【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及用于同时抑制两个靶基因表达的sirna、药物及其应用。
技术介绍
1、高血压、高血脂、高胆固醇血症等慢性疾病是心脑血管并发症的主要诱因，随着人类生活水平的提高，这些慢性疾病成了困扰人们健康以及降低生活质量的重要因素。在大多数高血压指南中，在未使用降压药的情况下，收缩压(systolic blood pressure，sbp)或舒张压(diastolic blood pressure，dbp)≥140/90mmhg则被定义为高血压(whelton，paulk et al.hypertension vol.71，6(2018):1269-1324.)。高血压通常与其他慢性疾病如高血脂、高胆固醇、糖尿病等一起出现。在2009年一项涉及4942例高血压门诊患者的研究中，其中同时患有糖尿病的患者占24.3％。在上述调查中高甘油三酯血症的患病率为18.9％，高胆固醇血症和低hdl胆固醇的患病率分别为13.5％和16.6％。这些疾病的同时出现不仅增加了心脑血管并发症的风险，还使得该类疾病的管理复杂化(miao，chao-ying etal.journal of clinicalhypertension vol.23，7(2021):1399-1404)。有报导指出降血压治疗有利于提高改善病人的各项指标，如每降低10mmhg收缩压心血管疾病的风险降低20％；另外冠心病、中风、心脏功能缺失的风险分别降低17％、27％与28％。由于拥有相同的风险因素以及发病机制，降压与降脂药物联用将对于上述慢性疾病的治疗具有协同
2、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)是人体维持血压、血容量和水盐平衡的内分泌系统，该系统分泌产生的血管紧张素(ang i/i i)具有收缩血管的作用。raas系统的过度启动是高血压形成的重要原因之一(arendse，lauren b et al.pharmacologicalreviewsvol.71，4(2019):539-570)。目前临床上的降压药主要是raas抑制剂，包括血管紧张素转换酶抑制剂acei(如普利类药物)、血管紧张素i i拮抗剂arb(如沙坦类药物)等。即使这些raas抑制剂药物的作用机理不完全相同，但具有一定的机体代偿性且均需要病人每天不间断服药，因此有些患者的依从性较差。值得关注的是，由肝脏细胞产生的血管紧张素原(agt)是血管紧张素(ang ii)的唯一前体。研究表明agt基因的多态现象与机体的血压调控密切相关，因此agt是基因沉默治疗高血压及相关疾病的重要靶标。抑制agt能有效防止raas系统的过度启动因而起到降低血压的作用，弥补raas抑制剂药物的常见不足(ren，liwei et al.current opinionin nephrology and hypertension vol.29，2(2020):180-189)。近期研究表明利用特异靶向肝细胞的galnac系统偶联的sirna介导agt基因沉默可使raas系统抑制持续数周至数月，仅需要单次给药，这比目前的raas抑制剂更能提高依从性和改善心脑血管疾病情况(desai，akshay s et al.the new england journal ofmedicine vol.389，3(2023):228-238.)。
3、上述提及高血压与高血脂症密切相关，高血脂症通常只血清中胆固醇和(或)甘油三酯水平升高造成的血脂异常，是动脉粥样硬化等心血管疾病的重要诱因。血管生成素样蛋白3(angptl3)基因功能缺失变异与甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的血浆水平降低有关。人类遗传学研究表明，携带angptl3功能缺失杂合变异的人群，其三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白(ldl-c)胆固醇的血清水平均显著低于没有这些变异的人群(dewey，frederick e et al.the new england journal of medicinevol.377，3(2017):211-221.)。功能方面，由肝细胞产生的angptl3会被分泌到血液中，通过pcsk3或pcsk6剪切后形成活性分子，可对脂蛋白脂肪酶(其催化甘油三酯的水解)和内皮脂肪酶(其水解脂蛋白磷脂)起到抑制作用，进而导致甘油三酯、高密度脂蛋白(hdl)和磷脂的血浆水平增加，因此抑制angptl3的表达可作为高血脂症治疗的重要靶点(kersten，sander.nature reviews.endocrinology vol.13，12(2017):731-739.)。
4、另外，高血压患者中出现高胆固醇血症的比例也很高，一般根据ldl-c和非hdl-c水平定义高胆固醇血症。同样地，人类遗传学研究表明，前白蛋白转化酶枯草菌素9(pcsk9)可能与家族性高胆固醇血症相关，两个常见的pcsk9失功能型突变(pcsk9-679x和pcsk9-142x)与血中低ldl-c水平呈现正相关(cohen，jonathan c et al.the new englandjournal of medicine vol.354，12(2006):1264-72.)。pcsk9在肝脏中合成并被分泌至循环系统，细胞中的pcsk9可结合并引导新生成的ldl受体从高尔基体转运至溶酶体内进行降解；而循环系统中的pcsk9可与肝脏细胞表面的ldl受体特异结合，从而介导其进入肝细胞溶酶体内降解，最终导致肝脏结合和清除ldl-c的能力下降，血液中ldl-c水平升高(horton，jay d et al.journal of lipid research vol.50suppl，suppl(2009):s172-7)。因此，抑制pcsk9的表达水平是治疗高胆固醇血症以及预防与ldl-c相关的心脑血管疾病的重要靶点。目前关于降脂的治疗方法，已开发出了分别针对angptl3与pcsk9的单抗药物、反义寡聚核苷酸药物(asos)、sirnas药物等，以ldl-c或甘油三酯为指标取得了较好的治疗效果(chen，ruoyu et al.journal of clinicallaboratory analysis vol.36，7(2022):e24552.)。
