【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种靶向b细胞的双特异性纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、b细胞是免疫系统的重要淋巴细胞，b细胞和浆细胞恶性肿瘤、自身免疫性疾病、淋巴瘤和白血病是常见的b细胞相关疾病，这些疾病的发病机制与b细胞过度活化产生大量自身抗体相关。因此，以b淋巴细胞表面分子为靶点的b淋巴靶向治疗得到了近年来广泛的关注和研究。b淋巴细胞清除策略是利用抗体药物靶向结合b细胞亚群的特定抗原，通过抗体依赖介导的细胞毒性作用或补体，或通过靶向b细胞存活需要的细胞因子，如b细胞激活因子（-cell activation factor, baff）诱导b细胞凋亡，达到清除b细胞的目的。b细胞清除主要的靶点是cd20，cd19和baff，用于治疗自身免疫疾病包括系统性红斑狼疮，多发性硬化症。
2、bcma是tnf受体家族的一员，全程为b细胞成熟抗原，也称cd269。在管理b细胞的成熟与b细胞分化成浆细胞的过程中扮演着重要的角色，是仅在成熟b细胞表面存在，由185个氨基酸残基组成的非糖基化的iii型整合膜蛋白。bcma具有不受体特异性，结合肿瘤坏死因子（配体）超家族成员13b，并导致nf-kb和mapk8/jnk活化。该受体还与各种traf家族成员结合，接到细胞存活和增殖的信号。在多发性骨髓瘤中bcma的表达增加，促增殖信号增强，最终癌化。因此在多发性骨髓瘤细胞上bcma的表达水平显著高于健康的浆细胞。涉及表达bcma的浆细胞的另一种b细胞病症是系统性红斑狼疮 (sle)，也称为狼疮。sle是一种全身性自身免疫性疾病，其可影响身体
3、cd20是一种在b细胞表面表达的非糖基化蛋白，主要由b细胞开始表达，初始b细胞增殖活化至浆细胞的过程表达下调，在终末分化的浆母细胞和浆细胞中失去表达。cd20在b细胞的表达具有特异性，且在单核细胞及粒细胞，大部分t细胞和其他组织细胞不表达。靶向cd20的药物可通过阻断向浆细胞分化发育，以降低产生自身免疫性抗体的浆细胞水平，同时保留b细胞前体，幼稚b细胞和长寿浆细胞的再生库。
4、目前以cd20单克隆抗体为代表的b淋巴稀薄清除治疗是目前较为成熟的方案，如rituximab(利妥昔)、ocrelizumab、ofatumumab。除了b细胞清除，还有针对b细胞生长因子（baff）的中和药物，包括gaff中和抗体（如belimumab，贝利单抗）。rituximab是一种嵌合型抗cd20单克隆抗体(chimeric anti-cd20 mab)，由人类igg1和鼠源可变区组成。它能够特异性地结合到b细胞表面的cd20抗原上，并诱导b细胞凋亡(自我毁灭)来破坏b细胞功能。rituximab主要用于治疗某些类型的癌症和自身免疫性疾病，如非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、类风湿性关节炎等。由于其嵌合型结构，rituximab相对于鼠源抗体具有更好的免疫原性和耐受性。
5、然而研究表明，长期服用rituximab，可能导致免疫系统的暂时性抑制，增加感染的风险，部分患者可能对单抗或其成分产生过敏反应，表现为皮疹、呼吸困难等症状，并且导致血细胞（如白细胞、红细胞和血小板）计数降低，这可能会影响患者的健康和恢复能力。尽管以bcma为靶点的car-t细胞治疗对多发性骨髓瘤表现出持久的缓解率，但是治疗后经常复发和出现耐药性。另外，car-t细胞在体内的增殖能力较差，对肿瘤细胞的杀伤效率较低，客观上加大car-t细胞的使用剂量，容易造成较强的毒副作用，如炎症因子风暴和中枢神经系统毒性。但治疗过程中出现的crs，脱靶效应等不良反应仍是亟待解决的问题，而利用抗体靶向治疗，分子量太大药物不能穿透血管，到达病灶，治疗效果也没有达到特别好的疗效。同时，相关技术的单抗抗体上的fc片段与其他细胞由非特异性结合，导致药物不能特异性靶向目的细胞，疗效减弱，副作用大。开发新型的靶向b细胞的抗体或者b细胞耗竭疗法，具有重要的意义。
6、纳米抗体是从骆驼科动物（如骆驼、羊驼和骆马）中提取的一种特殊类型的抗体，其大小仅为常规抗体的十分之一。这使得它们能够更容易地穿透组织，到达常规抗体无法到达的地方。纳米抗体具有极高的热稳定性和化学稳定性，使其在各种恶劣环境下都能保持活性。由于纳米抗体的结构简单，因此可以很容易地进行基因工程改造，以产生具有特定功能的抗体。此外，纳米抗体也可以通过细菌、酵母等微生物进行大规模生产，大大降低了生产成本。纳米抗体可以同时识别多个抗原表位，这使得它们在诊断和治疗多种疾病方面具有很大的潜力。纳米抗体由于其独特的结构和性质，使其在靶向药物输送、免疫诊断、肿瘤治疗等方面显示出高效的性能。纳米抗体已经被广泛应用于医学、生物技术、农业等领域，包括疾病的早期诊断、治疗，以及作为研究工具等。开发靶向b细胞的纳米抗体，对于b细胞相关疾病的治疗和研究，具有至关重要的意义。
