本发明专利技术是利用生物技术研制出的一株具有抗结直肠肿瘤活性的抗人ＣＥＡ蛋白的鼠单克隆抗体。本发明专利技术包括：抗人ＣＥＡ鼠单克隆抗体ＣＣ４，利用其抗原结合能力特异性检测ＣＥＡ家族蛋白的方法，及利用其抗结直肠肿瘤活性的肿瘤治疗方法。这株抗体能够在分子、细胞和组织水平特异性识别人ＣＥＡ，并识别一个广泛分布于ＣＥＡ家族蛋白中的特殊抗原表位。ＣＣ４在组织水平特异性结合结直肠癌组织，在动物模型及细胞水平上表现出很强的抑制肿瘤生长、迁移及侵袭的能力。这株抗体及以其为基础的检测和治疗手段将成为基础研究或临床应用中有效的肿瘤诊断和治疗的工具。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗人CEA抗体，命名为CC4，其特征在于其能够特异性识别上述人CEA抗原表位。 优选地，所述抗人CEA抗体特征在于包括抗体重链和抗体轻链， 其中所述抗体重链包括作为CDR的由SEQ ID NO3的氨基酸序列组成的CDR1，由SEQ ID NO4的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQID NO5的氨基酸序列组成的CDR3， 所述抗体轻链包括作为CDR的由SEQ ID NO6的氨基酸序列组成的CDR1，由SEQ ID NO7的氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ IDNO8的氨基酸序列组成的CDR3。 更优选地，所述抗体的重链可变区由SEQ ID NO9的氨基酸序列组成，轻链可变区由SEQ ID NO10的氨基酸序列组成。 在本专利技术的另一个方面，还涉及上述抗人CEA的抗体在制备用于靶向CEA的人体肿瘤的成像定位诊断的诊断剂中的应用。优选地，这种诊断可以是应用实施例中所述的活体荧光影像技术为基础的肿瘤诊断手段。 在本专利技术的另一方面，还涉及上述抗人CEA的抗体在制备用于治疗肿瘤的药物组合物中的应用。优选地，所述肿瘤是结直肠癌，肝癌，肺癌。 在另一个方面，本专利技术还涉及一种组合物，例如用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含上述任一方面的抗人CEA抗体，和药用载体。 用于本文时，“药用载体”包括生理适合的任何和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延缓试剂等。优选地，所述载体适合于静脉内的、肌内的、皮下的、肠胃外的、脊柱的或表皮的施用(例如，通过注射或灌输)。 通过许多本领域已知的方法可以施用本专利技术的组合物。如本领域技术人员将理解，施用路径和/或模式将取决于所需结果而变化。 为了通过某些施用路径来施用本专利技术化合物，用一种材料来包被化合物，或与一种材料共同施用化合物以预防其失活可能是必需的。例如，可以以适当载体，例如脂质体或稀释剂来给受试者施用所述化合物。药用稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。 药用载体包括用于即时制备灭菌的可注射溶液或分散体的灭菌水溶液或分散体和灭菌粉末。将这些介质和试剂用于药用活性物质的应用为本领域所知。 在用于本文时，短语“肠胃外的施用”和“经肠胃外施用”表示除肠内的和局部施用以外的通常通过注射的施用模式，包括但不局限于，静脉内的、肌内的、动脉内的、鞘内的、囊内的、眶内的、心内的、皮内的、腹膜内的、经气管的、皮下的、表皮下的、关节内的、囊下的、蛛网膜下的、脊柱内的、硬膜外的、胸骨内的注射和灌输。 无论选择何种施用路径，通过为本领域技术人员已知的常规方法，将可以以适合的水合形式和/或本专利技术的药物组合物形式使用的本专利技术的化合物配制成可药用剂型。 对于特定患者、组合物和施用方式，本专利技术药物组合物的活性成分的实际剂量水平可以变化以获得有效实现理想的治疗反应而不会对患者具有毒性的活性成分的量。选定的剂量水平将取决于许多药物动力学因素，其包括所用的本专利技术特定组合物的活性，施用的路径，施用的时间，所用的特定化合物的排泄率，治疗的持续时间，与所用的特定化合物结合使用的其它药物、化合物和/或物质，待治疗的患者的年龄、性别、体重、疾病状况、一般健康和以前的疾病史和医学领域众所周知的类似因素。 所述组合物必须是无菌且流体的，以到达组合物可以通过注射器进行传递的程度。除了水之外，载体优选是等渗缓冲盐溶液。 在另一个方面，本专利技术还涉及分泌抗人CEA抗体的杂交瘤细胞株，保藏号为CGMCC NO2504。 