【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于雌激素生物转化，尤其涉及一种生产8-pn的生物制备方法及雌激素补充组合物。
技术介绍
1、雌激素对在女性乳房发育和功能维持至关重要，它能够促进乳腺导管系统的生长和分化并通过与乳腺细胞表面的雌激素受体(er)结合，导致上皮细胞的增殖和分化从而形成乳腺导管和终末芽，同时促进乳房中脂肪细胞的增殖和脂质储存以维持乳房形状和体积。此外，雌激素能够促进乳腺组织的血管生成，提高乳房的血液供应，有助于乳腺组织的健康和功能维持。而随着年龄增长，雌激素水平下降，为改善雌激素减少所带来的不良后果，许多研究者选择以补充雌激素的方式来改善。8-异戊二烯基柚皮素8-prenylnaringenin(8-pn)是黄酮类化合物的衍生物，其雌激素样作用安全有效，且毒副作用小，几乎只存在于啤酒花中。
2、目前8-pn的获得方法主要为直接提取、化学合成和微生物合成。然而，啤酒花中8-pn含量仅占啤酒花含量的0.09％～0.13％，同时啤酒花种植要求较高，分离提取技术花费高昂，因此通过直接提取方法无法实现8-pn的大量获得。化学合成方法合成8-pn，底物通常选择柚皮素、异黄腐酚进行催化合成，尽管产物得率有所提高，但原料成本高，过程通常需要多步反应，副产物多难以分离，生产效率低且对环境污染严重。与上述两种方法相较，生物合成法条件温和，营养需求简单、对环境污染小、产物易于分离等特点。因此，受到更多研究者的关注。目前的研究主要对大肠杆菌和酿酒酵母进行相关模块构建和基因改造而进行8-pn的生产，在一定程度上提高了8-pn的产率。然而，由于大肠杆菌自身
技术实现思路
1、(一)专利技术目的
2、本专利技术的目的是提供一种生产8-pn的生物制备方法及雌激素补充组合物，本专利技术通过利用肠道微生物将异黄腐酚(ix)转化为8-pn，提高了8-pn产率，真正实现了8-pn的高效和安全生产，生产工艺简单可行，大幅降低生产成本，促进产业发展。
3、(二)技术方案
4、为解决上述问题，本专利技术的第一方面提供了一种生产8-pn的生物制备方法，包括以下步骤：
5、s1，将啤酒花悬浮于koh溶液中，搅拌离心后获得啤酒花沉淀物，将所述啤酒花沉淀物溶解于乙酸乙酯中，采用洗脱剂进行洗脱、收集处理，得到异黄腐酚；
6、s2，制备种子培养基并向所述种子培养基中接入混合菌种进行培养，获得种子液；
7、s3，将所述种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到种子发酵液；所述发酵培养基为添加了异黄腐酚的种子培养基；
8、s4，取制备后的种子发酵液，加入乙酸乙酯和石英砂，震荡、离心，取上清液，对所述上清液进行氮吹蒸发浓缩，得到8-pn。
9、进一步地，s1步骤具体包括：将50-60g啤酒花悬浮于1mol/l的koh溶液中，调节ph在13-14之间，搅拌离心后获得啤酒花沉淀物，将所述啤酒花沉淀物溶解于175-225ml的乙酸乙酯中，采用洗脱剂进行洗脱，再收集处理，得到异黄腐酚。
10、进一步地，s2步骤中，所述制备种子培养基的过程包括：
11、按以下质量浓度配制含naco3：1-1.5g/l、mncl2·(h2o)4：0.5-0.6g/l、葡萄糖：15-20g/l、mgso4·7h20：0.1g/l、酵母浸粉：1.5-5g/l、l-半胱氨酸0.5-0.7g/l、(nh4)2so4：1-1.5g/l和cacl2：0.5-0.7g/l的组分溶液；
12、向所述组分溶液中添加刃天青作为氧化还原指示剂，并调节ph至6.8-7.0，高压灭菌后，得到种子培养基。
13、进一步地，所述混合菌种包括：细枝真杆菌、植物乳杆菌和短乳杆菌中的一种或几种。
14、进一步地，s2步骤中，所述向所述种子培养基中接入混合菌种进行培养，获得种子液具体包括：向装有25ml种子培养基的摇瓶中接入1-2％混合菌种进行种子培养，培养条件为：搅拌速度为220r/min，温度为36℃-37℃，培养时间为24-48h后获得种子液。
15、进一步地，所述s3步骤具体包括：将种子液以3％的接种量接种至含有2.5l发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基中异黄腐酚的添加质量浓度为5-10g/l，通过优化发酵条件得到种子发酵液。
16、进一步地，所述优化发酵条件为：控制初始搅拌速度为220-250r/min，空气流速为2.5l/min，温度为36-37℃。
17、进一步地，所述优化发酵条件还包括：发酵16-18h后，将300-350ml所述种子培养基以5ml/h的流速加入发酵罐中，并调节发酵体系ph值在6.8-7.0。
18、进一步地，所述s4步骤具体包括：取600-800μl发酵液，加入600-800μl的乙酸乙酯和5-10mg石英砂，以4000-5000rpm震荡20-30min，以10000rpm离心10min，取上清液，将收集好的上清液进行氮吹蒸发浓缩，得到8-pn。
19、本专利技术的另一方面提供了一种雌激素补充组合物，所述组合物包括如下质量分的组分：葛根粉15～20份、木瓜粉10份、8-pn 5～10份、阿胶肽13～16份、鳕鱼胶原蛋白肽12～15份、维生素c 5～7份、长双歧杆菌2份、青春双歧杆菌2份、低聚果糖2份、西柚果汁粉5份、葡萄籽粉5份，所述8-pn采用上述说明中任意一种所述的方法制备所得。