5、rnai现象的发现将rna治疗推向了新的高度，rnai技术指的是外源sirnas利用细胞内源系统使得靶向的目的基因降解。机制方面，外源导入的双链sirnas可以被细胞中的核糖核酸内切酶dicer识别并于rna诱导沉默复合物(risc)被分割为单链的引导单链及其互补链。作为引导单链的sirna随后与argonate2蛋白(ago2)结合并将其指引至靶标rna，由ago2介导靶标rna的降解。除了降解胞浆中的rnas，sirnas还能促使细胞核中染色体重塑与本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.双靶向siRNA剂，其特征在于，所述双靶向siRNA剂包括靶向两种不同基因的两种不同的siRNA或其药学上可接受的盐，所述两种不同的siRNA或其盐通过与用于递送核酸的配体连接而成为一个整体，每种所述siRNA为正义链和反义链构成的dsRNA，所述两种不同基因选自血管紧张素原(angiotensinogen，AGT)、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9)以及血管生成素样蛋白3(angiopoietin-like 3，ANGPTL3)中的两种；
2.根据权利要求1所述双靶向siRNA剂，其特征在于，其靶向的两种基因为AGT和选自PCSK9和ANGPTL3中的任一种，优选为AGT与PCSK9。
3.根据权利要求1的所述双靶向siRNA剂，其特征在于，所述的正义链和反义链的核苷酸是经过修饰，所述正义链包括不多于3、2、1或0个未修饰的核苷酸，所述正义链中的修饰核苷酸包含选自2'-O-甲基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、反向无碱基残基，且正义
4.根据权利要求3所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述靶向血管紧张素原基因的siRNA经过修饰，选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
5.根据权利要求3或4所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，靶向前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9基因的siRNA经过修饰，选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
6.根据权利要求3或4所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述靶向血管生成素样蛋白3基因的siRNA经过修饰，所述siRNA选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
7.根据权利要求5所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，靶向AGT和PCSK9基因时，所述双靶向的siRNA剂的每种siRNA选自表45中的DT03081，DT03086，DT03103，DT03099，DT03085，DT03101，DT03082，DT03097，DT03100或DT03102中的任一种双靶向的siRNA。
8.根据权利要求6所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，靶向AGT和ANGPTL3基因时，所述双靶向siRNA剂的每种siRNA选自表45中的DT02043或DT02047中的任一种双靶向的siRNA。
9.根据权利要求3所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，靶向ANGPTL3和PCSK9基因时，所述双靶向siRNA剂的每种siRNA选自表45中的DT09001，DT09003和DT09005中的任一种双靶向的siRNA。
10.根据权利要求1-4任一项所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。
11.根据权利要求1-4任一项所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)或其衍生物。
12.根据权利要求11所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述N-乙酰基半乳糖胺衍生物与两种siRNA的正义链的3'端通过化学键分别连接，优选地，化学键分别是磷酸酯键或者硫代磷酸酯键。
13.根据权利要求12所述的双靶向siRNA剂，其特征在于，所述N-乙酰基半乳糖胺衍生物具有如下结构，其与每种siRNA的正义链的3'端连接方式如下：
14.权利要求1-13任一项所述的双靶向siRNA剂在制备用于同时抑制细胞中AGT、PCSK9以及ANGPTL3任意两个靶基因表达的产品中的应用，优选地，所述产品为生物制剂或者药物制剂。
15.一种用于同时抑制AGT、PCSK9以及ANGPTL3中任意组合的两个靶基因表达的生物制剂或者药物制剂，其特征在于，其活性成分包括权利要求1-13任一项所述的双靶向siRNA剂。
16.权利要求1-13任一项所述的双靶向siRNA剂在制备预防和/或治疗与高血压和/或脂质失调相关疾病的药物中的应用，其特征在...
