【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于过敏原检测，具体涉及一种用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法。
技术介绍
1、虾类海产品的主要过敏原是一种原肌球蛋白(tropomyosin，tm)，其分子量为35-38kda，由两条多肽链构成，在不同品种的虾类中，原肌球蛋白的结构相似度较高。tm的蛋白质二级结构是一种高度稳定的α-螺旋，即使在高温和高压条件下也能保持稳定性。不同于鸡蛋、牛奶等引发的食物过敏反应，甲壳类水产食物引起的食物过敏反应往往伴随终身，而迄今为止食品过敏尚无标准化的根治手段，避免摄入或接触含过敏原的食物仍是患者的最佳选择。
2、目前甲壳类过敏原检测主要有酶联免疫吸附法(elisa)、聚合酶链式反应(pcr)、液相色谱-质谱法(lc-ms)等。elisa测试耗时，实验中涉及到的酶容易遭受变性和降解问题。pcr需要复杂的实验室设备和技术，并带有复杂的样品制备和外源性dna污染的风险。虽然质谱法可以准确分析食物中的蛋白质成分，但它需要高精度仪器和专业操作技术。所有这些方法都非常复杂且耗时费力。因此，非常需要快速和低成本的生物传感器检测原肌球蛋白，以帮助过敏患者采取预防措施。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，步骤如下：
4、取5-50μl的coal-ldh-apt溶液、15μl待测样品溶液，加
5、所述coal-ldh-apt是coal-ldh和虾原肌球蛋白核酸适配体apt偶联获得的混合物。
6、在上述方案的基础上，所述虾原肌球蛋白核酸适配体apt的核酸序列如seq idno:1所示。
7、在上述方案的基础上，所述coal-ldh-apt制备方法如下：将coal-ldh溶液和apt溶液按1:2-4:1的体积比混合，调ph至5.5，37℃孵育30min，即得。
8、在上述方案的基础上，所述coal-ldh溶液和apt溶液的体积比优选为1:2-2:1，进一步优选为2:1。
9、在上述方案的基础上，所述coal-ldh由以下方法制得：
10、将co(no3)2·6h2o和al(no3)3·9h2o加入甲醇中，混合后滴加到含naoh的甲醇溶液中，将混合物搅拌，离心收集沉淀；沉淀在甲醇中分散，80℃-100℃反应4h，冷却至室温，离心收集沉淀，超纯水洗涤两次，分散在超纯水中，静置4-6天，即得。
11、在上述方案的基础上，所述coal-ldh-apt溶液的浓度为40mg/ml；所述tmb的浓度为10mm。
12、在上述方案的基础上，所述ph为5.5；所述温度为25℃，孵育时间为20min。
13、在上述方案的基础上，所述虾原肌球蛋白浓度-紫外吸光度标准曲线的构建方法如下：
14、配制不同浓度梯度的虾原肌球蛋白标准溶液，取5-50μl的coal-ldh-apt，加入15μl不同浓度的原肌球蛋白标准溶液，加入超纯水至总体积为130μl，ph3.0-7.0，15-50℃混合孵育1-40min，加入20μl tmb，15-50℃混合孵育1-40min，用紫外-可见光分光光度计测定652nm处的吸光度；以虾原肌球蛋白浓度为横坐标，紫外吸光度为纵坐标，构建虾原肌球蛋白浓度-紫外吸光度标准曲线。
15、在上述方案的基础上，所述不同浓度梯度的虾原肌球蛋白标准溶液的浓度为0.1μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、3μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。
16、在上述方案的基础上，所述食品为液体或固体；例如虾饺、生虾、虾味薯片、虾酱肉丝、挂面等。
17、在上述方案的基础上，所述食品为固体时，经预处理后，制备成待测样品溶液，再进行检测；所述预处理为：将待测食物样品粉碎，每份样品称取0.5±0.05g，加入5ml 10mmpbs提取液，涡旋振荡提取1h以上，在4℃、8000rpm条件下离心20min，收集上清液，使用0.45μm滤膜过滤后即得。
18、本专利技术的有益效果为：
19、本专利技术将coal-ldh与虾原肌球蛋白核酸适配体apt组装获得生物比色传感器coal-ldh-apt，采用coal-ldh-apt用于定量检测虾原肌球蛋白。
20、本专利技术的检测虾原肌球蛋白的方法具有操作简便，无需对待测样本进行复杂的前处理，检测成本低，检测快速，对检测仪器的要求低的特点，在食品中虾原肌球蛋白的检测中具有很大的应用前景。
21、本专利技术方法在0.1-50μg/ml范围内具有良好的线性关系(r2＝0.997)，检测限为0.053μg/ml。
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1.一种用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述虾原肌球蛋白核酸适配体Apt的核酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述CoAl-LDH-Apt制备方法如下：将CoAl-LDH溶液和Apt溶液按1:2-4:1的体积比混合，调pH至5.5，37℃孵育30min，即得。
4.根据权利要求3所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述CoAl-LDH由以下方法制得：
5.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述CoAl-LDH-Apt溶液的浓度为40mg/mL；所述TMB的浓度为10mM。
6.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述pH为5.5；所述温度为25℃，孵育时间为20min。
7.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述虾原肌球蛋白浓度-紫外吸光度标准曲
8.根据权利要求7所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述不同浓度梯度的虾原肌球蛋白标准溶液的浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、3μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、50μg/mL。
9.根据权利要求1-8任一项所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述食品为液体或固体。
10.根据权利要求9所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述食品为固体时，经预处理后，制备成待测样品溶液，再进行检测；所述预处理为：将待测食物样品粉碎，每份样品称取0.5±0.05g，加入5mL 10mM PBS提取液，涡旋振荡提取1h以上，在4℃、8000rpm条件下离心20min，收集上清液，使用0.45μm滤膜过滤后即得。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，步骤如下：
2.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述虾原肌球蛋白核酸适配体apt的核酸序列如seq id no:1所示。
3.根据权利要求2所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述coal-ldh-apt制备方法如下：将coal-ldh溶液和apt溶液按1:2-4:1的体积比混合，调ph至5.5，37℃孵育30min，即得。
4.根据权利要求3所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述coal-ldh由以下方法制得：
5.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述coal-ldh-apt溶液的浓度为40mg/ml；所述tmb的浓度为10mm。
6.根据权利要求1所述用于检测食品中虾原肌球蛋白的方法，其特征在于，所述ph为5.5；所述温度为25℃，孵育时间为20min。
【专利技术属性】
技术研发人员：吕良涛，张颖，于春娣，杨庆利，李振兴，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：
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