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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药化学制备,具体涉及guanacastane型二萜衍生物candollinsa-l及其制备方法和应用。
技术介绍
1、帕金森疾病(pd)是由中枢神经系统的蛋白聚集,神经死亡及紧张所致的一种神经退行性疾病。近年来,帕金森的患病率逐年升高,严重威胁中老年人群的生命安全及生活质量。然而,至今没有可以有效治愈或者减轻帕金森的病变过程的有效治疗药物。由神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(mpp+)抑制复合物ⅰ的电子转移所导致的线粒体损伤和功能障碍是帕金森的重要致病机制。研究探索可以保护由mpp+诱导损伤的神经元细胞的药物是发掘可以治疗帕金森等神经退行性疾病的重要途经之一。植物内生菌次级代谢产物是发掘具有生物活性的天然小分子药物的重要途经之一,其特点在于制备方法简单高效,生产成本低,且易于大量生产。
技术实现思路
1、针对现有技术不足,本专利技术提供guanacastane型二萜衍生物candollinsa-l及其制备方法和应用,可以通过植物内生菌琼脂固体发酵得到的、新的具有保护由mpp+诱导损伤的神经细胞作用的guanacastane型二萜衍生物,为研究发现可以治疗或缓解帕金森等神经退行性疾病的小分子药物提供研究基础。
2、为实现以上目的,本专利技术的技术方案通过以下技术方案予以实现:
3、guanacastane型二萜衍生物candollinsa-l,所述candollins a-l的化学结构分别如下所示:
4、cand
5、guanacastane型二萜衍生物candollins a-l的制备方法包括以下步骤:
6、s1、采用保藏编号为:cctcc no:m 2024722的山药内生菌白黄小脆柄菇(psathyrella candolleana)sy 7×1为原料,将山药内生菌白黄小脆柄菇sy 7×1接种于山药琼脂固体培养基中进行固体发酵培养,发酵结束后得固体发酵物,将固体发酵物使用乙酸乙酯萃取得到白黄小脆柄菇sy 7×1山药固体发酵粗提物;
7、s2、将发酵粗提物反复使用正相色谱和反相色谱分离得到化合物candollinsa-l。
8、优选的,所述步骤s1中山药琼脂培养基的配方为200g山药,20g葡萄糖,15g琼脂,1l水;发酵条件为室温静置发酵2个月。
9、优选的,所述步骤s1中固体发酵粗提物的制备方法为将固体发酵物与乙酸乙酯萃等体积混合萃取5次,后真空浓缩后合并得到粗提物。
10、优选的,所述步骤s2中正相色谱与反相色谱的分离纯化方法包括以下步骤:
11、s2-1、将粗提物使用体积比为1:1的二氯甲烷-甲醇混合溶液溶解,得到粗提物浓溶液;
12、s2-2、粗提物浓溶液与粗提物干重等质量的硅胶混合,放置于55℃恒温烘箱中烘干除去有机溶剂,使用100-200目硅胶装柱,依次使用如下的溶液进行梯度洗脱,并根据极性差异划分为七个部分fractions 1-7:
13、石油醚、石油醚与乙酸乙酯体积比为30:1的混合溶液、石油醚与乙酸乙酯体积比为20:1的混合溶液、石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1的混合溶液、二氯甲烷、二氯甲烷与甲醇体积比为50:1的混合溶液、二氯甲烷与甲醇体积比为10:1的混合溶液;
14、s2-3、取石油醚与乙酸乙酯体积比为10:1混合溶液洗脱段使用正相柱,依次在石油醚:乙酸乙酯体积比为30:1、25:1、20:1、15:1和10:1的混合溶液体系梯度洗脱并根据tlc分析将其依次划分为7个部分fr.4.1-4.7;
15、s2-4、取fr.4.3段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂,将经tlc分析结果相同的部分合并得到3个部分fr.4.3.1-fr.4.3.3;取fr.4.3.1使用硅胶色谱分离,洗脱剂为二氯甲烷:甲醇体积比为150:1的混合溶液,分离得到candollins l;
16、s2-5、取fr.4.3.2使用硅胶色谱分离,洗脱剂为二氯甲烷:甲醇体积比为200:1的混合溶液,然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂,分离得到candollins i;
17、s2-6、取fr.4.4段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱,将经tlc分析结果相同的部分合并得到4个部分fr.4.4.1-fr.4.4.4,取fr.4.4.1使用硅胶色谱分离,洗脱剂为二氯甲烷:甲醇体积比为150:1的混合溶液,得到candollins a;
18、s2-7、取fr.4.4.3段使用硅胶色谱分离,洗脱剂先后为石油醚:乙酸乙酯体积比为5:1和二氯甲烷:甲醇体积比为100:1的混合溶液,得到candollins d;
