【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，尤其涉及一种检测甘氨胆酸中杂质的方法。
技术介绍
1、甘氨胆酸(glycocholic acid)化学名称为n-(3,7,12-三羟基-24-羰基胆烷-24-基)-甘氨酸，结构如式(i)：
2、
3、甘氨胆酸为白色或类白色结晶性粉末，无臭，是由胆酸(ca)与甘氨酸为原料制备而成。甘氨胆酸可以用作药物辅料，主要作为乳化剂、增溶剂使用。在药物的生产过程，控制甘氨胆酸中的有关杂质含量，可以保证药物的质量。
4、甘氨胆酸中的杂质主要来源于：原料引入、生产过程中产生、贮藏过程中降解产生。根据来源不同，总结甘氨胆酸中可能含有以下杂质：
5、(1)原料引入，包括甘氨酸(化学名称为氨基乙酸)和胆酸(化学名称为3α，7α，12α-三羟基-5β-胆烷-24-酸)。
6、(2)合成或降解副产物，包括胆酸乙酯(化学名称为3α，7α，12α-三羟基-5β-胆烷-24-羧酸乙酯)、甘氨脱氧胆酸(化学名称为[(3α，12α-二羟基-5β-24-氧胆烷-24-基)氨基]乙酸)、甘氨胆酸乙酯(化学名称为[(3α，7α，12α-三羟基-5β-24-氧胆烷-24-基)氨基]乙酸乙酯)、甘氨胆酸乙酯盐酸盐(化学名称为[(3α，7α，12α-三羟基-5β-24-氧胆烷-24-基)氨基]乙酸乙酯)。
7、中国专利cn117214328a公开了采用两种方法互相补充进行检测的技术方案：①胆酸及其类似物等中等极性杂质，这些组分为甘氨胆酸中的主要杂质，采用高效液相色谱和蒸发光散射检测器
8、中国专利cn118050449a公开了一种检测多种胆汁酸含量的方法，该技术中采用示差折光检测器，局限性在于只能检测一些特定杂质，而极性差异大的杂质无法检测到，需开发其它方法进行检测。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种检测甘氨胆酸中杂质的方法，采用高效液相色谱仪和cad电喷雾检测器检测，提高灵敏度，采用等度洗脱，使极性大的甘氨酸与极性小的甘氨胆酸乙酯杂质可以同时进行检测，不受空白溶剂影响，方法专属性、精密度、准确性高，耐用性强。
2、本专利技术所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，包括以下步骤：
3、步骤1、溶液配制：
4、(1)供试品溶液配制：称取甘氨胆酸供试品，加稀释剂溶解，得到供试品溶液；
5、(2)自身对照溶液配制：取部分步骤(1)制备的供试品溶液，加稀释剂稀释得到自身对照溶液；
6、(3)杂质对照品储备液配制：取杂质对照品甘氨胆酸乙酯盐酸盐、胆酸、甘氨酸、甘氨胆酸乙酯、胆酸乙酯、甘氨脱氧胆酸，加稀释剂制成杂质对照品储备液。
7、(4)系统适用性溶液：取甘氨胆酸和杂质对照品储备液，加稀释剂稀释得到系统适用性溶液；
8、步骤2、色谱检测：
9、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用cad电喷雾检测器进行检测。
10、优选的，所述稀释剂由甲醇和流动相按照0.9～1.1：8.9～9.1的体积比组成。
11、更优选的，所述流动相由流动相a和流动相b按照50～55:45～50的体积比组成。
12、更优选的，所述流动相a为甲酸质量浓度0.1～0.12％的甲酸水溶液；所述流动相b为甲酸质量浓度0.1～0.12％的甲酸乙腈溶液。
13、优选的，步骤(1)所述的供试品溶液中供试品的浓度为0.8～1mg/ml。
14、优选的，步骤(2)所述的自身对照溶液中供试品的浓度为0.008～0.01mg/ml。
15、优选的，步骤(3)所述的杂质对照品储备液中每1ml含杂质对照品各0.01～0.02mg。
16、优选的，步骤(3)所述的系统适用性溶液中，甘氨胆酸的浓度为1.0～1.2mg/ml，甘氨胆酸乙酯盐酸盐、胆酸、甘氨酸、甘氨胆酸乙酯、胆酸乙酯、甘氨脱氧胆酸的浓度均为0.001～0.0012mg/ml。
17、优选的，步骤2所述色谱检测的条件为：
18、流速：0.4～0.6ml/min；
19、柱温：25～35℃；
20、雾化温度：45～50℃；
21、滤波：10.0；
22、采集频率：5.0；
23、进样量：18～22ul。
24、优选的，步骤2所述色谱检测采用的色谱柱内径为4～5mm，柱长为150～250mm。
25、优选的，步骤2所述色谱检测采用流动相a和流动相b按照50～55:45～50的体积比等度洗脱50～60分钟。
26、所述流动相a为甲酸质量浓度0.1～0.12％的甲酸水溶液；所述流动相b为甲酸质量浓度0.1～0.12％的甲酸乙腈溶液。
27、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
28、本专利技术提供了一种检测甘氨胆酸中杂质的方法，采用高效液相色谱仪和cad电喷雾检测器进行检测，提高检测的灵敏度；采用等度洗脱，能够同时检测甘氨胆酸中极性大与极性小的杂质，不受空白溶剂影响。本专利技术的方法精密度、准确性高，耐用性强。
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1.一种检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，所述稀释剂由甲醇和流动相按照0.9～1.1：8.9～9.1的体积比组成。
3.根据权利要求2所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，所述流动相由流动相A和流动相B按照50～55:45～50的体积比组成；
4.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(1)所述的供试品溶液中供试品的浓度为0.8～1mg/mL。
5.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(2)所述的自身对照溶液中供试品的浓度为0.008～0.01mg/mL。
6.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(3)所述的杂质对照品储备液中每1ml含杂质对照品各0.01～0.02mg。
7.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(4)所述的系统适用性溶液中，甘氨胆酸的浓度为1.0～1.2mg/mL，甘氨胆酸乙酯盐酸盐、胆酸、甘氨酸、甘氨胆
8.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤2所述色谱检测的条件为：
9.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤2所述色谱检测采用的色谱柱内径为4～5mm，柱长为150～250mm。
10.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤2所述色谱检测采用流动相A和流动相B按照50～55:45～50的体积比等度洗脱50～60分钟。
...【技术特征摘要】
1.一种检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，所述稀释剂由甲醇和流动相按照0.9～1.1：8.9～9.1的体积比组成。
3.根据权利要求2所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，所述流动相由流动相a和流动相b按照50～55:45～50的体积比组成；
4.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(1)所述的供试品溶液中供试品的浓度为0.8～1mg/ml。
5.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(2)所述的自身对照溶液中供试品的浓度为0.008～0.01mg/ml。
6.根据权利要求1所述的检测甘氨胆酸中杂质的方法，其特征在于，步骤(3)所述的杂质对照品储...
【专利技术属性】
技术研发人员：雍涛丽，杨蝶，黄清东，彭捷，
申请(专利权)人：四川澄华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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