【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
0、背景
1、领域
2、本公开内容总体上涉及分子生物学和生物技术(包括基因编辑)领域。
3、对现有技术的描述
4、脂蛋白(a)(lp(a))是一种致动脉粥样硬化的脂蛋白，由共价结合至低密度脂蛋白(ldl)颗粒的载脂蛋白b-100 (apob)组分的蛋白载脂蛋白(a) [apo(a)]组成。高水平的lp(a)与心血管疾病的风险增加相关，所述心血管疾病包括例如钙化性主动脉瓣疾病(高水平的lp(a)引起疾病的更高发病率和更快进展)、心肌梗塞(mi)、冠心病、动脉粥样硬化、血栓形成和中风。目前尚不存在经批准的直接靶向lp(a)的药物。
5、使用crispr (成簇规则间隔短回文重复序列)-cas (crispr相关)系统的rna指导的dna靶向原理来靶向dna已经被广泛使用。crispr-cas系统可以分为两类，其中1类系统利用多个cas蛋白的复合物(诸如i型、iii型和iv型crispr-cas系统)，并且2类系统利用单个cas蛋白(诸如ii型、v型和vi型crispr-cas系统)。基于ii型crispr-cas的系统已经用于基因组编辑，并且需要由可定制的指导rna (grna)指导的cas多肽或其变体用于可编程dna靶向。
6、对于通过降低lp(a)水平来治疗脂蛋白相关疾病诸如心血管疾病和钙化性主动脉瓣疾病的安全且有效的基因编辑策略存在需求。
技术实现思路
0、概述
1、本文公开的内容包括
2、在一些实施方案中，受试者的血浆中的lpa表达在施用之后被降低至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。在一些实施方案中，受试者的血浆中lpa蛋白的浓度在施用之后被降低至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%。在一些实施方案中，降低在施用之后持续三周、四周、五周、两个月、三个月、六个月、一年、两年、三年、五年、十年、十五年或更长时间。在一些实施方案中，降低在施用之后一个月是65%。在一些实施方案中，降低在施用之后三个月是75%。在一些实施方案中，降低是相对于(a)受试者在施用多于一个纳米颗粒之前的血浆中的lpa表达或lpa蛋白的浓度；(b)一个或更多个未治疗的受试者中的lpa表达或lpa蛋白的浓度；和/或(c)健康受试者的lpa表达或lpa蛋白的浓度的参考水平。
3、有需要的受试者可以具有大于50 mg/dl，例如60 mg/dl、70 mg/dl、80 mg/dl、90mg/dl、100 mg/dl、110 mg/dl、120 mg/dl、130 mg/dl、140 mg/dl、150 mg/dl、200 mg/dl、250 mg/dl、300 mg/dl或更多的lp(a)水平。在一些实施方案中，有需要的受试者具有大于100 mg/dl的lp(a)水平。在一些实施方案中，有需要的受试者具有增加的与确定的心血管疾病(cvd)风险因素无关的心肌梗塞(mi)风险，或增加的动脉粥样硬化性心血管疾病(ascvd)的终生风险。
4、本文描述的方法可以包括在施用之前、期间和/或之后测量受试者中lp(a)的血液或血清水平。在一些实施方案中，该方法包括鉴定需要治疗的受试者。
5、脂蛋白相关疾病可以是代谢疾病、心血管疾病、脂质代谢疾病或其组合。在一些实施方案中，脂蛋白相关疾病是钙化性主动脉瓣疾病、心肌梗塞、冠心病、动脉粥样硬化、血栓形成、中风、冠状动脉疾病、家族性高脂血症、心肌梗塞、外周动脉疾病、钙化性主动脉瓣狭窄或其组合。在一些实施方案中，受试者的脂蛋白相关疾病的一种或更多种症状被减轻或缓解。在一些实施方案中，向受试者施用复合的多于一个纳米颗粒降低心血管风险、与心血管事件相关的死亡可能性或其组合。
6、在一些实施方案中，编码rna指导的内切核酸酶的核酸是rna指导的内切核酸酶(例如cas9内切核酸酶)的mrna。cas9内切核酸酶的非限制性实例包括化脓性链球菌(s.pyogenes) cas9、金黄色葡萄球菌(s. aureus) cas9、脑膜炎奈瑟菌(n. meningitides)cas9、嗜热链球菌(s. thermophilus) cas9、嗜热链球菌3 cas9、齿垢密螺旋体(t.denticola) cas9及其变体。grna可以是单指导rna (sgrna)。在一些实施方案中，grna靶向lpa基因的外显子3。在一些实施方案中，lpa grna包含seq id no: 18-25中任何一个的间隔区序列。在一些实施方案中，lpa grna包含seq id no: 18的间隔区序列。在一些实施方案中，lpa grna是包含seq id no: 32的序列的单指导rna (sgrna)。在一些实施方案中，lpa grna是包含seq id no: 11的序列的单指导rna (sgrna)。
7、lpa grna或编码该lpa grna的核酸和rna指导的核酸酶可以被包封在多于一个纳米颗粒中。在一些实施方案中，纳米颗粒是脂质纳米颗粒。受试者可以是灵长类受试者，例如人类。
8、在一些实施方案中，该方法包括向受试者单次施用多于一个纳米颗粒。例如，多于一个纳米颗粒可以以以下剂量或约以下剂量以单次施用向受试者施用：0.1 mg/kg、0.3mg/kg、0.6 mg/kg或1 mg/kg的总核酸(a)和(b)。
9、在一些实施方案中，多于一个纳米颗粒是脂质纳米颗粒。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或更多种中性脂质、带电荷的脂质、可电离脂质、类固醇和聚合物缀合的脂质。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含胆固醇、聚乙二醇(peg)脂质或两者。
10、该方法还可以包括在施用之前、施用之后或两者确定受试者中的(i)丙氨酸转氨酶(alt)、天冬氨酸转氨酶(ast)、γ-谷氨酰转移酶(ggt)、胆红素、碱性磷酸酶(alk phos)和白蛋白中的一种或更多种的水平；(ii)凝血酶原时间(pt)和/或(iii)部分促凝血酶原激酶时间(ptt)。在一些实施方案中，向受试者施用另外的治疗，其中另外的治疗包括施用皮质类固本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种用于治疗有相应需要的受试者的脂蛋白相关疾病的方法，包括向所述受试者施用与以下复合的多于一个纳米颗粒：
