本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的腺苷脱氨酶诊断试剂（盒），同时本发明专利技术还涉及测定腺苷脱氨酶活性浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂（盒）主要成分包括：缓冲液、辅酶、腺苷、碳酸氢钠（二氧化碳）、腺苷三磷酸、甘油醛－３－磷酸、胺甲酰磷酸合成酶、甘油醛－３－磷酸脱氢酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外／可见光分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ处吸光度上升的速度，从而测算出腺苷脱氨酶的活性浓度大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)，同时本专利技术还涉及测定腺苷脱氨酶活性浓度的方法，属于医学检验测定
技术介绍
医学研究表明，腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢 酶。因此，腺苷脱氨酶活性的测定被作为良恶性胸腹水，脑脊液鉴别诊断，重症联合免疫缺 陷病(SCID)，急、慢性肝炎，肝硬化，肝癌等疾病鉴别的重要诊断标志。 腺苷脱氨酶的活性测定方法主要有放射核素法、物理方法和生化法。据申请人了 解，目前国际上普遍采用紫外光法，其测定原理是腺苷(白色结晶粉末)+水(H。0)腺苷脱 fiS肌苷(Inosine) +氨离子(NH4+)，此反映过程生成的肌苷会在波长为265nm处显现，因 此可以通过测定此波长处吸光度的大小直接反映腺苷脱氨酶活性的大小。然而，此方法无 法用一般医院的可见光分析仪测定，而需要使用专门的紫外光分析仪，因此难以切实推广 应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出 一 种利用酶比色法(Enzymatic ColorimetricMethod)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，连续监测还原型烟酰胺辅 酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定腺苷脱氨酶活性浓度的方法，同 时，本专利技术还将给出用以实现该方法的腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)，采用该试剂(盒)不仅 可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行腺苷脱氨酶活性浓度测定，而 且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。 本专利技术腺苷脱氨酶活性浓度测定方法如下 腺苷+水腺苷脱,氡酶肌苷+氡 氨+ 二氧化碳+2腺苷三磷酸+水氨甲酰磷酸合成酶 2腺苷二磷酸+磷酸根+氨甲酰磷酸 磷酸根+甘油醛-3-磷酸+辅酶甘油醛-3-磷酸脱氨酶 甘油酸-l，3-双磷酸+还原型辅酶 这种方法应用腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase ;EC 3. 5. 4. 4)酶(偶)联胺甲酰磷酸合成酶(carbamyl phosphate synthetase ;EC 6. 3. 4. 16)、甘油醛_3_磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde_3_phosphate dehydrogenase ;EC 1. 2. 1. 59)酶促反应连续监测法。腺苷脱氨酶酶解腺苷反应产生氨，再通过(偶)联合胺甲酰磷酸合成酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的速度，通过测量340nm处吸光度上升的速度，可以测算腺苷脱氨酶的活性浓度大小。4实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本专利技术腺苷脱氨酶诊断试剂较为理想缓冲液100,1/L稳定剂500,1/L辅酶3mmol/L胺甲酰磷酸合成酶6000U/L甘油醛_3-磷酸脱氢酶8000U/L腺苷4mmol/L碳酸氢钠5mmol/L腺苷三磷酸5mmol/L甘油醛_3-磷酸6mmol/L本专利技术的腺苷脱氨酶诊断试剂(盒)可以是单剂，包括缓冲液、稳定剂、辅酶、胺甲酰磷酸合成酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、腺苷、碳酸氢钠(二二氧化碳)、腺苷三磷酸、甘油醛-3-磷酸。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用 还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、辅酶、腺苷、碳酸氢钠(二氧化碳)、腺苷三磷酸、甘油醛-3-磷酸。 试剂2 缓冲液、稳定剂、甘油醛_3-磷酸脱氢酶。 试剂3 缓冲液、稳定剂、胺甲酰磷酸合成酶。 辅酶、胺甲酰磷酸合成酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、腺苷、碳酸氢钠(二氧化碳)、腺 苷三磷酸、甘油醛-3-磷酸在试剂l、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂(盒)可以 是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 无论是单剂、双剂还是三剂，本专利技术测定腺苷脱氨酶活性浓度的方法，其辅酶可以 是NADP+、 NAD+或thio-NAD+中的一种。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进一步的说明。 实施例一 本实施例的腺苷脱氨酶诊断试剂为单试剂，包括 三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 辅酶 3,1/L 胺甲酰磷酸合成酶 6000U/L 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 8000U/L 腺苷 4mmol/L 碳酸氢钠 5mmol/L 腺苷三磷酸 5mmol/L 甘油醛-3-磷酸 6mmol/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净 水，复溶后使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37°C，反应时间10分钟，起始吸光度《0. 1， 测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测腺苷脱氨酶样品与试剂的体积比例为1/25，反 应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间2分钟左右，理论K值 4180。 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测 主波长340nm吸光度上升的速度，从而测算出腺苷脱氨酶的活性浓度大小。 实施例二 本实施例的腺苷脱氨酶诊断试剂为双试剂，包括 试剂1三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 lOOmmol/L 稳定剂 50mmol/L 辅酶 3,1/L 腺苷 4,1/L 碳酸氢钠 5mmol/L 腺苷三磷酸 5mmol/L 甘油醛-3-磷酸 6mmol/L 试剂2三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 lOOmmol/L 稳定剂 500mmol/L 胺甲酰磷酸合成酶 6000U/L 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 8000U/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37t:，反应时间10分钟，起始吸光度《0. l，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测腺苷脱氨酶样品与试剂1、试剂2的体积比例为2/20/5，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间2分钟左右，理论K值2170。6 加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检效 主波长340nm吸光度上升的速度，从而测算出腺苷脱氨酶的活性浓度大小。 实施例三本实施例的腺苷脱氨酶诊断试剂为三试剂，包括 试剂l三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 lOOmmol/L 稳定剂 辅酶 腺苷 腺苷三磷酸 甘油醛-3-试剂2三(羧甲基)氨基甲烷 稳定剂甘油醛_3-磷酸脱氢酶 试剂3三(羧甲基)氨基甲烷 稳定剂胺甲酰磷酸合成酶盐酸缓冲液IOO,I, 50mmol/L 3mmol/L 4mmol/L 5mmol/L 5mmol/L 6mmol/L100,1, 500,1/L 8000U/L盐酸缓冲液1100,1/ 500,1/L 6000U/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体三试剂，可以直接使用。 测定腺苷脱氨酶活性浓度时，在全自动生化分析仪上设定温度37t:，反应时间 10分钟，起始吸光度《0. l，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测腺苷脱氨酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用酶比色法及酶联法技术的腺苷脱氨酶活性浓度测定方法，其方法如下：腺苷＋水腺苷脱氨酶肌苷＋氨氨＋二氧化碳＋２腺苷三磷酸＋水氨甲酰磷酸合成酶２腺苷二磷酸＋磷酸根＋氨甲酰磷酸磷酸根＋甘油醛－３－磷酸＋辅酶甘油醛－３－磷酸脱氢酶甘油酸－１，３－双磷酸＋还原型辅酶将最终反应物置于紫外／可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ吸光度上升的速度，测算出腺苷脱氨酶的活性浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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