【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病毒检测，具体涉及gag重组表位蛋白及其应用。
技术介绍
1、绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenomatosis，opa；sheep pulmonaryadenomatosis，spa)是由绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus，jsrv)引起的一种慢性、进行性、接触性传染的肺脏肿瘤性疾病，以肺泡和支气管上皮呈现出进行性腺瘤样增生、咳嗽、流鼻涕、消瘦、呼吸困难为主要特征，并最终导致死亡。
2、流行病学调查结果显示opa发病多以典型和非典型混合特征出现，临床诊断难以被发现，多在羊死亡或屠宰后通过opa组织病理学检测方法发现相应的肺组织病理变化而确诊。特别是感染opa的羊体内不能检出针对jsrv的循环抗体或t淋巴细胞应答，因此，opa患羊的早期诊断仅能够通过实验室的jsrv核酸pcr(polymerase chain reaction)检测。
3、然而，opa组织病理学检测的样品为病死羊的肺组织，样品采集不方便，来源少；而且只能在羊死亡或屠宰后进行，羊场群体的opa检测净化、引种检疫和opa流行病学调查，对临床安全生产无指导意义。pcr技术检测针对核酸，包括采样、rna抽提、反转录、基因扩增等环节，结果的影响因素多，且存在操作过程复杂、耗时长、成本高等不足。再者，opa组织病理学和pcr技术检测都存在一次能检测的样品数量少，不能进行临床大量样品的批量化诊断检测的缺陷；又如，opa组织病理学和pcr技术检测都是单样品操作，受操作人员技术水平和其他
4、因此，开发能够针对病原结构蛋白、可在临床进行大批量检测的试剂或方法，将能够有效解决opa诊断存在的问题，实现羊场opa净化，保障羊群健康，并促进养羊业的快速发展。
技术实现思路
1、为了改善jsrv检测试剂性能，本专利技术人对gag全长蛋白进行研究，通过大量实验，从多种不同的截短型蛋白中选取了一种特异性强、重复性好、敏感性高，且满足免疫诊断试剂开发需求的gag重组表位抗原，从而完成本专利技术。
2、为了达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种gag重组表位蛋白，所述gag重组表位蛋白的氨基酸序列：
4、1)如seq id no:1所示；或者
5、2)由1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或者几个氨基酸获得的衍生的氨基酸序列，所述衍生的氨基酸序列具有1)中所示的氨基酸序列的活性。
6、第二方面，提供一种多核苷酸，所述多核苷酸：
7、a)编码权利要求1所述的gag重组表位蛋白；
8、b)如seq id no:2所示；或者
9、c)与a)或b)互补。
10、第三方面，提供一种多核苷酸构建体，所述多核苷酸构建体含有如本专利技术所述的多核苷酸。
11、第四方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有如本专利技术所述的多核苷酸。
12、第五方面，提供用于检测jsrv的组合物，所述组合物包括如本专利技术所述的gag重组表位蛋白，所述gag重组表位蛋白包被在固相支持物上，或者所述gag重组表位蛋白带有可检测的标记物。
13、第六方面，提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术所述的gag重组表位蛋白。
14、优选的，
15、1)所述gag重组表位蛋白包被在固相支持物上；
16、2)所述gag重组表位蛋白带有可检测的标记物；或者
17、3)所述gag重组表位蛋白未包被在固相支持物上且未带有可检测的标记物。
18、第七方面，提供一种用于检测jsrv的试剂盒，所述试剂盒包括：
19、包被有gag重组表位蛋白的固相支持物，
20、抗gag重组表位蛋白的兔多克隆抗体，
21、带有可检测的标记物的抗兔单克隆抗体。
22、第八方面，提供本专利技术所述的gag重组表位蛋白在制备用于检测jsrv的组合物或用于检测jsrv的试剂盒中的应用。
23、第九方面，提供本专利技术所述的组合物或试剂盒在检测jsrv中的应用。
24、在本专利技术中，gag重组表位蛋白(抗原)的质量是影响jsrv免疫检测的最关键因素，故本领域中存在对gag重组表位蛋白(抗原)的性能不断改进以更好地提升、满足jsrv体外检测能力的需求。同时，由于病毒性传染病的抗原往往较大，在体外难以实现完整抗原蛋白的表达，或者即使实现体外表达，分子量比较大的抗原蛋白也往往不能正确折叠，导致后期的复性困难，或者复性获得的抗原活性很差，制约了检测试剂的开发。