2.根据权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用所述多于一个纳米颗粒两次或更多次。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述两次或更多次施用中的每两次间隔约两周至约四周。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述两次或更多次施用中的每两次间隔至少三个月。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者单次施用所述多于一个纳米颗粒。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述受试者的血浆中的LPA表达在所述施用之后被降低至少20%、至少40%、至少70%或至少90%。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述受试者的血浆中的LPA蛋白的浓度在所述施用之后被降低至少20%、至少40%、至少70%或至少90%。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中所述降低在所述施用之后持续三周、四周、五周、两个月、三个月或更长时间。
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10.根据权利要求5-9中任一项所述的方法，其中所述降低是相对于(a)所述受试者在施用所述多于一个纳米颗粒之前的血浆中的LPA表达或LPA蛋白的浓度；(b)一个或更多个未治疗的受试者中的LPA表达或LPA蛋白的浓度；和/或(c)健康受试者的LPA表达或LPA蛋白的浓度的参考水平。
11. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有大于50 mg/dl的Lp(a)水平。
12. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有大于100 mg/dL的Lp(a)水平。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有增加的与确定的心血管疾病(CVD)风险因素无关的心肌梗塞(MI)风险，或增加的动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)的终生风险。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，包括在所述施用之前、期间和/或之后测量所述受试者中Lp(a)的血液或血清水平。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，包括鉴定需要所述治疗的受试者。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白相关疾病是代谢疾病、心血管疾病、脂质代谢疾病或其组合。
17.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白相关疾病是钙化性主动脉瓣疾病、心肌梗塞、冠心病、动脉粥样硬化、血栓形成、中风、冠状动脉疾病、家族性高脂血症、心肌梗塞、外周动脉疾病、钙化性主动脉瓣狭窄或其组合。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述受试者的所述脂蛋白相关疾病的一种或更多种症状被减轻或缓解。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用复合的多于一个纳米颗粒降低心血管风险、与心血管事件相关的死亡可能性或其组合。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中编码RNA指导的内切核酸酶的核酸是所述RNA指导的内切核酸酶的mRNA。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述RNA指导的内切核酸酶是Cas9内切核酸酶。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述Cas9内切核酸酶是化脓性链球菌(S.Pyogenes) Cas9、金黄色葡萄球菌(S. aureus) Cas9、脑膜炎奈瑟菌(N. meningitides)Cas9、嗜热链球菌(S. thermophilus) Cas9、嗜热链球菌3 Cas9、齿垢密螺旋体(T.denticola) Cas9或其变体。
23. 根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述gRNA是单指导RNA (sgRNA)。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述gRNA靶向LPA基因的外显子3。
25. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述gRNA包含SEQ ID NO: 18-25中任何一个的间隔区序列。
26. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述LPA gRNA包含SEQ ID NO: 18的间隔区序列。
27. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述LPA gRNA是包含SEQ ID NO:32的序列的单指导RNA (sgRNA)。
28. ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1. 一种用于治疗有相应需要的受试者的脂蛋白相关疾病的方法，包括向所述受试者施用与以下复合的多于一个纳米颗粒：