在另一个方面，本专利技术还涉及编码能与下面定义的各个另外抗体链一起装配的多肽的核酸，其中所述多肽是下述多肽的任一种 a)抗体重链，其为上述所定义的抗体重链之一； b)抗体轻链，其为上述所定义的抗体轻链之一。 同时，本专利技术还涉及包括上述核酸的表达载体，其能够在原核或真核宿主细胞中表达所述核酸。以及包括所述表达载体的原核或真核宿主细胞。 在本专利技术的另一个方面，还涉及一种制备结合人CEA的抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达上述编码抗体重链的核酸和编码抗体轻链的核酸，并且从所述细胞中回收所述多肽。 在本专利技术的另一个方面，还涉及所述抗人CEA的抗体的衍生物，其中所述衍生物为所述抗体与生物标记物(如生物素、HRP、碱性磷酸酶、FITC、PE、Cy3、Cy5等常规荧光染料、纳米磁珠等纳米材料)、抗肿瘤药物(如现有技术已知的卡铂、顺铂、五氟尿嘧啶等)、毒素(如蓖麻毒素、淋巴毒素等)、放射活性剂(如131碘、90钇、放射性铜等)偶联的产物。 本领域的普通技术人员基于说明书关于抗人CEA抗体的教导，结合现有技术的知识，完全可以毫无困难地获得上述衍生物，进而确定衍生物的效果。 本专利技术的创新点在于(1)研制了一株针对人CEA蛋白的鼠单克隆抗体；(2)揭示了这株抗CEA抗体识别的抗原表位，并发现这个抗原表位保守存在于包括CEACAM1在内的CEA家族其他蛋白成员中，同时证实了CC4在分子、细胞及组织水平上对于CEA蛋白的结合有显著差别；(3)发现了CC4能够通过抑制肿瘤细胞增殖、迁移、聚集和侵袭，以及抗体介导的细胞毒作用，来抑制肿瘤生长。 附图说明 图1单克隆抗体CC4的亚型鉴定。 图2单克隆抗体CC4对于结直肠肿瘤及正常组织的免疫组化染色，箭头指示组化染色部位。 图3单克隆抗体CC4对于结直肠肿瘤细胞LS 174T的免疫荧光染色，绿色萤光染色部位如箭头所指。 图4单克隆抗体CC4对于结直肠肿瘤及正常组织裂解液和结直肠癌细胞LS 174T及SW948的免疫印迹结合。 图5单克隆抗体CC4在免疫沉淀实验中结合存在于LS 174T细胞裂解液中的抗原。泳道1和2是免疫沉淀前的样品，泳道3和4分别是应用CC4和IgG免疫沉淀之后的样品，泳道5和6是用CC4和IgG沉淀下来的目的抗原蛋白。 图6CC4与CEACAM5蛋白的结合。左图是转染pcDNA3.1空载体的T2-4细胞，右图是转染pcDNA3.1-CEACAM5的T2-4细胞。阴影是用IgG染色细胞，黑线是用CC4染色细胞。 图7CEACAM5蛋白的重组片段示意图。 图8CEACAM5重组结构域1-3在免疫印迹实验中与抗体CC4及anti-His抗体的结合。左图为蛋白凝胶电泳，右图为免疫印迹实验。 图9CEACAM5蛋白重组片段在免疫印迹实验中与抗体CC4及anti-His抗体的结合。左图为蛋白凝胶电泳，右图为免疫印迹实验。 图10单克隆抗体CC4结合CEACAM5蛋白上位于aa 42-61的一段抗原表位。A图是CEACAM5全长及缺失突变的示意图。B图是CC4抗体和RACEA多抗分别对表达CEACAM5或缺失突变CEACAM5-Δ42-61的293T细胞。阴影是用IgG染色细胞，黑线是用CC4染色细胞，而绿线是用抗CEA兔多抗RACEA染色细胞。 图11不同CEA蛋白家族成员的位于aa 42-61的保守表位比较。 图12单克隆抗体CC4结合CEACAM1蛋白上位于aa 42-61的一段抗原表位。A图是CEACAM1全长及缺失突变的示意图。B图是CC4抗体和RACEA多抗分别对表达CEACAM1或缺失突变CEACAM1-Δ42-61的293T细胞。阴影是用IgG染色细胞，黑线是用CC4染色细胞，而绿线是用抗CEA兔多抗RACEA本文档来自技高网...
【技术保护点】
人癌胚抗原家族蛋白的抗原表位，其氨基酸序列选自由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２，４７，５５和５７共同含有的保守的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：阎锡蕴，冯静，郑超固，杨东玲，卢迪，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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