【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及葡萄circ2656在调控植物盐胁迫抗性中的用途。
技术介绍
1、越来越多的研究指出：非编码rna在植物生长发育过程中存在不可或缺的功能，包括正常生长发育以及生理和胁迫反应。而环状rna(circular rna，circrna)作为非编码rna中的重要成员广泛存在于植物中，但植物circrna的生物发生和功能的调控机制在很大程度上仍然未知。
2、circrna是指通过头尾相连(也称反式剪接)形成的共价闭合环形rna分子。在circrna中，下游的剪接供体位点连接到上游的剪接受体位点。随着测序技术和相关分析方法的发展，研究证实circrna在真核生物中广泛存在，包括人类、小鼠、果蝇、酵母细胞、线虫和古细菌等等，且circrna具备高稳定性、序列保守性及组织特异性等特征。目前，植物中进行circrna的鉴定报道共涉及逾20个植物物种，plantcircbase中已经存储了171,118个circrna。
3、2014年首次报道了在拟南芥(arabidopsis thaliana)中表达的circrna，随后在水稻(o.sativa)和拟南芥(a.thaliana)中进行了circrna的全基因组鉴定和研究。植物circrna具有特定的时空表达特征，最近的研究表明，植物在生物胁迫和非生物胁迫下，circrna存在差异表达。大量circrna被预测参与多种细胞生理生命反应，如细胞氧化还原反应、细胞壁降解、冷热休克蛋白、冷胁迫、盐胁迫相关蛋白以及各种受低温诱导的转录因子等。多种circ
4、数十年前就有报道称土壤含盐量过高，全球超过8亿公顷的土地以及亚洲约2200万公顷的土地变成了盐碱地。在随后的十年内，全球受盐影响的土地面积增加到11.28亿公顷，亚洲增加到5200万公顷，每年造成经济损失近300亿美元。因此，迫切需要研究和重视土壤盐渍化，以减少或控制其对作物的影响。
5、葡萄作为藤本落叶果树，在我国是一种重要经济作物。当前，国内大部分可耕地用于种植粮食作物。因此，葡萄和其他果树通常种植在盐碱地的边缘土地上，加之果农盲目过量施肥和不合理灌溉，葡萄园土壤盐渍化日趋严重。此外，在葡萄设施栽培过程中，由于设施内土壤缺少雨水淋洗，更容易造成可溶性盐的积累。据统计，设施栽培中每3-5年便会出现次生盐渍化问题。土壤盐渍化严重抑制葡萄根系的生长，影响葡萄正常的生长发育过程，从而降低果实品质，造成产量损失。因此，有必要对葡萄耐盐胁迫的机制进行研究，这将有助于未来的分子育种工作。并且盐碱地的开发利用也一直是中国政策制定者关注的焦点。
6、抗逆反应是植物中的一个重要研究方向，当前土壤盐渍化造成的葡萄生理障碍问题越来越明显。盐渍化土壤严重影响葡萄正常生长发育、果实品质和产量。植物circrna在非生物、生物胁迫和不同的生长发育阶段均会发生差异表达。但关于盐胁迫如何影响植物中circrna的表达模式知之甚少。
7、对于circrna在植物抗盐方面的应用，目前已有的报道中仅一项关于circsiz1(专利号：cn111718935a)的研究提供了其在植物体内发挥抗盐功能的转基因证据，但其优选植物为烟草，缺乏葡萄植株的转基因证据。在抗盐功能方面，circsiz1通过转化烟草证明其可以抵抗中低浓度(100,150mm)的盐胁迫，但在高盐(200mm)胁迫中，效果不显著。因此在该领域的研究还需要继续深入。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的抗盐胁迫、调控植物高盐环境下生长发育方面的问题，本专利技术的目的是提供葡萄circ2656在调控植物盐胁迫抗性中的用途，本申请发掘出的全新circrna即circ2656不仅在功能上更加显著，且以葡萄作为优选植物。借助葡萄愈伤组织再分化，成功获得circ2656转基因葡萄植株，抗盐性较之野生型大大提高，为提高葡萄抗盐性提供了新的方向，对培育抗盐植物品种具有重要意义。
2、circrna作为非编码rna研究领域的新热点，现有研究表明：circrna在植物抗逆功能方面存在重要功能，但目前已有的报道中，仅一项关于circrna(circsiz1)的研究提供了其在植物体内发挥抗盐功能的转基因证据。circrna在植物盐胁迫响应中发挥作用的转基因证据支持仍然缺乏。
