【技术实现步骤摘要】
【】本专利技术涉及提升抗体对于抗原的亲和性的方法。本专利技术涉及与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的改变抗体。本专利技术涉及与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的抗体的制造方法。本专利技术涉及抗体的氨基酸序列的解析方法。本专利技术涉及抗体的候选改变位置的特定方法。
技术介绍
0、
技术介绍
1、以往已知，通过改变抗体的氨基酸序列，使该抗体对于抗原的亲和性改变的技术。例如，在专利文献1中，记载了通过将抗体的框架区域3的至少3个氨基酸残基设为荷电氨基酸残基来控制对于抗原的亲和性的方法。在此方法中，在维持互补性决定区域(cdr)的氨基酸序列的状态下，抗体对于抗原的亲和性提升。
2、【现有技术文献】
3、【专利文献】
4、专利文献1：美国专利申请公开第2018/0179298号说明书
5、【专利技术的概要】
6、【专利技术要解决的课题】
7、本专利技术旨在提供不改变cdr的氨基酸序列，通过改变框架区域(fr)的氨基酸残基来提升抗体对于抗原的亲和性的新的方法、及对于抗原的亲和性提升的新的抗体。
8、【用于解决课题的手段】
9、本专利技术人发现，抗体的轻链的fr的氨基酸序列中的各位置的指定的氨基酸残基的氨基酸频度的合计值、及所述fr中的各氨基酸残基的暴露于溶剂的表面积比率与抗体对于抗原的亲和性相关，从而完成本专利技术。
10、本专利技术提供与未改变的抗体相比而提升抗体对于抗原的亲和性的方法，其包括：在抗体的轻链
11、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的改变抗体。在此改变抗体中，在未改变的抗体的轻链的fr的氨基酸序列中，位于精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、天冬氨酸及谷氨酸的氨基酸频度的合计值成为35％以上的位置、并且溶剂露出表面积比率显示20％以上的氨基酸残基之中至少3个被设为荷电氨基酸残基。
12、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的抗体的制造方法，其包括：在抗体的轻链的fr的氨基酸序列中，将位于精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、天冬氨酸及谷氨酸的氨基酸频度的合计值成为35％以上的位置、并且溶剂露出表面积比率显示20％以上的氨基酸残基之中至少3个设为荷电氨基酸残基的工序，及回收在此工序中得到的抗体的工序。
13、本专利技术提供抗体的氨基酸序列的解析方法，其包括：取得抗体的轻链的fr的氨基酸序列中的各位置的精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、天冬氨酸及谷氨酸的氨基酸频度的合计值的工序，取得抗体的轻链的框架区域中的各氨基酸残基的溶剂露出表面积比率的工序，及输出取得的各位置的氨基酸频度的合计值及各氨基酸残基的溶剂露出表面积比率的工序。
14、本专利技术提供确定抗体的候选改变位置的方法，其包括：取得抗体的轻链的fr的氨基酸序列中的各位置的精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、天冬氨酸及谷氨酸的氨基酸频度的合计值的工序，取得抗体的轻链的框架区域中的各氨基酸残基的溶剂露出表面积比率的工序，将位于氨基酸频度的合计值成为35％以上的位置、并且溶剂露出表面积比率显示20％以上的氨基酸残基作为为了提升抗体对于抗原的亲和性而改变的候选氨基酸残基确定的工序。
15、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的改变抗体。在此改变抗体中，改变的氨基酸残基的位置是由确定所述的抗体的候选改变位置的方法确定的候选氨基酸残基之中的至少3个氨基酸残基的位置，改变是向荷电氨基酸残基的改变。
16、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的抗体的制造方法，其包括：将由确定所述的抗体的候选改变位置的方法确定的候选氨基酸残基之中至少3个设为荷电氨基酸残基的工序，及回收在此工序中得到的抗体的工序。
17、本专利技术提供提升抗体对于抗原的亲和性的方法，其包括：通过在未改变的抗体中，将选自由kabat法定义的轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、63、65、67、70、72、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少3个氨基酸残基设为荷电氨基酸残基，与未改变的抗体相比而提升对于抗原的亲和性，所述3个氨基酸残基含选自轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少1个。
18、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的改变抗体。在此改变抗体中，选自未改变的抗体中的由kabat法定义的轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、63、65、67、70、72、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少3个氨基酸残基被设为荷电氨基酸残基，所述3个氨基酸残基含选自轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少1个。
