【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一株脂多糖修饰b群脑膜炎球菌与其外膜囊泡制备及应用。
技术介绍
1、脑膜炎奈瑟菌(neisseria meningitides，nm)是专性寄生于人的革兰阴性双球菌，又名脑膜炎球菌。在细菌性脑膜炎中，由脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎(流脑)是唯一能引起暴发流行的疾病。该菌可入侵人类的脑部和脊髓，引起化脓性感染，严重者可致脑和神经系统的永久损坏。由于b群脑膜炎球菌(meningococcus serogroupb，menb)的cps免疫原性较弱，且结构与人类神经组织的n-乙酰神经氨酸结构相似，可能产生交叉反应而引发自身免疫疾病，限制了b群流脑荚膜多糖疫苗的成功研制。
2、目前，人们对b群脑膜炎球菌疫苗的研究日益关注，并开发出了不少疫苗，如cn110804102b提供了由两种嵌合蛋白组成的疫苗，cn104127869b提供了由多种b群脑膜炎球菌的omv蛋白组成的多价疫苗。
3、不过，在对于如何通过基因工程进一步构建具有免疫保护作用的突变株方面，人们尚未完全研究清楚。因此，如何构建新的突变株以开发具有作为疫苗应用价值的产品，是本领域所亟需的。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种突变株，该突变株的外膜囊泡可以高效刺激tlr4激活并对脑膜炎奈瑟菌菌血症具有优异保护效力。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
3、一株脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球
4、具体地，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌是对b群脑膜炎球菌敲除lpta基因后在该基因处过表达lpxe基因后所得。
5、具体地，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，是通过同源重组的方法，将强制表达磷酸基团合酶lpxe的基因lpxe构建至敲除lpta基因的上下游同源臂之间，形成敲除lpta同时表达lpxe的基因型，得到具有可高效激活tlr4受体的最优lipid a结构的b群脑膜炎球菌突变株。
6、具体地，所述同源重组过程中，所用的质粒pre112-lpta/ptrc-lpxe的构建方法如下：
7、根据genbank上序列号为nz_lr134326.1的基因序列，设计在lpta同源臂中间插入lpxe序列，引物如下：
8、lpta-3f：5’tgagacgctgacgataattgc3’
9、lpta-3r：5’cgatgaaatttgcgcgatgacg3’
10、lpxe-1f：5’ccgagactttgacgtagacgtgacgtgacgatgacg3’
11、lpxe-1r：5’cgacgatagcgatgacgattgacgattaaccgt3’；
12、提取处于对数生长期的bordetella bronchiseptica参考菌株的基因组dna作为模板，分别利用lpxe-1f和lpxe-1r扩增lpxe全长片段，随后以pre112-lpta质粒为模板，利用lpta-3f和lpta-3r扩增产物，随后将两段pcr产物利用一步法克隆方法，将反应产物电转入大肠杆菌工程菌感受态χ7232中，得到重组质粒pre112-lpta/ptrc-lpxe。
13、本专利技术还提供了上述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌的外膜囊泡。
14、本专利技术另外一个目的在于提供上述外膜囊泡在制备脑膜炎奈瑟菌菌血症疫苗方面的应用。
15、如本专利技术的实施例所示，仅敲除lipid a合成相关基因lpta或者敲除lpta同时表达pagl的突变株所得的外膜囊泡所产生的免疫保护水平均明显差于本专利技术所得菌株的外膜囊泡。
16、本专利技术提供的上述菌株，是通过对b群脑膜炎球菌外膜脂多糖内脂a(lipid a)结构进行改造，使其能够高效激活tlr4信号通路。本专利技术菌株所产生的外膜囊泡免疫动物可引发高效免疫保护，可作为高效疫苗进行开发使用。
17、本专利技术的有益效果：
18、本专利技术所得脂多糖修饰b群脑膜炎球菌的外膜囊泡可高效刺激tlr4激活，对于b群脑膜炎球菌具有优异的免疫保护效力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株脂多糖修饰B群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰B群脑膜炎球菌的分类命名为奈瑟氏球菌，保藏号为CGMCC No.36402，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2024年7月19日。
2.根据权利要求1所述的脂多糖修饰B群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰B群脑膜炎球菌是对B群脑膜炎球菌敲除lptA基因后在该基因处过表达lpxE基因后所得。
3.根据权利要求2所述的脂多糖修饰B群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰B群脑膜炎球菌，是通过同源重组的方法，将强制表达磷酸基团合酶LpxE的基因lpxE构建至敲除lptA基因的上下游同源臂之间，形成敲除lptA同时表达lpxE的基因型，得到具有可高效激活TLR4受体的最优lipid A结构的B群脑膜炎球菌突变株。
4.根据权利要求3所述的脂多糖修饰B群脑膜炎球菌，其特征在于，所述同源重组过程中，所用的质粒pRE112-lptA/Ptrc-lpxE的构建方法如下：
5.一种具有免疫保护的外膜囊泡，其特征在于，所述外膜囊泡为权利要求1所述脂多糖修饰B群脑
6.权利要求5所述的外膜囊泡在制备脑膜炎奈瑟菌菌血症疫苗方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一株脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌的分类命名为奈瑟氏球菌，保藏号为cgmcc no.36402，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2024年7月19日。
2.根据权利要求1所述的脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌是对b群脑膜炎球菌敲除lpta基因后在该基因处过表达lpxe基因后所得。
3.根据权利要求2所述的脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，其特征在于，所述脂多糖修饰b群脑膜炎球菌，是通过同源重组的方法，将强制表达磷酸基团合酶lp...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘琼，黄孝天，曾令兵，蔚晓敏，曹艳丽，尚银攀，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：
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