25、为此，本专利技术提供了一种新的gag重组表位蛋白(抗原)，其选取了gag全长蛋白的304-605aa区域。这样的重组抗原不仅涵盖gag重组表位蛋白(抗原)的优势抗原表位区域，还具有优于与选取区域略有不同的其它抗原的检测能力，同时具有更强的特异性、更好的重复性以及更高的敏感性。
26、在本专利技术中，衍生的重组抗原可以与如seq id no:1所示的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％的一致性。
27、氨基酸(或核酸)序列之间的一致性百分比可以使用本领域技术人员已知的标准方法来确定。例如，为了确定两条氨基酸序列之间的同源性百分比，将序列进行比对以达到最佳比较目的。然后比较在相应氨基酸位置处的氨基酸残基。可以在一条或两条氨基酸序列中引入空位以实现最佳比对，而且为了比较的目的可以忽略非同源序列。当第一序列中的位置被与第二序列相应位置处的氨基酸残基相同的氨基酸残基占据时，则在该位置处，这两条序列是一致的。考虑进为了最佳比对而引入的空位的数量和每个空位的长度，两条序列之间的一致性百分比是由这两条序列共有的相同位置的数量的函数。两条序列之间的序列比较和一致性百分比及相似性可以使用数学算法来确定。
28、本专利技术的试剂盒可采用本领域技术人员熟知的多种形式，例如，试纸、含有各种测试所需试剂的测试盒、微流体芯片等，可以按照已知的标准步骤来制造试剂盒。例如，本专利技术的试剂盒可以是胶体金试纸。例如，本专利技术的试剂盒根据需要可包括容器、芯片、使用说明书、缓冲剂、免疫助剂和/或用于进行诊断/检测所需的其他材料、结构和/或试剂。
29、在本专利技术中，本专利技术的gag重组表位蛋白(抗原)在用于制备试剂盒或组合物的情况下，例如可以溶解或干燥形式存在于容器中，包被在固相支持物上[例如，膜(如nc膜)、板、珠(如磁珠)、微球(诸如羧基微球、氨基微球、氯甲基微球、物理吸附微球等)]，以溶解或干燥形式存在于芯片的腔室中，但本专利技术不限于此。
30、在本专利技术中，本专利技术的试剂盒中用于进行诊断/检测所需的其他反应物包括但不限于，除本专利技术的gag重组表位蛋白(抗原)外的其他gag抗原等。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种gag重组表位蛋白，其特征在于，所述gag重组表位蛋白的氨基酸序列：
2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸：
3.一种多核苷酸构建体，其特征在于，所述多核苷酸构建体含有如权利要求2所述的多核苷酸。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求2所述的多核苷酸。
5.用于检测JSRV的组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1所述的gag重组表位蛋白，所述gag重组表位蛋白包被在固相支持物上，或者所述gag重组表位蛋白带有可检测的标记物。
6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的gag重组表位蛋白。
7.权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，
8.一种用于检测JSRV的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
9.权利要求1所述的gag重组表位蛋白在制备用于检测JSRV的组合物或用于检测JSRV的试剂盒中的应用。
10.权利要求5所述的组合物或权利要求8所述的试剂盒在检测JSRV中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种gag重组表位蛋白，其特征在于，所述gag重组表位蛋白的氨基酸序列：
2.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸：
3.一种多核苷酸构建体，其特征在于，所述多核苷酸构建体含有如权利要求2所述的多核苷酸。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求2所述的多核苷酸。
5.用于检测jsrv的组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1所述的gag重组表位蛋白，所述gag重组表位蛋白包被在固相支持物上，或...
【专利技术属性】
技术研发人员：敬晓棋，李河林，温志医，萨如拉，王斌，王占刚，李梅，高子华，刘美丽，刘芳歆，宋锦鹏，
申请(专利权)人：榆林学院，
类型：发明
国别省市：
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