【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本申请大体上涉及分离的单克隆抗体，特别是嵌合或全人源单克隆抗体，或其抗原结合部分，其与sirpα结合，具有高亲和力和功能性。还提供编码该抗体或其抗原结合部分的核酸分子，用于表达该抗体或其抗原结合部分的表达载体、宿主细胞和方法。本申请还提供可以包含该抗体或其抗原结合部分的双特异性分子、免疫偶联物、嵌合抗原受体、溶瘤病毒和药物组合物，以及使用本申请sirpα抗体或其抗原结合部分的治疗方法。
技术介绍
1、免疫检查点是免疫系统的调节器，其中免疫细胞必须通过刺激性和/或抑制性免疫检查点，才能继续进行激活或失能。抑制性的免疫检查点对自身耐受特别重要，可阻止免疫系统攻击正常细胞。它们经常被例如肿瘤细胞操纵，以逃避免疫监视。在过去的几十年中，抑制性免疫检查点阻断已在例如癌症免疫疗法中广泛研究，pd-1和/或ctla-4的抑制剂已临床批准用于治疗多种癌症。
2、信号调节蛋白α(sirp-α，也称为sirpα)是先天免疫细胞的抑制性免疫检查点，主要表达在骨髓细胞，包括巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞。其在细胞质结构区含有免疫受体酪氨酸抑制基序(itim)。cd47(在几乎所有细胞类型上表达的膜蛋白)与sirpα一经结合，itim变得磷酸化并募集抑制性分子例如shp-1和shp-2，对细胞激活发挥抑制作用(veillette a,chen j.(2018)trends immunol.39(3):173-184)。很多肿瘤细胞过表达cd47分子，抑制免疫细胞的吞噬作用。
3、到目前为止，已发现10个人sirpα等
4、sirpα具有两个接近的sirp家族成员，表达于巨噬细胞和中性粒细胞的sirpβ，和表达于淋巴细胞和自然杀伤细胞的sirpγ。sirpβ不结合cd47，但是一种刺激性受体，而sirpγ以低亲和力结合cd47，但是一种非信号转导受体(barclay,a.n.and brown,m.h.(2006)nat.rev.immunol.6(6):457–464；takahashi s.(2018)biomedical reports.9(1):3-7)。
5、临床前研究显示，破坏sirpα-cd47相互作用，可例如借助于癌细胞上的促吞噬受体如slamf7和mac-1，促进巨噬细胞对癌细胞的吞噬吸收(chen,j.et al.(2017)544:493–497)。吞噬过程中产生的来自癌细胞的抗原肽，可随后启动适应性免疫反应。目前处于临床试验的大多数sirpα-cd47阻断药物，靶向cd47分子，并且能够诱导fcr介导的吞噬作用，例如重组sirpα-fc融合蛋白，或igg1 cd47抗体。这些药物也可能损害正常的表达cd47的造血细胞和非造血细胞，造成贫血、血小板减少和/或白细胞减少，正如在非人模型中观察到的(veillette a,chen j.(2018)同上)。因此，使用针对sirpα的阻断型抗体，存在一些好处，sirpα的组织学分布更加受限，造成的毒性有限。甚至还发现，sirpα在某些实体瘤包括肾细胞瘤和黑色素瘤中异常表达，sirpα抗体可以直接对这些肿瘤细胞启动fcr介导的吞噬作用(yanagita,t.et al.(2017)jci insight 2(1):e89140)。
6、据报道，kwar23，一种经位于cd47-sirpα界面上的表位结合sirpα的sirpα抗体，在体外单独使用或与西妥昔单抗(cetuximab)联合使用时，以浓度依赖的方式，增强巨噬细胞介导的对结直肠腺癌细胞的吞噬作用。bi 765063(boehringer ingelheim/ose)，一种选择性抑制sirpα并恢复肿瘤相关巨噬细胞以及树突状细胞对肿瘤细胞应答的活性的sirpα抗体，目前正作为单药或与pd-1拮抗剂联合，在1期临床试验中，在晚期实体瘤患者中进行测试。cc-95251(celgene)也单独或联合西妥昔单抗或利妥昔单抗(rituximab)，处于治疗晚期实体癌和血液癌的1期临床试验中(uger r,johnson l.(2020)expert opin biolther.20(1):5-8；zhang w et al.(2020)front immunol.11:18)。
7、研究表明，针对sirpα的阻断型抗体可影响sirp家族其他成员的功能，人类sirpα的多态性可能使抗体在某些受试者中疗效较低(yanagita,t.et al.(2017)同上；barclay,a.n.and van den berg,t.k.(2014)annu.rev.immunol.32:25–50)。因此，总是需要更多具有所需特性的单克隆抗体。
