【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及普里斯特氏菌基因工程改造，具体涉及一种普里斯特氏工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
1、聚羟基烷酸酯(phas)是一类由微生物合成的生物可降解高分子材料，因其可作为塑料的可持续替代品，在环境保护和减少石油依赖方面具有重要的应用价值。phas不仅具有良好的生物相容性和生物降解性，还可以通过微生物发酵过程直接从可再生资源中生产，因此在包装、农业、医疗和其他工业应用中显示出巨大的潜力。
2、普里斯特氏菌(priestia aryabhattai)作为一种环境微生物，其对多种环境压力具有较强的抗逆性，能够在较宽的温度和ph范围内生长，且无内毒素，为生产pha提供了理想的生物工厂。特别是，普里斯特氏菌能够利用多种廉价底物，如糖类、脂肪酸和甘油，高效生产phas，这对于降低生物塑料的生产成本具有重要意义。
3、尽管普里斯特氏菌在pha生产中表现出优异的能力，但由于细胞壁结构复杂且坚固，使得从其胞内提取pha成为一个技术挑战，这一过程通常需要使用高能耗的机械或化学方法破壁，从而增加了生产成本。
4、因此，开发一种能够在生长终点自裂解的工程普里斯特氏菌株将极大地简化pha的回收过程，减少下游处理成本，从而推动pha的商业化应用。
技术实现思路
1、本专利技术提供的普里斯特氏工程菌及其构建方法和应用，旨在解决从普里斯特氏菌胞内提取pha的过程耗能高、成本高、操作复杂的技术问题。
2、根据第一方面，一种实施例中提供一种普里斯特氏工程菌，由
3、需要说明的是，通过将含有holin连接片段和endolysin连接片段的重组表达载体转入普里斯特氏菌获得工程菌，holin连接片段和endolysin连接片段为噬菌体裂解系统基因holin和endolysin的扩增产物，以使普里斯特氏工程菌具有噬菌体裂解系统基因holin和endolysin，噬菌体裂解系统(holin和endolysin)能使普里斯特氏工程菌在生长终点自裂解，具有高效的自我裂解能力，如此可简化聚羟基烷酸酯(phas)的提取过程。
4、根据第二方面，一种实施例中提供一种第一方面的普里斯特氏工程菌的构建方法，包括以下步骤：
5、将holin连接片段和endolysin连接片段均连接到表达质粒，得到重组表达载体；
6、将所述重组表达载体转化到普里斯特氏菌内，得到所述普里斯特氏工程菌。
7、根据第三方面，一种实施例中提供第一方面的普里斯特氏工程菌在聚羟基烷酸酯生产中的应用。
8、根据第四方面，一种实施例中提供一种生产聚羟基烷酸酯的方法，包括培养第一方面的普里斯特氏工程菌并使所述普里斯特氏工程菌生产聚羟基烷酸酯的步骤。
9、根据上述实施例的普里斯特氏工程菌及其构建方法和应用，由于使普里斯特氏工程菌具有噬菌体裂解系统基因holin和endolysin，而噬菌体裂解系统(holin和endolysin)使普里斯特氏工程菌在生长终点自裂解，具有高效的自我裂解能力，如此可简化聚羟基烷酸酯(phas)的提取过程，进而降低生产成本，提高生产效率，并且，这种自裂解机制减少了对化学溶剂和高能机械的依赖，减轻了环境污染，增强了生产过程的环境友好性和安全性，展示了生物技术在环境保护和工业应用中的重要价值。
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1.一种普里斯特氏工程菌，其特征在于，由含有holin连接片段和endolysin连接片段的重组表达载体转入普里斯特氏菌获得。
2.如权利要求1所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，采用引物组合对噬菌体裂解系统基因holin和endolysin进行PCR扩增，以获得所述holin连接片段和所述endolysin连接片段；
3.如权利要求2所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，所述噬菌体裂解系统基因holin和endolysin均为根据所述普里斯特氏菌进行密码子优化后的DNA片段；
4.如权利要求1所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，所述holin连接片段和所述endolysin连接片段插入表达质粒，得到所述重组表达载体，所述表达质粒为普里斯特氏菌的兼容性质粒；
5.如权利要求1至4中任一项所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，所述普里斯特氏菌为保藏编号为CCTCC M 2022789的普里斯特氏菌MIBE00004。
6.一种如权利要求1至5中任一项所述的普里斯特氏工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.
8.如权利要求6或7所述的普里斯特氏工程菌的构建方法，其特征在于，将所述重组表达载体采用电转化法转化到所述普里斯特氏菌内。
9.如权利要求1至5中任一项所述的普里斯特氏工程菌在聚羟基烷酸酯生产中的应用。
10.一种生产聚羟基烷酸酯的方法，其特征在于，包括培养如权利要求1至5中任一项所述的普里斯特氏工程菌并使所述普里斯特氏工程菌生产聚羟基烷酸酯的步骤。
...【技术特征摘要】
1.一种普里斯特氏工程菌，其特征在于，由含有holin连接片段和endolysin连接片段的重组表达载体转入普里斯特氏菌获得。
2.如权利要求1所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，采用引物组合对噬菌体裂解系统基因holin和endolysin进行pcr扩增，以获得所述holin连接片段和所述endolysin连接片段；
3.如权利要求2所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，所述噬菌体裂解系统基因holin和endolysin均为根据所述普里斯特氏菌进行密码子优化后的dna片段；
4.如权利要求1所述的普里斯特氏工程菌，其特征在于，所述holin连接片段和所述endolysin连接片段插入表达质粒，得到所述重组表达载体，所述表达质粒为普里斯特氏菌的兼容性质粒；
5.如权利要求1至4中任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄艺，张广豹，白歆奕，张梦君，
申请(专利权)人：米倍深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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