【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测，尤其是指一种检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条及制备方法。
技术介绍
1、甲型和乙型流感病毒，通常简称为甲流和乙流，是引发人类季节性流感的主要病原体，每年在全球范围内导致大量人口发病，对公共卫生构成重大威胁。这些病毒具有高度的变异能力，能够不断适应宿主环境，逃避免疫系统的攻击，因此，及时、准确地检测流感病毒对于疫情监控、患者诊断及治疗至关重要。
2、传统的流感病毒检测方法，如病毒培养法和荧光定量pcr技术，虽然在灵敏度和特异性方面表现出色，能够提供较为准确的结果，但它们的操作流程相对复杂，需要专业的实验室环境和训练有素的技术人员。同时，这些方法的检测时间较长，往往无法满足临床快速诊断的紧迫需求。此外，高昂的检测成本也限制了其在资源有限地区的应用和推广。近年来，胶体金侧流免疫层析技术作为一种新兴的检测手段，因其简单快捷、操作便捷的特点，在病毒抗原检测领域展现出了巨大的应用潜力。该技术利用胶体金颗粒作为标记物，与特异性抗体结合后，能与待测样本中的流感病毒抗原发生特异性反应，形成肉眼可见的检测信号，如颜色变化或线条形成，从而实现对流感病毒的快速定性检测。这一过程大大缩短了检测时间，使得现场快速筛查成为可能，尤其适用于医疗机构、口岸检疫等需要即时结果的场景。
3、尽管如此，现有的甲型和乙型流感病毒抗原检测试纸条在性能上仍存在一些局限性。特别是在灵敏度、特异性及长期稳定性方面，部分试纸条的表现不尽如人意。交叉反应问题可能导致误判，即一种类型的流感病毒抗原被错误地识别为另一种类型，增加了假阳
4、此外，从生产角度来看，部分现有技术在试纸条的制备过程中涉及多步骤的复杂工艺，不仅需要高精度的生产设备，还依赖于特定的原材料，这些原材料往往价格昂贵且供应链不稳定，直接推高了生产成本，限制了产品的广泛可及性和大规模应用。因此，针对上述问题，研发具有更高灵敏度、特异性和稳定性的甲型及乙型流感病毒抗原检测试纸条，同时优化生产工艺、降低成本，是当前流感病毒快速检测
亟待解决的关键问题。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条及制备方法。本专利技术从加样端开始，在底板上依次形成有样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫，结合垫上喷涂有胶体金标记的甲型流感病毒捕获抗体、乙型流感病毒捕获抗体和质控捕获抗体，包被膜上设置有乙型流感病毒检测线、甲型流感病毒检测线和质控线。本专利技术基于胶体金标记的双抗夹心法，甲型、乙型病毒抗原在结合垫与胶体金标记的捕获抗体结合，移动至检测线后又和检测抗体结合，使检测线显色。
2、本专利技术的第一个目的是提供一种检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
3、步骤s1、配置胶体金溶液及胶体金标记物复溶液，所述胶体金标记物复溶液包含缓冲液、酪蛋白、蔗糖、海藻糖和防腐剂；
4、步骤s2、取胶体金溶液，加入甲型流感病毒捕获抗体和牛血清蛋白，使甲型流感病毒捕获抗体终浓度为15-30μg/ml，牛血清蛋白终浓度为0.6-1.5wt％，离心取沉淀物，沉淀物中加入胶体金标记物复溶液，得到胶体金标记的甲型流感病毒捕获抗体复溶液；
5、取胶体金溶液，加入乙型流感病毒捕获抗体和牛血清蛋白，使乙型流感病毒捕获抗体终浓度为15-30μg/ml，牛血清蛋白终浓度为0.2-1wt％，离心取沉淀物，沉淀物中加入胶体金标记物复溶液，得到胶体金标记的乙型流感病毒捕获抗体复溶液；
6、取胶体金溶液，加入质控捕获抗体和牛血清蛋白，使质控捕获抗体终浓度为6-15μg/ml，牛血清蛋白终浓度为0.2-1wt％，离心取沉淀物，沉淀物中加入胶体金标记物复溶液，得到胶体金标记的质控捕获抗体复溶液；
7、将所述甲型流感病毒捕获抗体复溶液、乙型流感病毒捕获抗体复溶液和质控捕获抗体复溶液均匀混合，喷涂在结合垫上；
8、步骤s3、在包被膜上设置乙型流感病毒检测线、甲型流感病毒检测线和质控线，分别喷涂含有乙型流感病毒检测抗体、甲型流感病毒检测抗体和质控检测抗体的溶液，所述乙型流感病毒检测线、甲型流感病毒检测线和质控线垂直于胶体金试纸条方向排列；
9、所述甲型流感病毒检测抗体终浓度为0.3-1mg/ml，所述乙型流感病毒检测抗体终浓度为0.5-1.8mg/ml，所述质控检测抗体终浓度为0.5-1.5mg/ml；
10、步骤s4、组装样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫，得到所述胶体金试纸条。
11、进一步地，还包括对样品垫和结合垫的预处理，所述预处理为将样品垫和结合垫分别浸泡在样品垫预处理液和结合垫预处理液中；
12、所述样品垫预处理液的组分包括牛血清蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、表面活性剂、防腐剂和阻断剂；
