【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学和分子病毒学，具体涉及一种针对人流感病毒神经氨酸酶(na)蛋白的单克隆抗体、其制备方法及应用。
技术介绍
1、流感病毒属于正黏病毒科、流感病毒属，是一种有囊膜、多形态、分节段的单股负链rna病毒。流感病毒根据其核蛋白(nucleoprotein,np)和基质蛋白(matrix protein,mp)抗原性的不同可分为甲(a)、乙(b)、丙(c)、丁(d)四种亚型，其中a型流感病毒根据其表面蛋白血凝素(hemagglutinin，ha)和神经氨酸酶(neuraminidase，na)的抗原性的不同，又可以分为多种亚型。目前，ha蛋白包括18种亚型，na蛋白包括11种亚型。流感病毒可引起急性呼吸道感染，出现急性发烧、咳嗽、喉咙痛、身体疼痛和乏力等症状，严重者可导致重症甚至死亡。此外，一些高致病性毒株如h5n1、h5n6等引起的人类急性呼吸道传染病也可导致严重后果，死亡率较高。
2、流感病毒表面的血凝素蛋白(ha)和流感神经氨酸酶(na)是重要的抗原蛋白，人类感染流感病毒后可以产生针对ha和na的抗体。此类抗体在预防和治疗病毒感染方面具有重要作用。因此，筛选针对人流感病毒ha或na蛋白的高中和活性抗体以有效预防和/或治疗人流感病毒是流感病毒防治领域的重要目标。
技术实现思路
1、专利技术目的
2、针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种对人流感病毒na蛋白具有高亲和力、并对其表现出高中和活性的单克隆抗体、其相关产品及其制备方法和用
3、解决方案
4、为了实现上述目的，本专利技术经过大量的实验研究后发现了一种单克隆抗体，其能够特异性识别并靶向人流感病毒神经氨酸酶，并显示出较高的抗原结合活性和高效中和人流感病毒的能力。因此，本专利技术的单克隆抗体特别适合用于预防和/或治疗人流感病毒感染。
5、具体地，本专利技术提供了如下技术方案：
6、第一方面，本专利技术提供了一种特异性结合人流感病毒神经氨酸酶(na)的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中，
7、所述重链可变区包含：
8、氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；
9、所述轻链可变区包含：
10、氨基酸序列分别如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
11、作为优选，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
12、重链可变区，其包含如seq id no:7所示的氨基酸序列或与seq id no:7所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；和，
13、轻链可变区，其包含如seq id no:8所示的氨基酸序列或与seq id no:8所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
14、在一个优选的具体实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
15、重链可变区，其氨基酸序列如seq id no:7所示；和，
16、轻链可变区，其氨基酸序列如seq id no:8所示。
17、此外，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括恒定区；优选地，所述恒定区为选自以下的任意一种：igg、iga或igm抗体的恒定区。
18、在优选的具体实施方案中，单克隆抗体或其抗原结合片段还包括重链恒定区和/或轻链恒定区；优选地，所述重链恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示；并且，优选地，所述轻链恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示。
19、在一些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
20、重链，其包含如seq id no:11所示的氨基酸序列或与seq id no:11所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；和，
21、轻链，其包含如seq id no:12所示的氨基酸序列或与seq id no:12所示的氨基酸序列具有至少90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成。
22、进一步优选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
23、重链，其氨基酸序列如seq id no:11所示；和，
24、轻链，其氨基酸序列如seq id no:12所示。
25、在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段在其重链可变区和/或轻链可变区的n端还具有前导序列；优选地，所述前导序列具有如seq id no:13所示的氨基酸序列，进一步优选地，所述前导序列由如seq id no:26所示的核苷酸序列编码。
26、在一些可行的实施方案中，所述单克隆抗体的抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
27、本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合人流感病毒na蛋白，并对人流感病毒具有较高的中和能力，从而能够预防和/或治疗人流感病毒的感染。
28、第二方面，本专利技术提供了多核苷酸，所述多核苷酸编码如上述第一方面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。该多核苷酸不受限于其产生的方法，并且可以利用基因工程重组技术或化学合成方法获得。
29、在可行的实施方案中，所述多核苷酸为多核苷酸组。
30、在一些优选的实施方案中，所述多核苷酸组包括：
31、(i)编码本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区的hcdr1、hcdr2和hcdr3的第一多核苷酸，优选地，所述第一多核苷酸为包含如seq id no:14、15、16所示核苷酸序列(其可分别编码氨基酸序列如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3)的dna分子或其相应的mrna分子；和，
32、(ii)编码本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的lcdr1、lcdr2和lcdr3的第二多核苷酸，优选地，所述第二多核苷酸为包含如seq id no:17、18、19所示核苷酸序列(其可分别编码氨基酸序列如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3)的dna分子或其相应的mrna分子。
33、进一步优选地，所述多核苷酸组包括：
34、(i)编码本专利技术的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区的第一多核苷酸，优选地，所述第一多核苷酸为包含如seq id no:20所示核苷本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.特异性结合人流感病毒神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中，
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
3.如权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
4.如权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包括恒定区；
5.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.如权利要求5所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
7.如权利要求1-6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
8.多核苷酸，其编码如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
9.如权利要求8所述的多核苷酸，其中，所
10.如权利要求9所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸组包括：
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸组包括：
12.核酸构建体，其包含如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸，以及，任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
13.一种载体，其包含如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸，或者如权利要求12所述的核酸构建体；
14.一种宿主细胞，其包含如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸、如权利要求12所述的核酸构建体或如权利要求13所述的表达载体；
15.一种药物组合物，其包括如权利要求1至7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸、如权利要求12所述的核酸构建体、如权利要求13所述的表达载体或如权利要求14所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。
16.如权利要求15所述的药物组合物，其中，所述药物组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；
17.一种试剂盒，其包括如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸、如权利要求12所述的核酸构建体、如权利要求13所述的表达载体、如权利要求14所述的宿主细胞和/或如权利要求15或16所述的药物组合物。
18.一种制备如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：在适合于所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下，使权利要求14所述的宿主细胞表达所述单克隆抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞的培养物中回收所表达的单克隆抗体或其抗原结合片段。
19.如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸、如权利要求12所述的核酸构建体、如权利要求13所述的表达载体、如权利要求14所述的宿主细胞、如权利要求15或16所述的药物组合物和/或如权利要求17所述的试剂盒在以下任一方面的应用：
...【技术特征摘要】
1.特异性结合人流感病毒神经氨酸酶的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中，
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
3.如权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
4.如权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段还包括恒定区；
5.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
6.如权利要求5所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
7.如权利要求1-6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
8.多核苷酸，其编码如权利要求1-7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
9.如权利要求8所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸为多核苷酸组，所述多核苷酸组包括：
10.如权利要求9所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸组包括：
11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸组包括：
12.核酸构建体，其包含如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸，以及，任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
13.一种载体，其包含如权利要求8-11任一项所述的多核苷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：施一，高福，王敏，杨扬，沈晨光，高远，彭齐，赵学金，高思维，白苏冉，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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