【技术实现步骤摘要】
本申请涉及一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，属于胶体化学中的微胶囊或微球制造。
技术介绍
1、脂质体是一类由磷脂分子自组装而成，具有封闭双层结构的分子有序组合体，又被称为磷脂囊泡，其具有被一个或多个磷脂双层或片层包围的水核。脂质体可以根据其大小（小、大和巨型脂质体）、磷脂层数（单层、寡层和多层）和磷脂电荷（中性、 阴离子或阳离子）进行分类。巨型脂质体（guv）为粒径大于1μm的脂质体，超高的包封体积与包封率，并且尺寸大小接近于大部分生物细胞，被广泛用作人工细胞模型、药物载体和反应基元。因此，guv在分析检测、生物医药、化学、材料等众多领域具有潜在的应用价值。
2、guv主要通过水化法、电形成法、相转移法等传统制方法制备，存在尺寸不均一、不易控制及对负载物质的封装效率低等缺点。所有上述缺点都可以通过利用微流体技术制备基于脂质的囊泡来克服，赋予微流控技术所获得guv以单分散、尺寸可调、封装率高、封装均匀等优点。微流控方法制备水包油包水（w/o/w）双重乳液，磷脂溶解在中间油相中，在连续相中加入表面活性剂完成去湿过程，通过去湿（dewetting）过程去除有机层，获得巨型脂质体。双重乳液可以轻松地将亲水性和疏水性药物掺入脂质体中，也被用于将蛋白质、核酸、细胞和微粒封装到脂质体中。
3、但表面活性剂附着脂质体表面，不仅改变了膜的生物物理特性，对蛋白质在膜上的组装等研究具有不利影响；利用双重乳液法最终形成的脂质体还会残留有机溶剂，有机溶剂可能对生物活性成分具有高毒性，不利于人工细胞等仿生领域的研究，并且可能
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请提供一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，整个制备过程无需投加表面活性剂，成品脂质体生物相容性好，可适用于人工细胞和生物领域。
2、具体地，本申请是通过以下方案实现的：
3、一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，以磷脂与角鲨烯混合形成第一分散相流体，配以连续相和第二分散相流体，并以连续相为外相，第一分散相流体为中间相，第二分散相流体为内相，三者分别注入微流体装置，形成的双重乳液自发去湿，得到外径为30～150μm的巨型脂质体。
4、上述方案中，含脂质的第一分散相流体（油相，lo）剪切第二分散相流体（内水相，ia）形成油包水（w/o）的单一乳液，单一乳液被外部一定黏度的连续相（外水相，oa）进一步剪切形成双重乳液（w/o/w）。第一分散相流体的主要组分角鲨烯是从鲨鱼肝油提取的，无生物毒性，磷脂的双亲性，使其在双重乳液的两个油水界面可自组装形成稳定油水界面的磷脂分子层，赋予构造以自发去湿性能，可连续的产生单分散乳液，而去湿过程中形成的磷脂双分子层即为脂质体；在成型过程中内相液滴的大小决定脂质体的大小，本案第一分散相流体配合连续相和第二分散相流体以及微流体装置的成型过程，实现成型过程的渗透压平衡、脂质体成型稳定、尺寸均一，大小可调。
5、进一步的，作为优选：
6、所述连续相可以选择聚乙烯醇水溶液或蔗糖水溶液，但不限于上述物质的水溶液。连续相满足一定的黏度，其在发挥剪切作用时使单一乳液形成双乳液。更优选的，所述聚乙烯醇水溶液是由聚乙烯醇与去离子水混合而成，聚乙烯醇与水的质量比为0.01～0.3:1。常压、室温下将聚乙烯醇加入去离子水中，搅拌均匀形成连续相；所述蔗糖水溶液是由蔗糖与去离子水混合而成，蔗糖与去离子水的质量比为0.05～0.1:1。
7、所述第一分散相流体中，每ml角鲨烯对应的磷脂量为0.001～0.02g。更优选的，所述第一分散相流体的制备方法为：常压、室温下，将磷脂的氯仿溶液用氮气吹干成磷脂膜，加入角鲨烯，50℃超声溶解磷脂形成第一分散相流体。
8、所述第二分散相流体可以选择聚乙二醇水溶液、聚乙烯醇与聚乙二醇的水溶液或葡萄糖水溶液，但不限于上述物质的水溶液，更优选的，所述聚乙烯醇与聚乙二醇的水溶液中，聚乙烯醇、聚乙二醇与去离子水的质量比分别为：0.01~0.1:1、 0.01~0.3:1。其制备方式为：常压、室温下将聚乙二醇、聚乙烯醇加入去离子水中，搅拌均匀形成第二分散相。所述聚乙二醇水溶液中，聚乙二醇与去离子水的混合质量比为0.01～0.3:1。所述葡萄糖水溶液中，葡萄糖与与去离子水的质量比为0.01～0.1:1。上述溶液与连续相渗透压保持平衡，可防止脂质体破裂，有效实现了脂质体的稳定性。
9、所述微流体装置中，第一分散相流体的流量qo为50～1500μl/h，第二分散相流体的流量qw1为50～1000μl/h，连续相的流量qw2为1000～5000μl/h。在制备过程中，借助于微流体装置可实现脂质体的尺寸均一与大小可调。
10、所述微流体装置为pdms微流控装置，进液口设置三个，并对应固定有三个注射器，出液口设置一个。
11、本专利技术具有以下有益效果：
12、第一，本专利技术制备方法操作简单、易于控制和调节，可以连续地产生单分散、高包封率、不含表面活性剂、生物分子相容性的巨型脂质体囊泡。
