具有淬灭基团。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的各成分以混合的形式存在。
7.权利要求1～6中任一项所述的组合物在制备检测病毒性脑膜炎相关病原体的试剂盒中的用途，其中，所述病毒性脑膜炎相关病原体的类型为骨髓灰质炎病毒、柯萨
8.一种检测病毒性脑膜炎相关病原体的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1～6中任一项所述的组合物。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、核酸扩增试剂中的至少一种。
10.一种组合物用于制备检测病毒性脑膜炎相关病原体的试剂的用途，所述检测包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种检测病毒性脑膜炎相关病原体的组合物，包括检测如下病毒性脑膜炎相关病原体中至少4种的上下游引物和探针：
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物不同探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，骨髓灰质炎病毒探针的荧光报告基团为atto 425；柯萨奇病毒a16型的探针的荧光报告基团为fam；肠道病毒71型探针的荧光报告基团为hex；柯萨奇病毒a6的探针的荧光报告基团为rox；柯萨奇病毒a10探针的荧光报告基团为cy5；腮腺炎病毒的探针的荧光报告基团为quasar 705。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述探针的3’末端还...
【专利技术属性】
技术研发人员：王维，万旺，吴康，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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