3、在对实验室前期发掘的抗盐功能基因vvu2af65b的全转录组测序分析中发现circ2656与超表达vvu2af65b具有强相关性。基于此本专利技术针对circ2656展开克隆及功能研究，特别是抗盐中的功能。
4、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
5、本专利技术的第一方面，提供葡萄circ2656在如下(1)-(2)至少一项中的用途：
6、(1)调控植物抗盐性；
7、(2)培育抗盐性植物；
8、所述葡萄circ2656的核苷酸序列如seq id no.1所示。
9、上述用途中，所述植物优选为葡萄和/或烟草。
10、本专利技术的第二方面，提供含有葡萄circ2656的表达载体、转基因细胞系或基因工程菌在如下(1)-(2)至少一项中的用途：
11、(1)调控植物抗盐性；
12、(2)培育抗盐性植物；
13、所述葡萄circ2656的核苷酸序列如seq id no.1所示。
14、本专利技术的第三方面，提供一种提高盐胁迫抗性的方法，包括用葡萄circ2656转化植物并使所述葡萄circ2656在所述植物中表达的步骤；
15、所述葡萄circ2656的核苷酸序列如seq id no.1所示。
16、本专利技术的第四方面，提供一种培育抗盐植物的方法，包括以下步骤：
17、获取葡萄circ2656序列，构建葡萄circ2656过表达载体，将所述葡萄circ2656过表达载体导入到目标植株中，获得抗盐性提高的葡萄circ2656转基因植株；所述葡萄circ2656的核苷酸序列如seq id no.1所示。
18、优选的，所述获取葡萄circ2656基因的方法为pcr扩增法。具体过程为：
19、使用primer expre本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.葡萄circ2656在调控植物盐胁迫抗性中的用途，其特征在于，包括如下(1)或(2)中至少一项：
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述植物为葡萄和/或烟草。
3.含有权利要求1所述葡萄circ2656的表达载体、转基因细胞系或基因工程菌的用途，其特征在于，包括如下(1)或(2)中至少一项：
4.一种提高盐胁迫抗性的方法，包括用葡萄circ2656转化植物并使所述葡萄circ2656在所述植物中表达的步骤；所述葡萄circ2656的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.一种培育抗盐植物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述培育抗盐植物的方法，其特征在于，所述获取葡萄circ2656基因的方法为PCR扩增法，用于验证葡萄circ2656全长基因的引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.3所示。
7.根据权利要求5所述培育抗盐植物的方法，其特征在于，构建葡萄circ2656过表达载体所用的转化载体为pHB。
8.根据权利要求5所述培育抗盐植物的方法，
...【技术特征摘要】
1.葡萄circ2656在调控植物盐胁迫抗性中的用途，其特征在于，包括如下(1)或(2)中至少一项：
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述植物为葡萄和/或烟草。
3.含有权利要求1所述葡萄circ2656的表达载体、转基因细胞系或基因工程菌的用途，其特征在于，包括如下(1)或(2)中至少一项：
4.一种提高盐胁迫抗性的方法，包括用葡萄circ2656转化植物并使所述葡萄circ2656在所述植物中表达的步骤；所述葡萄circ2656的核苷酸序列如seq id no.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：范宗宝，姚玉新，高雅哲，王胜男，王菲，魏德政，徐军，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：
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