【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及烟草甲 lsmpr3基因及其dsrna在害虫防治中的应用。
技术介绍
1、rna干扰（rna interference,rnai）是指外源或内源的双链rna（dsrna）特异性地引起基因表达沉默的现象，它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默，从而抑制特定基因的表达。目前，rnai技术作为基因调控的有效工具，具有高度特异性、高效、可传播等特点，被广泛用于病虫害防治、肿瘤及癌症治疗等领域。
2、在病虫害防治领域，2002年的两项研究发现，沉默特定的靶标基因可以导致昆虫发育异常、下一代胚胎畸形甚至死亡（bettencourt et al., 2002; bucher et al.,2002），这是将rnai技术用于昆虫学研究和应用的起点。2007年的两篇报道证实了利用转基因植株表达昆虫的dsrna可以达到杀虫的效果（baum et al., 2007; mao etal., 2007），这两项研究为rnai技术应用于害虫防治提供了强有力的证据。利用该技术开发的农药被称为rna生物农药，也叫核酸农药、rna农药或rna干扰剂，是基于rna干扰技术开发的新型生物农药，其核心成分是可以与靶标生物中目标基因转录的mrna特异结合的多核苷酸（wangand jin, 2017b; 王治文等，2019；胡少茹等2019）。rna生物农药能够特异沉默目的基因的表达，具有效率高、专一性强的特点（baum et al., 2007; mao et al., 200
3、烟草甲[ lasiodermaserricorne(fabricius) ]属鞘翅目窃蠹科，是一种世界性储藏物害虫，食性复杂，可为害烟草、茶叶、禾谷类、豆类、干枣、油料、动植物标本、可可豆、皮革和藤竹制品等，尤其是烟草商品受害最为严重。该虫特别喜食正在醇化的烟叶，可随加工的烟丝进入卷烟内部，蛀食烟丝，蛀穿卷烟纸；其幼虫可蛀食贮存期烟草叶片，导致霉变；其虫尸、虫粪可污染烟叶和烟草制品，严重影响烟叶的可用性和卷烟质量。人们应用多种方法来防治烟草甲，包括化学防治、物理防治、生物防治等。而在烟草甲的防治技术中生物防治领域虽一直受到关注，但研究文献一直较少。
4、多药耐药相关蛋白mrp3（multidrug resistance-associated protein lethal3），在细胞代谢与药物抵抗机制中扮演着至关重要的角色。它不仅深度参与细胞内外复杂分子结构的转运过程，还精细调控着细胞内物质分布的平衡，作为高效的转运泵，在多种生理及病理状态下，尤其是多种癌症细胞中均展现出显著的表达活性。近年来，mrp3的生物学效应日益成为科研关注的焦点。本专利技术得到烟草甲 lsmpr3基因的序列，采用饲喂dsrna的rnai技术，沉默烟草甲 lsmpr3基因，导致烟草甲生长发育受阻并死亡，在烟草甲防治领域有着重要的应用价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供烟草甲 lsmpr3基因及其dsrna在害虫防治中的应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种烟草甲 lsmpr3基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示，其编码的蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4、上述一种烟草甲 lsmpr3基因的dsrna，所述dsrna是以seq id no.3所示的核苷酸序列为靶标合成的dsrna；
5、进一步的，所述dsrna是由seq id no.4所示的核苷酸序列和与seq id no.4所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列组成的双链rna。
6、上述一种dsrna的制备方法，其是根据烟草甲 lsmpr3基因设计用于合成其dsrna的上游引物和下游引物，以含有烟草甲 lsmpr3基因的质粒作为模板进行pcr扩增，pcr产物纯化后按照试剂盒说明书体外转录合成dsrna；
7、所述上游引物序列为5'-taatacgactcactataggggagagcatttagtgcctgct-3'，所述下游引物序列为5'-taatacgactcactatagggtctgcctgtcagtctcttga-3'。
8、上述的烟草甲 lsmpr3基因、dsrna在害虫防治中的应用；
9、进一步的，所述害虫为烟草甲。
10、一种防治烟草甲的方法，其包括用上述的dsrna饲喂烟草甲的步骤。
11、一种防治烟草甲的产品，其含有上述的dsrna。
12、本专利技术的显著优点在于：
13、本专利技术人从烟草甲中克隆得到 lsmpr3基因，其核苷酸序列如seq id no.1所示，该基因能够作为rnai的靶标，在烟草甲的防治中具有极高的应用价值。以seq id no.1所示序列中第4180~4671位为靶标合成dsrna，通过饲喂该dsrna，统计饲喂22日每日的死亡率，以绿色荧光蛋白基因 gfp双链dsrna（ds gfp）作为对照组进行相同处理，结果显示，饲喂 lsmpr3基因dsrna的烟草甲幼虫不能正常化蛹，第22日死亡率达到55.6±6.6%。表明 lsmpr3基因及其dsrna可以用于烟草甲的防治。
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1.烟草甲LSMPR3基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的烟草甲LSMPR3基因，其特征在于：其编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1所述的烟草甲LSMPR3基因的dsRNA，其特征在于：所述dsRNA是以SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列为靶标合成的dsRNA。
4.根据权利要求3所述的dsRNA，其特征在于：所述dsRNA是由SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列和与SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列组成的双链RNA。
5.如权利要求4所述的dsRNA的制备方法，其特征在于：根据烟草甲LSMPR3基因设计用于合成其dsRNA的上游引物和下游引物，以含有烟草甲LSMPR3基因的质粒作为模板进行PCR扩增，PCR产物纯化后按照试剂盒说明书体外转录合成dsRNA。
6.根据权利要求5所述的dsRNA的制备方法，其特征在于：所述上游引物序列为5'-TAATACGACTCACTATAGGGGAGAGCATTTAGTGCC
7.如权利要求1~2任一项所述的烟草甲LSMPR3基因、如权利要求3~4任一项所述的dsRNA在害虫防治中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述害虫为烟草甲。
9.一种防治烟草甲的方法，其特征在于：包括用权利要求3~4任一项所述的dsRNA饲喂烟草甲的步骤。
10.一种防治烟草甲的产品，其特征在于：其含有权利要求3~4任一项所述的dsRNA。
...【技术特征摘要】
1.烟草甲lsmpr3基因，其特征在于：其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的烟草甲lsmpr3基因，其特征在于：其编码的蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
3.如权利要求1所述的烟草甲lsmpr3基因的dsrna，其特征在于：所述dsrna是以seq idno.3所示的核苷酸序列为靶标合成的dsrna。
4.根据权利要求3所述的dsrna，其特征在于：所述dsrna是由seq id no.4所示的核苷酸序列和与seq id no.4所示的核苷酸序列反向互补的核苷酸序列组成的双链rna。
5.如权利要求4所述的dsrna的制备方法，其特征在于：根据烟草甲lsmpr3基因设计用于合成其dsrna的上游引物和下游引物，以含有烟草甲lsmpr3基因的质粒作为模板进行pcr扩增...
【专利技术属性】
技术研发人员：林天然，魏雅珍，林博雅，蒋代兵，罗发健，柯丽华，邱铭生，修启贵，常鹏飞，彭水连，彭凌飞，余文，蔡卫伟，吴梅香，
申请(专利权)人：福建省烟草公司龙岩市公司，
类型：发明
国别省市：
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