【技术特征摘要】
1.双靶向sirna剂，其特征在于，所述双靶向sirna剂包括靶向两种不同基因的两种不同的sirna或其药学上可接受的盐，所述两种不同的sirna或其盐通过与用于递送核酸的配体连接而成为一个整体，每种所述sirna为正义链和反义链构成的dsrna，所述两种不同基因选自血管紧张素原(angiotensinogen，agt)、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，pcsk9)以及血管生成素样蛋白3(angiopoietin-like 3，angptl3)中的两种；
2.根据权利要求1所述双靶向sirna剂，其特征在于，其靶向的两种基因为agt和选自pcsk9和angptl3中的任一种，优选为agt与pcsk9。
3.根据权利要求1的所述双靶向sirna剂，其特征在于，所述的正义链和反义链的核苷酸是经过修饰，所述正义链包括不多于3、2、1或0个未修饰的核苷酸，所述正义链中的修饰核苷酸包含选自2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、反向无碱基残基，且正义链的5'-末端和3'-末端含有0，或1，或2，或3个硫代磷酸酯键；以及，所述反义链包括不多于3、2、1或0个未修饰的核苷酸，所述反义链中的修饰的核苷酸包括选自2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2'-氟修饰的核苷酸、vpu(2’-o-甲基尿苷-5’-(e)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯)、vpu-s(2’-s-甲基尿苷-5’-(e)-乙烯基磷酸-3’-磷酸酯)或其他vpu衍生物，且反义链的5'-末端和3'-末端各含有1-3个硫代磷酸酯键。
4.根据权利要求3所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述靶向血管紧张素原基因的sirna经过修饰，选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
5.根据权利要求3或4所述的双靶向sirna剂，其特征在于，靶向前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9基因的sirna经过修饰，选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
6.根据权利要求3或4所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述靶向血管生成素样蛋白3基因的sirna经过修饰，所述sirna选自以下序列中的一种，或与其正义链或者反义链相差不超过1个核苷酸的序列：
7.根据权利要求5所述的双靶向sirna剂，其特征在于，靶向agt和pcsk9基因时，所述双靶向的sirna剂的每种sirna选自表45中的dt03081，dt03086，dt03103，dt03099，dt03085，dt03101，dt03082，dt03097，dt03100或dt03102中的任一种双靶向的sirna。
8.根据权利要求6所述的双靶向sirna剂，其特征在于，靶向agt和angptl3基因时，所述双靶向sirna剂的每种sirna选自表45中的dt02043或dt02047中的任一种双靶向的sirna。
9.根据权利要求3所述的双靶向sirna剂，其特征在于，靶向angptl3和pcsk9基因时，所述双靶向sirna剂的每种sirna选自表45中的dt09001，dt09003和dt09005中的任一种双靶向的sirna。
10.根据权利要求1-4任一项所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。
11.根据权利要求1-4任一项所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述配体为n-乙酰基半乳糖胺(galnac)或其衍生物。
12.根据权利要求11所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述n-乙酰基半乳糖胺衍生物与两种sirna的正义链的3'端通过化学键分别连接，优选地，化学键分别是磷酸酯键或者硫代磷酸酯键。
13.根据权利要求12所述的双靶向sirna剂，其特征在于，所述n-乙酰基半乳糖胺衍生物具有如下结构，其与每种sirna的正义链的3'端连接方式如下：
14.权利要求1-13任一项所述的双靶向sirna剂在制备用于同时抑制细胞中agt、pcsk9以及angptl3任意两个靶基因表达的产品中的应用，优选地，所述产品为生物制剂或者药物制剂。
15.一种用于同...
【专利技术属性】
技术研发人员：范福顺，刘新建，王斌杰，魏艳丽，钱长庚，
申请(专利权)人：广州必贝特医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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