13、第二，本专利技术制备方法可精确控制囊泡内容物的组分和含量，可将该方法用于药物转运、释放和人工细胞领域的研究。
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1.一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：磷脂溶解在角鲨烯中形成第一分散相流体，每mL角鲨烯中磷脂的含量为0.001～0.02g，配以连续相和第二分散相流体，并以连续相为外相，第一分散相流体为中间相，第二分散相流体为内相，三者分别注入微流体装置，形成的双重乳液自发去湿，得到外径为30～150μm的巨型脂质体。
2.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：每mL角鲨烯中含磷脂的量为0.001~0.02g。
3.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于，所述第一分散相流体制备方法为：常压、室温下，将磷脂的氯仿溶液用氮气吹干成磷脂膜，加入角鲨烯，超声溶解磷脂形成第一分散相流体。
4.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述连续相为聚乙烯醇水溶液或蔗糖水溶液。
5.根据权利要求4所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述聚乙烯醇水溶液是由聚乙烯醇溶解在去离子水中形成的，聚乙烯醇与水的质量比为0.01～
6.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述第二分散相流体为聚乙二醇水溶液、聚乙烯醇与聚乙二醇的水溶液或葡萄糖水溶液。
7. 根据权利要求6所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述聚乙烯醇与聚乙二醇的水溶液是由聚乙烯醇、聚乙二醇与去离子水混合而成，聚乙烯醇与去离子水的质量比为0.01~0.1: 1，聚乙二醇与去离子水的质量比为0.01~0.3:1；所述聚乙二醇水溶液中，聚乙二醇与去离子水的混合质量比为0.01～0.3:1；所述葡萄糖水溶液中，葡萄糖与与去离子水的质量比为0.01～0.1:1。
8.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：微流体装置中，第一分散相流体的流量QO为50～1500μL/h，第二分散相流体的流量QW1为50～1000μL/h，连续相的流量QW2为1000～5000μL/h。
9.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述微流体装置为PDMS微流控装置，进液口设置三个，并对应固定有三个注射器，出液口设置一个。
10.根据权利要求1～9任一项所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：含脂质的第一分散相流体剪切第二分散相流体形成油包水的单一乳液，单一乳液被外部的连续相进一步剪切形成双重乳液，双重乳液自发去湿，形成脂质体。
...【技术特征摘要】
1.一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：磷脂溶解在角鲨烯中形成第一分散相流体，每ml角鲨烯中磷脂的含量为0.001～0.02g，配以连续相和第二分散相流体，并以连续相为外相，第一分散相流体为中间相，第二分散相流体为内相，三者分别注入微流体装置，形成的双重乳液自发去湿，得到外径为30～150μm的巨型脂质体。
2.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：每ml角鲨烯中含磷脂的量为0.001~0.02g。
3.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于，所述第一分散相流体制备方法为：常压、室温下，将磷脂的氯仿溶液用氮气吹干成磷脂膜，加入角鲨烯，超声溶解磷脂形成第一分散相流体。
4.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述连续相为聚乙烯醇水溶液或蔗糖水溶液。
5.根据权利要求4所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在于：所述聚乙烯醇水溶液是由聚乙烯醇溶解在去离子水中形成的，聚乙烯醇与水的质量比为0.01～0.3:1；蔗糖水溶液是由蔗糖与去离子水混合而成，蔗糖与去离子水的质量比为0.05～0.1:1。
6.根据权利要求1所述的一种不含表面活性剂的巨型脂质体的制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓楠楠，齐金颖，
申请(专利权)人：上海交通大学绍兴新能源与分子工程研究院，
类型：发明
国别省市：
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