19、s2-8、取fr.4.5段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱,将经tlc分析结果相同的部分合并得到5个部分fr.4.5.1-fr.4.5.5,取fr.4.5.2段使用硅胶色谱分离,洗脱剂先后为二氯甲烷:甲醇的体积比为100:1和石油醚:乙酸乙酯体积比为5:1的混合溶液,然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱得到candollins b;
20、s2-9、取fr.4.6段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱,将经tlc分析结果相同的部分合并得到4个部分fr.4.6.1-fr.4.6.4;取fr.4.6.2段使用硅胶色谱分离,洗脱剂先后为石油醚:乙酸乙酯体积比为5:1和二氯甲烷:甲醇体积比为150:1的混合溶液,得到candollins e和candollins f;
21、s2-10、取fr.4.6.3段使用硅胶色谱分离,洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯体积比为5:1的混合溶液,然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱,得到candollins g;
22、s2-11、取fr.4.6.4段使用硅胶色谱分离,洗脱剂先后为石油醚:丙酮体积比为5:1和二氯甲烷:甲醇体积比为100:1的混合溶液,然后使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱,得到candollins c和candollins k;
23、s2-12、取fr.4.7段使用凝胶色谱以甲醇为洗脱剂洗脱并根据tlc分析结果将其划分为5个部分fr.4.7.1-4.7.5;取fr.4.7.2段使用硅胶色谱分离,洗脱剂先后为二氯甲烷:甲醇体积比为150:1和石油醚:乙酸乙酯体积比6:1的混合溶液,得到candollins h和candollins j。
24、本专利技术提供的12种具有保护mpp+诱导损伤的pc12细胞作用的guanacastane型二萜衍生物candollins a-l或白黄小脆柄菇琼脂固体发酵得物或其乙酸乙酯萃取本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Guanacastane型二萜衍生物candollins A-L,其特征在于,所述candollins A-L的化学结构分别如下所示:
2.一种如权利要求1所述的Guanacastane型二萜衍生物candollins A-L的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤S1中山药琼脂培养基的配方为200g山药,20g葡萄糖,15g琼脂,1L水;发酵条件为室温静置发酵2个月。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤S1中固体发酵粗提物的制备方法为将固体发酵物与乙酸乙酯萃等体积混合萃取5次,后真空浓缩后合并得到粗提物。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S2中正相色谱与反相色谱的分离纯化方法包括以下步骤:
6.一种如权利要求1所述的Guanacastane型二萜衍生物candollins A-L或权利要求2-5任一制备方法制备得到的固体发酵物或粗提物在神经保护中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述保护剂应用于防治由MPP+所诱导的神经细胞死亡引起的脑神经系统的病害。
9.一种神经保护药物,其特征在于:所述药物包含权利要求1所述的Guanacastane型二萜衍生物candollinsA-L、权利要求2-5任一所述的固体发酵物、权利要求2-5任一所述的粗提物中的任意一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.guanacastane型二萜衍生物candollins a-l,其特征在于,所述candollins a-l的化学结构分别如下所示:
2.一种如权利要求1所述的guanacastane型二萜衍生物candollins a-l的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤s1中山药琼脂培养基的配方为200g山药,20g葡萄糖,15g琼脂,1l水;发酵条件为室温静置发酵2个月。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所述步骤s1中固体发酵粗提物的制备方法为将固体发酵物与乙酸乙酯萃等体积混合萃取5次,后真空浓缩后合并得到粗提物。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s2中正相色谱与反相色谱的分离纯...
【专利技术属性】
技术研发人员:丁中涛,杨亚滨,赵统德,杨雪琼,蔡乐,
申请(专利权)人:云南大学,
类型:发明
国别省市:
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