8、本申请中对于任何文件的引用或标识，并不是承认这些文件是本专利技术的现有技术。
技术实现思路
1、本申请的专利技术人发现了拮抗型的sirpα抗体或其抗原结合部分，其(a)特异性结合sirpα(例如，人和猴sirpα，包括亚型1(v1)、亚型2(v2)和亚型8(v8))，与现有技术sirpα抗体例如kwar23和bi-765063相比，具有相当的(如果不是更高的话)结合亲和力/活性；(b)与sirpβ交叉反应，与现有技术sirpα抗体例如kwar23和bi-765063相比，具有相当的(如果不是更高的话)结合亲和力/活性；(c)不结合sirpγ；(d)不结合小鼠sirpα；(e)阻断sirpα结合cd47，与现有技术抗体相比，具有相当的(如果不是更高的话)阻断活性；(f)能被表达sirpα的细胞内化；(g)诱导巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，与现有技术sirpα抗体例如kwar23和bi-765063相比，具有相当的(如果不是更高的话)活性；和/或(h)显示出体内抗肿瘤活性。
2、本申请的抗体或其抗原结合部分可以用于多种应用，包括体外对人或猴sirpα蛋白的检测以及癌症(包括实体癌和血液癌)的治疗。
3、因此，一方面，本申请涉及结合sirpα的分离的单克隆抗体(例如，嵌合或全人源抗体)或其抗原结合部分，其包含(i)重链可变区，其可以包含vh cdr1区、vh cdr2区和vhcdr3区，其中该vh cdr1区、vh cdr2区和vh cdr3区可以分别包含与(1)seq id nos:1、2(x1＝n、x2＝g；x1＝n、x2＝a；x1＝a、x2＝g)和3；(2)seq id nos:9(x＝y)、10(x1＝n、x2＝g；x1＝n、x2＝a；x1＝a、x2＝g)和11；或(3)seq id nos:9(x＝f)、10(x1＝n、x2＝g)和11具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或ii)轻链可变区，其可以包含vl cdr1区、vl cdr2区和vl cdr3区，其中该vl cdr1区、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与信号调节蛋白α(SIRPα)结合，包含：
2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含重链可变区和轻链可变区，其中该VH CDR1区、VH CDR2区、VH CDR3区、VL CDR1区、VL CDR2区和VL CDR3区分别包含与(1)SEQ ID NOs:1、2(X1＝N、X2＝G)、3、4、5(X＝N)和6；(2)SEQ ID NOs:1、2(X1＝N、X2＝A；或X1＝A、X2＝G)、3、4、5(X＝A)和6；(3)SEQ ID NOs:9(X＝Y)、10(X1＝N、X2＝G；X1＝N、X2＝A；X1＝A、X2＝G)、11、12、13和14；或(4)SEQ ID NOs:9(X＝F)、10(X1＝N、X2＝G)、11、12、13和14具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该重链可变区包含与SEQ ID NOs:
4.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该轻链可变区包含与SEQ ID NOs:8(X＝N；X＝A)、16(X＝N；X＝S)或18具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该重链可变区和该轻链可变区分别包含与(1)SEQ ID NOs:7(X1＝N、X2＝G)和8(X＝N)；(2)SEQ ID NOs:7(X1＝N、X2＝A)和8(X＝A)；(3)SEQ ID NOs:7(X1＝A、
6.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其为IgG1、IgG2或IgG4同种型。
7.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链恒定区和轻链恒定区，其中该重链恒定区包含SEQ ID NO:19或38(X1＝M、X2＝S、X3＝T；X1＝Y、X2＝T、X3＝E)所示的氨基酸序列且与该重链可变区相连，其中该轻链恒定区包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列且与该轻链可变区相连。
