【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，具体为一种p450突变体酶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、p450酶，全称为细胞色素p450酶(cytochrome p450 enzymes)，是一类在生物体内广泛存在的血红素蛋白，它们参与多种内源性和外源性化合物的代谢过程。p450酶催化的典型反应是单加氧酶反应，其中底物被氧化，同时分子氧被还原成水。反应过程中，电子通常由还原型辅酶nadph通过电子传递链传递给血红素。p450酶因其在生物体内的重要作用和在生物技术应用中的潜力，一直是科学研究和药物开发中的重要工具。
2、对羟基苯乙酮本身是一种利胆的药物，常用于胆囊炎及急、慢性黄疸型肝炎治疗的辅助药品。此外对羟基苯乙酮还是一种精细化工合成的原料，多用于香料的合成。对羟基苯丁酮也可作为一些重要的药物中间体，和合成更复杂有机分子的起始材料。
3、目前对羟基苯乙酮及对羟基苯丁酮的合成方法主要有fries重排法、friedel-crafts酰基化法和重氮化法等。这些合成方法需要使用大量酸碱和强毒性物质或获取麻烦的催化剂，存在腐蚀设备、污染环境、后处理困难、收率低，步骤繁琐等问题。而生物合成法具有绿色、环保、对环境友好、操作简单，高选择性等优势；
4、综上所述，现有的对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮生产方法存在步骤繁琐，操作安全性差，副产物多，催化剂稀缺，产品得率低等问题，因此有必要寻找一种绿色安全的方法提高对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮的产量，同时能降低生产成本，为此提供了一种p450突变体酶在合成对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮中的应
技术实现思路
1、本专利技术的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种p450突变体酶及其制备方法和应用，以解决上述
技术介绍
提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种p450突变体酶，所述酶的氨基酸序列选自seq id no.1且在82位丙氨酸点突变为苯丙氨酸。
3、一种p450突变体酶的制备方法，具体制备包括以下步骤：构建含有序列seq idno.1的基因重组载体，并在进行点突变后转入大肠杆菌内，培养得到重组大肠杆菌菌液；将重组大肠杆菌菌液裂解，得到p450突变体酶酶液。
4、一种p450突变体酶在合成对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮中的应用。
5、作为本专利技术的进一步优选方案，具体应用方法为：将苯乙酮或苯丁酮、辅酶、p450突变体酶、磷酸缓冲液混合进行酶促反应，反应结束即得对羟基苯乙酮或对羟基苯丁酮。
6、作为本专利技术的进一步优选方案，所述p450突变体酶与苯乙酮或苯丁酮摩尔比例为1:1-200。
7、作为本专利技术的进一步优选方案，所述酶促反应的温度为25-35℃，酶促反应的ph值为7.0-9.0，酶促反应时间为2-8h。
8、作为本专利技术的进一步优选方案，所述辅酶浓度为0.1-2mm。
9、作为本专利技术的进一步优选方案，所述辅酶为nadph。
10、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术与化学合成方法相比，本专利技术中的p450突变体具有良好的催化活性，同时具有很好的对位羟基化的区域选择性，具有酶用量少，酶制剂成本低，反应时间短，产品收率和纯度高的显著优势，可大幅度降低对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮的生产成本，具有很强的工业应用潜力。
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1.一种P450突变体酶，其特征在于，所述酶的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1且在82位丙氨酸点突变为苯丙氨酸。
2.一种如权利要求1所述的P450突变体酶的制备方法，其特征在于，具体制备包括以下步骤：构建含有序列SEQ ID NO.1的基因重组载体，并在进行点突变后转入大肠杆菌内，培养得到重组大肠杆菌菌液；将重组大肠杆菌菌液裂解，得到P450突变体酶酶液。
3.一种如权利要求1所述的P450突变体酶在合成对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体应用方法为：将苯乙酮或苯丁酮、辅酶、P450突变体酶、磷酸缓冲液混合进行酶促反应，反应结束即得对羟基苯乙酮或对羟基苯丁酮。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述P450突变体酶与苯乙酮或苯丁酮摩尔比例为1:1-200。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述酶促反应的温度为25-35℃，酶促反应的pH值为7.0-9.0，酶促反应时间为2-8h。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述辅酶浓度为0
8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述辅酶为NADPH。
...【技术特征摘要】
1.一种p450突变体酶，其特征在于，所述酶的氨基酸序列选自seq id no.1且在82位丙氨酸点突变为苯丙氨酸。
2.一种如权利要求1所述的p450突变体酶的制备方法，其特征在于，具体制备包括以下步骤：构建含有序列seq id no.1的基因重组载体，并在进行点突变后转入大肠杆菌内，培养得到重组大肠杆菌菌液；将重组大肠杆菌菌液裂解，得到p450突变体酶酶液。
3.一种如权利要求1所述的p450突变体酶在合成对羟基苯乙酮和对羟基苯丁酮中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，具体应用方法为...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘亮，李婷婷，李家欢，曹阳，汤睿州，
申请(专利权)人：连云港鑫益丰科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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