【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物检测，具体涉及一种阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法及其应用。
技术介绍
1、自新型冠状病毒感染mrna疫苗成功上市以来，脂质纳米颗粒（lnp）已成为mrna、sirna等核酸制品的优先递送载体，广泛用于mrna疫苗及治疗药物。mrna分子量大，亲水性强，生物活性是小分子药物的上千倍，工业生产比较容易。但自身的单链结构致使其极为不稳定，易被降解，且自身携带负电荷，要穿过表面同为负电荷的细胞膜，使得其递送难度较高。lnp是一种多组分系统，可将mrna包裹在结构内部空腔中，这种结构可以提高mrna体内稳定性使其免受降解，进而发挥作用。
2、脂质纳米粒(lnp)是一种具有均匀脂质核心的脂质囊泡，广泛用于rna疫苗和和核酸药物的递送，lnp的封装可以保护mrna不受细胞外rna酶的影响，并协助mrna的胞内递送。lnp因具有操作简便、生物安全性高、重复性好、转染效率较高、细胞毒性较小等特点而成为目前应用最为广泛的非病毒载体。biontech、moderna和curevac三巨头的mrna新型冠状病毒感染疫苗均采用lnp递送技术。
3、lnp递送系统主要由电离阳离子脂质（sm102或alc-0315或yk-009）、磷脂（dspc或dope）、胆固醇和辅助脂质（dmg-peg2000）配制脂质处方，四种脂质通常的摩尔比为50:10:38.5:1.5，可电离阳离子脂质与rna的比率保持在15:1（w/w），所以阳离子脂质在每一个单位制剂中的使用量非常大。可电离脂质在酸性条件下质子化，带正电荷
4、由于阳离子脂质用量大，体内滞留时间长，相对的如果有微量的杂质存在，就会导致体内绝对数量杂质的增加；而这些杂质的结构中，通常也含有类似的阳离子结构和亲脂的不容易代谢的基因，会引发许多不可预知的细胞毒性；因此严格限定阳离子中的杂质含量，并寻找科学的质量检测方法，来严控杂质限量，是非常必要和必须的；遗憾的是，检索现有文献中，针对已经上市的阳离子脂质或者已经公开的阳离子脂质，没有能够找到非常科学的质量控制方法。
5、yk-009（c40h79no5）为悦康药业集团股份有限公司自主研发的第三代阳离子脂质体。与dlin-mc3-dma制成的第二代lnp相比，yk-009脂质体制成的lnp具有更小的粒径尺寸，更高的均一度，更高的体外细胞转染效率、更低的细胞毒性和高度的生物体内表达等优点，但其合成过程较复杂，过程中会产生一系列性质相似的杂质，包括中间体、降解杂质、副产物及副产物的衍生杂质。由于这些杂质与yk-009的结构中均无明显的发色基团且性质非常接近，因此yk-009与其杂质（有关物质）的分离难度较大，尚未检索到记载yk-009或者其他近似阳离子中的有关物质的分离检测方法。
6、
7、因此，如何提供一种能够有效检出yk-009中有关物质的方法，成为了亟待解决的问题。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法及其应用。本专利技术提供的检测方法能够同时准确检测yk-009中的多种有关物质，灵敏度高，准确度高，重现性高，耐用性好，便于对yk-009中有关物质进行准确检测和质量监控。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供了一种阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
4、（1）将待测样品与稀释剂混合，得到供试品溶液；
5、（2）将有关物质标准品与稀释剂混合，得到对照品溶液；
6、（3）将供试品溶液、对照品溶液进行液相色谱检测，根据检测结果计算有关物质含量；所述液相色谱检测的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为乙酸-三乙胺的水溶液，所述流动相b为乙酸-三乙胺的乙腈溶液。
7、步骤（1）、（2）不区分先后顺序。
8、所述有关物质包括杂质1-杂质10中任意一种或至少两种的组合：
9、杂质1；
10、杂质2；
11、杂质3；
12、杂质4；
13、杂质5；
14、杂质6；
15、杂质7；
16、杂质8；
17、杂质9；
18、杂质10。
19、上述方法能够同时准确检测yk-009中的多种有关物质，灵敏度高，准确度高，重现性高，耐用性好，便于对yk-009中有关物质进行准确检测和质量监控。
20、优选地，所述稀释剂包括甲醇和/或乙腈，优选乙腈。
21、优选地，步骤（3）所述液相色谱检测的流动相包括流动相a和流动相b；
22、所述流动相a为乙酸-三乙胺的水溶液，所述流动相b为乙酸-三乙胺的乙腈溶液。
23、优选地，所述流动相a由乙酸-三乙胺水溶液与水混合配制得到，所述流动相b由乙酸-三乙胺水溶液与乙腈混合配制得到；
24、所述配制流动相a和流动相b中的乙酸-三乙胺水溶液中，三乙胺与水的体积比独立地为(1-3):(17-19)，ph独立地为6.5-7.5，优选7.0，其中三乙胺的份数可以是1、1.5、2、2.5或3等，水的份数可以是17、17.5、18、18.5或19等，ph可以是6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
25、优选地，所述流动相a和流动相b中乙酸-三乙胺水溶液的浓度独立地为0.8-1.2%，例如0.8%、0.9%、1%、1.1%、1.2%等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用，优选1%。
26、优选地，步骤（3）所述液相色谱检测采用梯度洗脱方式进行，具体洗脱梯度如下：
27、第0-15 min，流动相a的体积分数为23-27%，其余为流动相b；
28、第15-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述稀释剂包括甲醇和/或乙腈。
3.根据权利要求2所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A由乙酸-三乙胺水溶液与水混合配制得到，所述流动相B由乙酸-三乙胺水溶液与乙腈混合配制得到。
4.根据权利要求3所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述配制流动相A和流动相B中的乙酸-三乙胺水溶液中，三乙胺与水的体积比独立地为(1-3):(17-19)，pH独立地为6.5-7.5。
5.根据权利要求4所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相A和流动相B中乙酸-三乙胺水溶液的浓度独立地为0.8-1.2%。
6.根据权利要求5所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，步骤（3）所述液相色谱检测采用梯度洗脱方式进行，具体洗脱梯度如下：
7.根据权利要
8.根据权利要求7所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，步骤（3）所述液相色谱检测中，色谱柱温度为20-50℃，流动相流速为0.2-0.4 mL/min，进样量为2-10 μL。
9.根据权利要求8所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质包括杂质1-杂质10。
10.一种根据权利要求1-9中任一项所述的阳离子脂质YK-009中有关物质的检测方法在阳离子脂质YK-009质量控制中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述稀释剂包括甲醇和/或乙腈。
3.根据权利要求2所述的阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a由乙酸-三乙胺水溶液与水混合配制得到，所述流动相b由乙酸-三乙胺水溶液与乙腈混合配制得到。
4.根据权利要求3所述的阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述配制流动相a和流动相b中的乙酸-三乙胺水溶液中，三乙胺与水的体积比独立地为(1-3):(17-19)，ph独立地为6.5-7.5。
5.根据权利要求4所述的阳离子脂质yk-009中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a和流动相b中乙酸-三乙胺水溶液的浓度独立地为0.8-1.2%...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晋瑜，宋更申，边艳慧，张宏雷，刘立杰，王利娟，
申请(专利权)人：北京悦康科创医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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