【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种特异性结合人sirpα的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
技术介绍
1、信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα，sirpα)，亦被称为ptpns1、shps1、cd172a或p84，是一种跨膜蛋白，在髓系造血细胞(例如，巨噬细胞、树突状细胞)和神经细胞表面均有表达。sirpα包括含有三个igg样结构域的胞外域和一个含有免疫受体酪氨酸抑制基序(itims)的胞质域，itims被磷酸化后会招募抑制分子，特别是含有src同源2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶shp-1和shp-2(matozaki t.et al.(2009).“functions and molecularmechanisms of the cd47-sirpαsignalling pathway”.trends cell biol.19(2):72–80)。
2、cd47也称为整联蛋白相关蛋白(iap)，是sirpα的配体，在所有的正常细胞上表达，但经常在癌细胞上过度表达，其分子结构包括n末端的细胞外可变结构域，五个疏水的跨膜螺旋结构，以及一个非常短的c末端的细胞内信号序列。在生理状态下，sirpα-cd47作为免疫检查点对维持机体耐受、协助免疫反应起到重要作用。但在肿瘤组织中，巨噬细胞、树突状细胞等吞噬细胞表面的sirpα与肿瘤细胞表面的cd47结合后，触发sirpα与shp-1和shp-2磷酸酶的偶联，抑制下游肌球蛋白iia，抑制巨噬细胞的吞噬作用，实现免疫逃逸。阻断sirpα-cd
3、越来越多的证据表明，阻断sirpα-cd47通路是一种有前景的治疗癌症的方法。这促进了多种sirpα-cd47阻断剂的发展，并且这些药物在体外和临床前研究中显示出良好的肿瘤治疗效果。但是，靶向sirpα-cd47通路的药物大多是针对cd47分子的，例如重组sirpα-fc融合蛋白、或igg1抗cd47抗体。但由于cd47的广泛分布，可能会损害正常表达cd47的造血细胞和非造血细胞，造成贫血、血小板减少和/或白细胞减少(veillette a.et al.(2018).“sirpα-cd47 immune checkpoint blockade in anticancer therapy”.trendsimmunol.39(3):173-184)。相比之下，sirpα具有组织学分布有限、在特定的实体瘤(例如，肾细胞癌和黑色素瘤)中异常表达的特点，使其能够以相对低的剂量抑制肿瘤中的cd47/sirpα信号。
4、截至目前，关于抗sirpα抗体的单一疗法或联合疗法的研究日渐增多。其中，cc95251(celgene)是特异性靶向sirpα、能够阻断sirpα-cd47相互作用的单克隆抗体，该抗体可以将髓系来源抑制细胞和肿瘤相关抑制细胞转化为非抑制细胞，从而导致免疫系统的再激活，抑制肿瘤生长。单克隆抗体kwar23可以在sirpα-cd47界面的表位上结合sirpα，并且在体外研究中，单独使用kwar23或与cetuximab(西妥昔单抗)联合使用，都能够以浓度依赖的方式增强巨噬细胞介导的结直肠癌腺癌细胞的吞噬作用。
5、尽管已经有多种靶向sirpα的抗体处于临床阶段，但是仍然需要进一步开发具有更高的sirpα特异性和亲和力的单克隆抗体。
技术实现思路
1、为了克服上述缺陷，本专利技术的目的是提供一种特异性结合人sirpα的单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的用途，该抗体具有高亲和力和功能性，其优于现有的抗人sirpα单克隆抗体。
2、本专利技术提供的技术方案如下：
3、一种特异性结合人sirpα的单克隆抗体，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区；
4、所述重链可变区包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述轻链可变区包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3；
5、所述的cdr-h1的氨基酸序列为seq id no：2所示；
6、所述的cdr-h2的氨基酸序列为seq id no：4所示；
7、所述的cdr-h3的氨基酸序列为seq id no：6所示；
8、所述的cdr-l1的氨基酸序列为seq id no：12所示；
9、所述的cdr-l2的氨基酸序列为seq id no：14所示；
10、所述的cdr-l3的氨基酸序列为seq id no：16所示。
11、优选地，重链可变区氨基酸序列为seq id no：8所示；轻链可变区氨基酸序列如seq id no：18所示。
12、优选地，重链氨基酸序列如seq id no：10所示；轻链氨基酸序列如seq id no：20所示。
13、优选地，所述的重链和轻链都还包括恒定区，该恒定区为鼠igg的恒定区，优选为igg1的恒定区。
14、本专利技术进一步提供了一种核苷酸分子，该核苷酸分子编码所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体；
15、优选地，所述核苷酸分子的序列选自seq id no：7和seq id no：17；
16、序列seq id no：7编码所述单克隆抗体的重链可变区；
17、序列seq id no：17编码所述单克隆抗体的轻链可变区。
18、本专利技术进一步提供了一种表达载体，所述表达载体含有所述的核苷酸分子。
19、本专利技术进一步提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有所述的表达载体。
20、优选地，所述宿主细胞为真核细胞，优选为哺乳动物细胞。
21、本专利技术进一步提供了一种特异性结合人sirpα的单克隆抗体的制备方法，该制备方法包含如下步骤：
22、步骤1：制备含有表达所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体的核苷酸分子的表达载体；
23、步骤2：用步骤1的表达载体转染真核宿主细胞；
24、步骤3：培养步骤2转染的真核宿主细胞；
25、步骤4：分离纯化，获得所述的单克隆抗体。
26、本专利技术还涉及包括前述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
27、进一步地，所述的药物组合物，包含治疗有效量的所述特异性结合人sirpα的单克隆抗体，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
28、本专利技术进一步提供了所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体在制备抗肿瘤药物中的用途。
29、优选地，所述肿瘤为非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾细胞癌、结直肠癌或胰腺癌。
30、本专利技术具有以下优点：本专利技术的单克隆抗体能以高亲和力特异性地与人sirpα结合，且与食蟹猴sirpα有交叉本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合人SIRPα的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区；
2.根据权利要求1所述的特异性结合人SIRPα的单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示。
3.根据权利要求1所述的特异性结合人SIRPα的单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。
4.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码如权利要求1～3中任一项所述的特异性结合人SIRPα的单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子的序列选自SEQ IDNO：7和SEQ ID NO：17；
6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有如权利要求4或5中所述的核苷酸分子。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求6所述的表达载体。
8.如权利要求1～3中任一项所述特异性结合人SIRPα的单克隆抗体的
9.包括权利要求1～3中任一项所述的特异性结合人SIRPα的单克隆抗体的抗体免疫偶联缀合物、双特异性分子、嵌和抗原受体或药物组合物。
10.如权利要求1～3中任一项所述的特异性结合人SIRPα的单克隆抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合人sirpα的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区；
2.根据权利要求1所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如seq id no：8所示；轻链可变区氨基酸序列如seq id no：18所示。
3.根据权利要求1所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体，其特征在于，重链氨基酸序列如seq id no：10所示；轻链氨基酸序列如seq id no：20所示。
4.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码如权利要求1～3中任一项所述的特异性结合人sirpα的单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的核苷酸分子，...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶信良，彭则羽，马志清，陈明久，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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