13、所述结合垫预处理液的组分包括牛血清蛋白、聚乙烯吡咯烷酮、表面活性剂和防腐剂。
14、进一步地，所述样品垫预处理液的用量为0.03-0.12ml/cm2。
15、进一步地，所述结合垫预处理液的用量为0.04-0.14ml/cm2。
16、进一步地，样品垫预处理液的成分和配比为35-60mm的tris-hcl、0.3-0.6wt％的牛血清蛋白或酪蛋白、0.7-1.5wt％的聚乙烯吡咯烷酮k30、0.5-1.5wt％的表面活性剂s9、0.03-0.1wt％的吐温-20、0.02-0.3wt％的proclin300或叠氮化钠和0.002-0.01wt％的阻断剂。
17、进一步地，样品垫预处理液的ph值为7.5-9.0。
18、进一步地，结合垫预处理液的成分和配比为35-60mm的tris-hcl、0.4-0.7wt％的牛血清蛋白或酪蛋白、0.7-1.5wt％的聚乙烯吡咯烷酮k30、0.03-0.1wt％的吐温20、0.02-0.3wt％的proclin 300或叠氮化钠。
19、进一步地，样品垫预处理液的ph值为7.5-9.0。
20、进一步地，步骤s1中，胶体金溶液成分为氯金酸和柠檬酸钠。
21、进一步地，氯金酸的浓度为0.01-0.04wt％，氯金酸与柠檬酸钠的质量比介于1：(1-1.5)。
22、进一步地，步骤s1中，胶体金标记物复溶液的成分和配比为35-60mm的tris-hcl、0.3-0.7wt％酪蛋白、10-30wt％的蔗糖、2-7wt％的海藻糖、0.02-0.3wt％的proclin300或叠氮化钠。
23、进一步地，步骤s2中，所述胶体金标记物复溶液的添加量为20-50μl。
24、进一步地，步骤s2中，所述甲型流感病毒捕获抗体复溶液的浓度为od40-80，所述乙型流感病毒捕获抗体复溶液的浓度为od50-100，所述质控捕获抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：还包括对样品垫和结合垫的预处理，所述预处理为将样品垫和结合垫分别浸泡在样品垫预处理液和结合垫预处理液中；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述样品垫预处理液的用量为0.03-0.12mL/cm2。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述结合垫预处理液的用量为0.04-0.14mL/cm2。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述胶体金标记物复溶液的添加量为20-50μL。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述甲型流感病毒捕获抗体复溶液的浓度为OD40-80，所述乙型流感病毒捕获抗体复溶液的浓度为OD50-100，所述质控捕获抗体复溶液的浓度为OD30-60。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤S2中，所述喷涂量为1.5-5.5μL/cm2。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特
9.由权利要求1-8任一所述制备方法制备得到的检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条。
10.根据权利要求9所述的胶体金试纸条，其特征在于：所述胶体金试纸条还包括样本稀释液，所述样本稀释液的组分包括氯化钠、磷酸氢二钠和牛血清蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种检测甲型、乙型流感病毒的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：还包括对样品垫和结合垫的预处理，所述预处理为将样品垫和结合垫分别浸泡在样品垫预处理液和结合垫预处理液中；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述样品垫预处理液的用量为0.03-0.12ml/cm2。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述结合垫预处理液的用量为0.04-0.14ml/cm2。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤s2中，所述胶体金标记物复溶液的添加量为20-50μl。
6.根据权利要求1所述的制备方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，钟黄琴，冼嘉仪，
申请(专利权)人：绍兴博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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