20、本专利技术提供了一种生产8-pn的生物制备方法及雌激素补充组合物，具有如下有益效果：在该生物制备方法中，从啤酒花中收集异黄腐酚(ix)，并以异黄腐酚(ix)为底物，利用筛选的几种肠道微生物作为混合菌种进行混合发酵，以提高将ix转化为8-pn的转化率。本专利技术利用食品级肠道微生物，减少生产过程中的原料成本和复杂性，采用绿色生物技术，减少对环境的污染，实现了8-pn的可持续生产，保证产品安全性。
21、进一步地，该专利技术提供的雌激素补充组合物对血清中紊乱的性激素水平具有显著调节作用，能够明显改善女性因雌激素降低或内分泌失调所带来的不良影响。
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1.一种生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，S1步骤具体包括：将50-60g啤酒花悬浮于1mol/L的KOH溶液中，调节pH在13-14之间，搅拌离心后获得啤酒花沉淀物，将所述啤酒花沉淀物溶解于175-225mL乙酸乙酯中，采用洗脱剂进行洗脱，再收集处理，得到异黄腐酚。
3.根据权利要求1所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，S2步骤中，所述制备种子培养基的过程包括：
4.根据权利要求1所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，所述混合菌种包括：细枝真杆菌、植物乳杆菌和短乳杆菌中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，S2步骤中，所述向所述种子培养基中接入混合菌种进行培养，获得种子液具体包括：向装有25mL种子培养基的摇瓶中接入1-2％混合菌种进行种子培养，培养条件为：搅拌速度为220r/min，温度为36℃-37℃，培养时间为24-48h后获得种子液。
6.根据权利要求1所述的生产8-
7.根据权利要求6所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，所述优化发酵条件为：控制初始搅拌速度为220-250r/min，空气流速为2.5L/min，温度为36-37℃。
8.根据权利要求6所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，所述优化发酵条件还包括：发酵16-18h后，将300-350mL所述种子培养基以5mL/h的流速加入发酵罐中，并调节发酵体系pH值在6.8-7.0。
9.根据权利要求1所述的生产8-PN的生物制备方法，其特征在于，所述S4步骤具体包括：取600-800μl种子发酵液，加入600-800μl的乙酸乙酯和5-10mg石英砂，以4000-5000rpm震荡20-30min，以10000rpm离心10min，取上清液，将收集好的上清液进行氮吹蒸发浓缩，得到8-PN。
10.一种雌激素补充组合物，其特征在于，所述组合物包括如下质量分的组分：葛根粉15～20份、木瓜粉10份、8-PN 5～10份、阿胶肽13～16份、鳕鱼胶原蛋白肽12～15份、维生素C 5～7份、长双歧杆菌2份、青春双歧杆菌2份、低聚果糖2份、西柚果汁粉5份、葡萄籽粉5份，所述8-PN采用上述权利要求1-9中任一项所述的方法制备所得。
...【技术特征摘要】
1.一种生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，s1步骤具体包括：将50-60g啤酒花悬浮于1mol/l的koh溶液中，调节ph在13-14之间，搅拌离心后获得啤酒花沉淀物，将所述啤酒花沉淀物溶解于175-225ml乙酸乙酯中，采用洗脱剂进行洗脱，再收集处理，得到异黄腐酚。
3.根据权利要求1所述的生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，s2步骤中，所述制备种子培养基的过程包括：
4.根据权利要求1所述的生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，所述混合菌种包括：细枝真杆菌、植物乳杆菌和短乳杆菌中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，s2步骤中，所述向所述种子培养基中接入混合菌种进行培养，获得种子液具体包括：向装有25ml种子培养基的摇瓶中接入1-2％混合菌种进行种子培养，培养条件为：搅拌速度为220r/min，温度为36℃-37℃，培养时间为24-48h后获得种子液。
6.根据权利要求1所述的生产8-pn的生物制备方法，其特征在于，所述s3步骤具体包括：将种子液以3％的接种量接种至含有2.5l发酵培养基的发酵罐中，发酵培养基中异黄腐酚的添加质量浓度...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐春明，
申请(专利权)人：北京杉途生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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