19、本专利技术提供与未改变的抗体相比而对于抗原的亲和性提升的抗体的制造方法，其包括：在未改变的抗体中，将选自由kabat法定义的轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、63、65、67、70、72、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少3个氨基酸残基设为荷电氨基酸残基的工序，及回收在此工序中得到的抗体的工序，所述3个氨基酸残基含选自轻链的第3、5、9、17、18、20、22、60、74、76、77、79及81位氨基酸残基的至少1个。
20、【专利技术的效果】
21、根据本专利技术，提供对于抗原的亲和性提升的抗体。
22、【附图的简单的说明】
23、【图1】是氨基酸序列的解析系统的概略图。
24、【图2】是显示氨基酸序列的解析系统的硬件构成的图。
25、【图3】是显示利用氨基酸序列的解析装置的未改变的抗体的氨基酸序列的解析处理的流程图。
26、【图4】是显示解析结果的显示画面的一例的图。
27、【图5】是显示利用氨基酸序列的解析装置的用于确定抗体的改变位置的候选的氨基酸序列的解析处理的流程图。
28、【图6】是显示解析结果的显示画面的一例的图。
29、【图7】是显示利用氨基酸序列的解析装置的用于制成将抗体的改变位置的候选设为荷电氨基酸残基之时的序列的氨基酸序列的解析处理的流程图。
30、【图8】是显示利用氨基酸序列的解析装置的用于制成在cdr的电特性是中性时将抗体的改变位置的候选设为碱性氨基酸残基之时的序列的氨基酸序列的解析处理的流程图。
31、【图9】是将抗体的溶出液用sds-page分离而用考马斯亮蓝(cbb)染色的凝胶的照片。
技术实现思路
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.提升抗体对于抗原的亲和性的方法，其包括：
2.与未改变的抗体相比对抗原的亲和性提升的抗体的制造方法，其包括：
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基选自所述轻链的第60、74、76、77、79及81位氨基酸残基。
4.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第60、76及77位氨基酸残基。
5.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第74、76及77位氨基酸残基。
6.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第77、79及81位氨基酸残基。
7.与未改变的抗体相比对抗原的亲和性提升的改变抗体，其中
8.权利要求7所述的改变抗体，其中所述至少3个氨基酸残基是选自所述轻链的第60、74、76、77、79及81位氨基酸残基中的至少3个。
9.权利要求7所述的改变抗体，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第60、76及77位氨基酸残基。
10.权利要求7所述的改变抗体，其中所述至少3个
11.权利要求7所述的改变抗体，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第77、79及81位氨基酸残基。
12.权利要求1或2所述的方法、或者权利要求7所述的改变抗体，其中所述荷电氨基酸残基是碱性氨基酸残基。
13.权利要求1或2所述的方法、或者权利要求7所述的改变抗体，其中所述抗体为抗体片段的形态。
14.权利要求13所述的方法或改变抗体，其中所述抗体片段是Fab片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、dAb片段、scFv、或者rIgG。
...【技术特征摘要】
1.提升抗体对于抗原的亲和性的方法，其包括：
2.与未改变的抗体相比对抗原的亲和性提升的抗体的制造方法，其包括：
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基选自所述轻链的第60、74、76、77、79及81位氨基酸残基。
4.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第60、76及77位氨基酸残基。
5.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第74、76及77位氨基酸残基。
6.权利要求1或2所述的方法，其中所述至少3个氨基酸残基是所述轻链的第77、79及81位氨基酸残基。
7.与未改变的抗体相比对抗原的亲和性提升的改变抗体，其中
8.权利要求7所述的改变抗体，其中所述至少3个氨基酸残基是选自所述轻链的第60、74、76、...
【专利技术属性】
技术研发人员：前田真吾，福永淳，R·巴亚，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：
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