【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物医药工程，尤其涉及一种骨质疏松疫苗及其制备方法和应用。
技术介绍
1、骨质疏松症(osteoporosis，op)及其所致的骨折等并发症已经成为严重的健康问题。目前治疗骨质疏松症的药物主要包括钙剂、维生素d3、双膦酸盐、特立帕肽等，每种药物都有其局限性。例如，双磷酸盐类药物长期使用会引起下颌骨坏死、食道炎等副作用；而特立帕肽禁用于骨转移癌或恶性骨肿瘤的患者等。因此，迫切地需要探索更有效、安全和经济的治疗药物。
2、骨骼的强度和完整性依赖于骨骼内破骨细胞骨吸收作用和成骨细胞骨形成作用之间的动态平衡，破骨细胞活动的过度增强是导致骨质疏松症的主要病理机制。三联体受体超家族成员：骨保护素(osteoprotegerin，opg)/核因子-κb受体活化因子配体(receptoractivator of nuclear factor-κb ligand，rankl)/核因子-κb受体活化因子(receptoractivator of nuclearfactor-κb，rank)，即opg/rankl/rank信号通路是机体控制破骨细胞分化成熟和功能的关键信号通路，通过阻断这一关键信号通路，可以抑制破骨细胞的分化和破骨活性，从而实现对骨吸收性疾病的治疗作用。
3、例如，地舒单抗(denosumab)作为一种抗rankl人源化单克隆抗体，可以特异性阻断rankl与其受体的结合，从信号转导途径的上游有效地阻断破骨细胞分化信号的发放，对骨吸收性疾病，尤其是对骨质疏松症、实体瘤骨转移(预防患者出现骨相关事件)和骨
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种骨质疏松疫苗及其制备方法和应用，旨在解决如何更长期、温和地、低成本地实现骨质疏松症免疫治疗的技术问题。
2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供一种骨质疏松疫苗，所述骨质疏松疫苗的氨基酸序列包括白喉毒素的跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和至少一条hrankl 220-245aa肽段。
4、在一些实施例中，所述骨质疏松疫苗包括依次连接的所述跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和1-5条所述hrankl 220-245aa肽段。
5、在一些实施例中，所述跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和所述hrankl 220-245aa肽段之间、以及相邻所述hrankl 220-245aa肽段之间通过(ggggs)2连接。
6、在一些实施例中，所述骨质疏松疫苗的氨基酸序列如seq id no.1所示。
7、第二方面，本申请提供一种核酸分子，所述核酸分子表达本申请第一方面提供的骨质疏松疫苗。
8、在一些实施例中，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no.2所示。
9、第三方面，本申请提供一种表达载体，所述表达载体含有本申请第二方面提供的核酸分子。
10、在一些实施例中，所述表达载体由所述核酸分子插入克隆载体pgex-6p-1中得到。
11、第四方面，本申请提供一种骨质疏松疫苗的制备方法，包括如下步骤：
12、构建本申请第三方面提供的表达载体；
13、将所述表达载体转入大肠杆菌中进行表达和纯化，得到所述骨质疏松疫苗。
14、本申请第一方面提供的骨质疏松疫苗，以白喉毒素的跨膜结构域dtt 203-378aa肽段作为免疫支架，将其连接能与denosumab结合的hrankl 220-245aa肽段，最后通过实验发现这样的骨质疏松疫苗注小鼠入体内免疫可以能够产生特异性anti-rankl抗体，因此这样的骨质疏松疫苗疫苗可以很好地预防或治疗骨质疏松症。
15、本申请第二方面提供的核酸分子可以表达本申请特有的骨质疏松疫苗，即可以用于表达能够体内免疫产生特异性anti-rankl抗体的骨质疏松疫苗，因此具有很好的应用前景。
16、本申请第三方面提供的表达载体含有可以表达本申请特有的骨质疏松疫苗的核酸分子，因此这样的表达载体可以通过基因工程的载体表达方式制备该骨质疏松疫苗。
17、本申请第四方面提供的骨质疏松疫苗的制备方法，将本申请特有的表达载体转入大肠杆菌中进行表达和纯化得到，采用成熟的基因工程制备目的融合蛋白的方法，从而可以大规模生产本申请的骨质疏松疫苗。
18、本申请第五方面提供的应用，是基于hrankl 220-245aa肽段的特性，因此可以用于制备骨质疏松疫苗。
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1.一种骨质疏松疫苗，其特征在于，所述骨质疏松疫苗的氨基酸序列包括白喉毒素的跨膜结构域DTT 203-378aa肽段和至少一条hRANKL 220-245aa肽段。
2.如权利要求1所述的骨质疏松疫苗，其特征在于，所述骨质疏松疫苗包括依次连接的所述跨膜结构域DTT 203-378aa肽段和1-5条所述hRANKL 220-245aa肽段。
3.如权利要求2所述的骨质疏松疫苗，其特征在于，所述跨膜结构域DTT 203-378aa肽段和所述hRANKL 220-245aa肽段之间、以及相邻所述hRANKL 220-245aa肽段之间通过(GGGGS)2连接。
4.如权利要求1-3任一项所述的骨质疏松疫苗，其特征在于，所述骨质疏松疫苗的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子表达权利要求1-4任一项所述的骨质疏松疫苗。
6.如权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。
7.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求5
8.如权利要求7所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体由所述核酸分子插入克隆载体pGEX-6P-1中得到。
9.一种骨质疏松疫苗的制备方法，其特征在于，包括：
10.hRANKL 220-245aa肽段在制备骨质疏松疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种骨质疏松疫苗，其特征在于，所述骨质疏松疫苗的氨基酸序列包括白喉毒素的跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和至少一条hrankl 220-245aa肽段。
2.如权利要求1所述的骨质疏松疫苗，其特征在于，所述骨质疏松疫苗包括依次连接的所述跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和1-5条所述hrankl 220-245aa肽段。
3.如权利要求2所述的骨质疏松疫苗，其特征在于，所述跨膜结构域dtt 203-378aa肽段和所述hrankl 220-245aa肽段之间、以及相邻所述hrankl 220-245aa肽段之间通过(ggggs)2连接。
4.如权利要求1-3任一项所述的骨质疏松疫苗...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶惠人，吴太林，关斌，罗建周，
申请(专利权)人：深圳大学总医院，
类型：发明
国别省市：
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