7、血液净化是一项至关重要的医疗技术，它通过从血液中去除有害物质来治疗多种疾病和中毒状况。通过使用特定的吸附剂，如免疫吸附剂，可以针对性地吸附特定的致病因子，例如自身抗体或炎症介质。免疫吸附是一种技术，它利用特定的抗原、抗体或具有独特理化亲和力的配体与吸附介质结合，形成选择性或特异性的吸附柱。当与药物治疗结合使用时，免疫吸附能显著提高患者对药物的反应性，从而增强药物效果，减少副作用，缩短治疗时间，并降低疾病复发的风险。通过将靶向b细胞的抗体将与固相载体相结合，可以特异性结合人血液中的b细胞，尤其是活化的浆细胞，从而清除产生病理性抗体的b细胞。吸附效率高，吸附性能稳定，靶向清除b细胞，非特异性吸附量低，特异性好，在临床治疗上安全性能好，经济效益高。可能成为b细胞相关疾病的治疗的新途径。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种靶向b细胞的双特异性纳米抗体及其应用。
2、本专利技术所采取的技术方案是：
3、本专利技术的第一个方面，提供：
4、一种靶向b细胞的双特异性纳米抗体，包括至少一个识别靶点bcma的纳米抗体和一个识别靶点cd20的纳米抗体，纳米抗体单体之间通过连接子连接，所述纳米抗体包括框架区域和互补决定区域，所述识别靶点bcma的纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
5、组合1，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1～seq id no.3所示；
6、组合2，其cdr1～cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.4～本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向B细胞的双特异性纳米抗体，包括至少一个识别靶点BCMA的纳米抗体和一个识别靶点CD20的纳米抗体，纳米抗体单体之间通过连接子连接，所述纳米抗体包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，所述识别靶点BCMA的纳米抗体互补决定区域CDR1～CDR3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
2.根据权利要求1所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，所述识别纳米抗体的氨基酸序列选自以下中的至少一条：
3.根据权利要求1所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合Fc片段的纳米抗体。
4.根据权利要求1或3所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，所述连接子为柔性连接子。
5.权利要求1～4任一项所述的双特异性纳米抗体的应用，其特征在于，所述应用包括：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述偶联物为药物，和/或所述B细胞相关疾病选自肿瘤及自身免疫性疾病。
7.一种免疫吸附剂，包括固相载体，其特征在于，所述固相载体上偶联有权利要求1～4任一项所述的双特异性纳米抗体，优选的，所述固相载体选自壳聚
8.一种血液净化器械，其特征在于，包括权利要求7所述的免疫吸附剂。
9.编码权利要求1～4任一项所述双特异性纳米抗体的基因。
10.一种表达载体，其特征在于，其表达权利要求1～4任一项所述的双特异性纳米抗体，或含有权利要求9所述的基因。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向b细胞的双特异性纳米抗体，包括至少一个识别靶点bcma的纳米抗体和一个识别靶点cd20的纳米抗体，纳米抗体单体之间通过连接子连接，所述纳米抗体包括框架区域和互补决定区域，其特征在于，所述识别靶点bcma的纳米抗体互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列选自以下组合中的任意一种：
2.根据权利要求1所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，所述识别纳米抗体的氨基酸序列选自以下中的至少一条：
3.根据权利要求1所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，其为嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的纳米抗体。
4.根据权利要求1或3所述的双特异性纳米抗体，其特征在于，所述连接子为柔性连接子。
5.权利要求1～4任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：张海珍，伍道聪，张婷，刘秀梅，吴泳棋，杨正根，陈校园，
申请(专利权)人：广州康盛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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