本发明专利技术公开了卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，基于反相高效液相色谱检测方法，采用CHIRALCEL OX‑RH硅胶手性色谱柱，0.02mol/L磷酸二氢铵缓冲溶液作为水相，乙腈作为有机相，提供一种高效、简便、灵敏的液相色谱检测方法，用于卡非佐米成品异构体的检测，避免采用正相高效色谱法产生有机杂质的干扰影响，该方法的适用性更高、更经济、操作上更简单、更容易重现和被接受，同时检测过程中未对色谱柱产生影响，延长色谱柱使用寿命。
1、卡非佐米(carfilzomib)是一种环氧酮蛋白酶体抑制剂，可选择性、不可逆性的与结构性蛋白酶体及免疫蛋白酶体结合。卡非佐米(carfilzomib)是经静脉给药的新一代蛋白酶抑制剂，选择性地靶向血液肿瘤细胞中的蛋白酶体，避免了因抑制非恶性细胞中组成型蛋白酶体而产生的毒副作用。本专利主要对卡非佐米在生产过程中容易生成的异构体进行分离控制。卡非佐米及异构体结构式如下：
4、异构体ⅰ：(s)-4-甲基-n-((r)-1-(((s)-4-甲基-1-((r)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((s)-2-(2-吗啉基乙酰氨基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺
6、异构体ⅱ：(s)-4-甲基-n-((s)-1-(((s)-4-甲基-1-((s)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((s)-2-(2-吗啉基乙酰氨基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺
8、异构体ⅲ：r)-4-甲基-n-((r)-1-(((r)-4-甲基-1-((r)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((r)-2-(2-吗啉基乙酰氨基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺
>10、卡非佐米手性杂质主要来源于物料和在合成过程中反应试剂和反应条件影响下手性碳发生消旋而形成的，因此要有效地控制卡非佐米的质量，控制异构体的含量是至关重要的。故能有效且准确地检测其异构体杂质对卡非佐米的应用具有重要意义。11、cn107402259b卡非佐米中手性异构体的检测方法中，采用正相高效液相色谱进行检测，检测过程中存在其他有机杂质与异构体未能完全分离，从而会干扰卡非佐米中三种手性异构体的测定。
12、cn116559354a一种采用反相色谱法检测卡非佐米对映异构体的方法中，采用磷酸二氢钾作为流动相，从而在检测过程容易析出而导致色谱柱堵塞，更换频率高，增加检测成本。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，采用特定的色谱条件，能够对卡非佐米的手性异构体进行有效检测，避免有机杂质影响以及防止色谱柱发生堵塞，解决了现有技术中存在的上述问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用了以下方案：
3、一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，包括采用以下色谱条件：
4、色谱柱采用chiralcel ox-rh硅胶手性色谱柱；
5、流动相为磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈，磷酸二氢铵缓冲溶液-乙腈的体积比为50～57：43～50；
6、检测波长为205～215nm；
7、流动相的流速为0.8～1.2ml/min；
8、柱温为25～35℃；
9、检测器采用紫外检测器；
10、洗脱采用梯度洗脱。
11、目前现有技术中，采用正相高效液相色谱检测时，采用正己烷、异丙醇、无水乙醇体系作为流动相，检测后发现均有其他有机杂质会干扰手性异构体的测定，使有机杂质未能完全与三种手性异构体完全分离，因此，选择反相高效液相色谱对色谱柱、流动相、水相中的浓度和ph逐步筛选，得出最佳色谱条件，使此色谱条件既满足检测准确度、重复性、灵敏度的要求，同时对色谱柱未产生寿命影响,降低检测成本。
12、进一步地，所述chiralcel ox-rh硅胶手性色谱柱的规格为250mm*4.6mm，5μm。
13、进一步地，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.01mol/l～0.03mol/l，ph为6.0～7.0。
14、进一步地，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.02mol/l，ph为6.5。
15、进一步地，所述检测波长为210nm。
16、进一步地，所述流动相的流速为1.0ml/min。
17、进一步地，所述色谱柱的柱温为30℃。
18、进一步地，所述色谱条件的进样量为20μl。
19、采用上述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：
20、(1)空白溶液：分别量取乙腈和水按体积比混匀，即可；
21、(2)供试品溶液的制备：取供试品适量，用溶剂溶解稀释制成lmg/ml的溶液；
22、(3)对照品溶液的制备：分别取各异构体对照品各适量，用溶剂溶解稀释制成每1ml稀释剂中含各异构体1μg的混合溶液；
23、(4)系统适用性溶液：分别取供试品和异构体对照品各适量，用溶剂溶解稀释制成每1ml稀释剂中含供试品1mg、各异构体1μg的混合溶液；
24、将步骤(1)得到的空白溶液、步骤(2)得到的供试品溶液、步骤(3)得到的对照品溶液、步骤(4)得到的系统适用性溶液各20μl注入色谱仪，在紫外检测器波长210nm的条件下记录色谱图，测定卡非佐米中三种异构体的含量。
25、进一步地，所述乙腈和水的体积比为7:3。
26、本专利技术的有益效果为：
27、本专利技术为一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，基于特定的色谱条件，实现卡非佐米生产中易生成的3个手性异构体的有效分离，对卡非佐米合成过程中产生的手性异构体进行全面的检测及控制，为产品质量提供保障。
28、采用常用手性色谱柱和常规反相色谱系统，方法便于操作且准确度高、重复性好、灵敏度高。
29、采用特定浓度的磷酸二氢铵缓冲溶液作为流动相中的水相，结合chiralcel ox-rh硅胶手性色谱柱，使在检测过程中未发生析出现象，在确保检测准确度和灵敏度的条件下，不易造成色谱柱的堵塞，延长色谱柱的使用寿命。
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【技术保护点】
1.一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括采用以下色谱条件：
2.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述CHIRALCEL OX-RH硅胶手性色谱柱的规格为250mm*4.6mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.01mol/L～0.03mol/L，pH为6.0～7.0。
4.根据权利要求3所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.02mol/L，pH为6.5。
5.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述检测波长为210nm。
6.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0mL/min。
7.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30℃。
8.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述色谱条件的进样量为20μL。
9.根据权利要求1至8任一项所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述乙腈和水的体积比为7:3。
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【技术特征摘要】
1.一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，包括采用以下色谱条件：
2.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述chiralcel ox-rh硅胶手性色谱柱的规格为250mm*4.6mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.01mol/l～0.03mol/l，ph为6.0～7.0。
4.根据权利要求3所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢铵缓冲溶液的浓度为0.02mol/l，ph为6.5。
5.根据权利要求1所述的一种卡非佐米中三种手性异构体的反相高效液相...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕小伟，燕青，黄婷，杜鹏，
申请(专利权)人：四川同晟生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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