【技术实现步骤摘要】
本申请涉及磷酸吡哆醛的，具体涉及合成磷酸吡哆醛的工程菌株及应用。
技术介绍
1、维生素b6是动物、植物和微生物营养必需的维生素之一，也是非常重要的药物或食品添加剂。磷酸吡哆醛(pyridoxal-5'-phosphate,plp)是维生素b6作为辅酶的唯一代谢活性形式，是160多种酶的辅酶。plp可作为活性氧的清除剂、金属螯合剂、酶折叠过程中的分子伴侣和潜在的真菌抗氧化剂，另外还可以控制类固醇激素受体的表达和作用，并可能对免疫功能产生积极影响；在医疗、食品工业、畜牧业和农业生产中具有很高的商业价值，市场需求量大。
2、目前，plp的合成方法主要包括化学合成法和微生物合成。化学合成方法一般由于工业副产品难以处理，生产成本高，高温和氯化反应引发的安全风险等诸多问题而受到限制。而微生物方法，绿色可持续，但由于一般合成途径的低催化效率及严格调控也会限制plp的高产。
技术实现思路
1、本申请专利技术人创造性地利用芽孢杆菌作为微生物底盘细胞，通过敲除基因ywjh，赋予plp合酶基因pdxst以木糖诱导型启动子pxyla等手段得到了一株高效生产plp的地衣芽胞杆菌。该菌株合成plp能力得以极大提升，能够为plp的合成及vb6的合成提供广泛的应用支持。
2、为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：
3、第一方面，实施例公开了一种工程菌株。该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zw
4、第二方面，实施例公开了一种工程菌株。该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的枯草芽胞杆菌168。
5、第三方面，实施例公开了一种工程菌株。该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的地衣芽胞杆菌ll3。
6、第四方面，实施例公开了一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除的地衣芽胞杆菌9945a。
7、第五方面，实施例公开了一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除及plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla的地衣芽胞杆菌9945a。
8、第六方面，实施例公开了一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla及引入基因xylr的地衣芽胞杆菌9945a。
9、第七方面，实施例公开了一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa及过表达基因tkt的地衣芽胞杆菌9945a。
10、第八方面，实施例公开了一种工程菌株的制备方法。该工程菌株为出发菌株的基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的菌株。
11、该制备方法包括：获得出发菌株；获得第一质粒、第二质粒、第三质粒及第四质粒，所述第一质粒用于敲除所述基因ywjh，所述第二质粒用于替换plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla，所述第三质粒用于引入基因xylr，所述第四质粒用于将基因zwf、基因gnda、基因ywlf、基因fbaa及基因tkt任一的启动子替换为pbacau12；将所述第一质粒、所述第二质粒、所述第三质粒及所述第四质粒中的至少一项转入所述出发菌株。
12、第九方面，实施例公开了合成plp的方法。所述方法包括对第一至第七方面任一所述的工程菌株进行发酵的步骤。
13、第十方面，实施例公开了第一至第七方面任一所述的工程菌株在合成plp中的应用。
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1.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA、引入基因xylR、过表达基因Zwf、过表达基因GndA、过表达基因YwlF、过表达基因FbaA、过表达基因Tkt中至少一项的地衣芽胞杆菌9945a。
2.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA、引入基因xylR、过表达基因Zwf、过表达基因GndA、过表达基因YwlF、过表达基因FbaA、过表达基因Tkt中至少一项的枯草芽胞杆菌168。
3.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA、引入基因xylR、过表达基因Zwf、过表达基因GndA、过表达基因YwlF、过表达基因FbaA、过表达基因Tkt中至少一项的地衣芽胞杆菌LL3。
4.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除的地衣芽胞杆菌9945a。
5.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除及PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子Pxyl
6.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA及引入基因xylR的地衣芽胞杆菌9945a。
7.一种工程菌株，该工程菌株为基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA、引入基因xylR、过表达基因Zwf、过表达基因GndA、过表达基因YwlF、过表达基因FbaA及过表达基因Tkt的地衣芽胞杆菌9945a。
8.一种工程菌株的制备方法，该工程菌株为出发菌株的基因YwjH被敲除、PLP合酶基因pdxST的启动子被替换为启动子PxylA、引入基因xylR、过表达基因Zwf、过表达基因GndA、过表达基因YwlF、过表达基因FbaA、过表达基因Tkt中至少一项的菌株；
9.合成PLP的方法，包括对如权利要求1～7任一所述的工程菌株进行发酵的步骤。
10.如权利要求1～7任一所述的工程菌株在合成PLP中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的地衣芽胞杆菌9945a。
2.一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的枯草芽胞杆菌168。
3.一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除、plp合酶基因pdxst的启动子被替换为启动子pxyla、引入基因xylr、过表达基因zwf、过表达基因gnda、过表达基因ywlf、过表达基因fbaa、过表达基因tkt中至少一项的地衣芽胞杆菌ll3。
4.一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除的地衣芽胞杆菌9945a。
5.一种工程菌株，该工程菌株为基因ywjh被敲除及pl...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈守文，王世依，毛树分，何鹏辉，王冬，马昕，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：
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