2.根据权利要求1所述的方法，其中向所述受试者施用所述多于一个纳米颗粒两次或更多次。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述两次或更多次施用中的每两次间隔约两周至约四周。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述两次或更多次施用中的每两次间隔至少三个月。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者单次施用所述多于一个纳米颗粒。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述受试者的血浆中的lpa表达在所述施用之后被降低至少20%、至少40%、至少70%或至少90%。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述受试者的血浆中的lpa蛋白的浓度在所述施用之后被降低至少20%、至少40%、至少70%或至少90%。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中所述降低在所述施用之后持续三周、四周、五周、两个月、三个月或更长时间。
9.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其中所述降低在所述施用之后一个月是65%。
10.根据权利要求5-9中任一项所述的方法，其中所述降低是相对于(a)所述受试者在施用所述多于一个纳米颗粒之前的血浆中的lpa表达或lpa蛋白的浓度；(b)一个或更多个未治疗的受试者中的lpa表达或lpa蛋白的浓度；和/或(c)健康受试者的lpa表达或lpa蛋白的浓度的参考水平。
11. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有大于50 mg/dl的lp(a)水平。
12. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有大于100 mg/dl的lp(a)水平。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者具有增加的与确定的心血管疾病(cvd)风险因素无关的心肌梗塞(mi)风险，或增加的动脉粥样硬化性心血管疾病(ascvd)的终生风险。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，包括在所述施用之前、期间和/或之后测量所述受试者中lp(a)的血液或血清水平。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，包括鉴定需要所述治疗的受试者。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白相关疾病是代谢疾病、心血管疾病、脂质代谢疾病或其组合。
17.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白相关疾病是钙化性主动脉瓣疾病、心肌梗塞、冠心病、动脉粥样硬化、血栓形成、中风、冠状动脉疾病、家族性高脂血症、心肌梗塞、外周动脉疾病、钙化性主动脉瓣狭窄或其组合。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述受试者的所述脂蛋白相关疾病的一种或更多种症状被减轻或缓解。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中向所述受试者施用复合的多于一个纳米颗粒降低心血管风险、与心血管事件相关的死亡可能性或其组合。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中编码rna指导的内切核酸酶的核酸是所述rna指导的内切核酸酶的mrna。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述rna指导的内切核酸酶是cas9内切核酸酶。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述cas9内切核酸酶是化脓性链球菌(s.pyogenes) cas9、金黄色葡萄球菌(s. aureus) cas9、脑膜炎奈瑟菌(n. meningitides)cas9、嗜热链球菌(s. thermophilus) cas9、嗜热链球菌3 cas9、齿垢密螺旋体(t.denticola) cas9或其变体。
23. 根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述grna是单指导rna (sgrna)。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述grna靶向lpa基因的外显子3。
25. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述grna包含seq id no: 18-25中任何一个的间隔区序列。
26. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述lpa grna包含seq id no: 18的间隔区序列。
27. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述lpa grna是包含seq id no:32的序列的单指导rna (sgrna)。
28. 根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述lpa grna是包含seq...
【专利技术属性】
技术研发人员：桑杰·迪索萨，劳拉·瑟维，乔纳森·泰瑞特，约翰·库尔曼，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：
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