8.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其(a)结合人SIRPα；(b)结合猴SIRPα；(c)不结合小鼠SIRPα；(d)结合人SIRPβ；(e)不结合人SIRPγ；(f)阻断SIRPα与CD47结合；(g)能被表达SIRPα的细胞内化；(h)诱导巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；和/或(i)具有体内抗肿瘤活性。
9.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其为嵌合、或人源化抗体。
10.一种核酸分子，其编码权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分。
11.一种表达载体，其包含权利要求10所述的核酸分子。
12.一种宿主细胞，其包含权利要求11所述的表达载体、或在其基因组中整合有核酸分子。
13.一种药物组合物，其包含权利要求1至9中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、权利要求10所述的核酸分子、权利要求11所述的表达载体、或权利要求12所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。
14.一种在有需求的受试者中治疗与SIRPα相关的癌症的方法，包括向该受试者施用治疗有效量的权利要求13所述的药物组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中癌症是实体癌或血液癌。
16.如权利要求15所述的方法，其中癌症是非小细胞肺癌、乳癌、卵巢癌、肾细胞癌、结直肠癌或胰腺癌。
17.如权利要求14所述的方法，其中还向该受试者施用靶向肿瘤相关抗原的抗体。
18.如权利要求17所述的方法，其中该肿瘤相关抗原选自CD19、CD20、CD22、CD4、CD24、CD38、CD123、CD228、CD138、BCMA、GPC3、CEA、叶酸受体(FRα)、间皮素、CD276、gp100、5T4、GD2、EGFR、MUC-1、PSMA、EpCAM、MCSP、SM5-1、MICA、MICB、...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与信号调节蛋白α(sirpα)结合，包含：
2.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，包含重链可变区和轻链可变区，其中该vh cdr1区、vh cdr2区、vh cdr3区、vl cdr1区、vl cdr2区和vl cdr3区分别包含与(1)seq id nos:1、2(x1＝n、x2＝g)、3、4、5(x＝n)和6；(2)seq id nos:1、2(x1＝n、x2＝a；或x1＝a、x2＝g)、3、4、5(x＝a)和6；(3)seq id nos:9(x＝y)、10(x1＝n、x2＝g；x1＝n、x2＝a；x1＝a、x2＝g)、11、12、13和14；或(4)seq id nos:9(x＝f)、10(x1＝n、x2＝g)、11、12、13和14具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该重链可变区包含与seq id nos:7(x1＝n、x2＝g；x1＝n、x2＝a；x1＝a、x2＝g)、15(x1＝n、x2＝g；x1＝n、x2＝a；x1＝a、x2＝g)或17具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该轻链可变区包含与seq id nos:8(x＝n；x＝a)、16(x＝n；x＝s)或18具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中该重链可变区和该轻链可变区分别包含与(1)seq id nos:7(x1＝n、x2＝g)和8(x＝n)；(2)seq id nos:7(x1＝n、x2＝a)和8(x＝a)；(3)seq id nos:7(x1＝a、
6.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其为igg1、igg2或igg4同种型。
7.如权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链恒定区和轻链恒定区，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，马志清，彭则羽，刘劲禹，
申请(专利权)人：博奥信生物技术南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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