【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及逆转n2型中性粒细胞功能的方法及基于该方法的功能逆转的n2型中性粒细胞。
技术介绍
1、中性粒细胞作为机体内数目最为庞大的一群白细胞，约占机体白细胞总数的50％～70％，在人体中每天约有1011个中性粒细胞产生，在外周循环系统中发挥免疫监视功能，清除入侵机体的外来微生物，维持机体免疫自稳。
2、在肿瘤微环境中，中性粒细胞被分为n1型中性粒细胞和n2型中性粒细胞，不同的中性粒细胞亚群分别发挥着双刃剑的作用，一方面中性粒细胞可以通过上调一氧化碳合酶2(nitric oxide synthase 2，nos2)，nadp氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotidephosphate oxidase 2，nox2)，干扰素γ(interferon-γ，ifn-γ)等蛋白的表达水平，起到抗肿瘤的作用；另一方面在肿瘤发展的过程中n2型中性粒细胞不断增多，n2型中性粒细胞分泌白细胞介素10(interleukin 10，il-10)、转化生长因子β(transforming growthfactorβ，tgf-β)，精氨酸酶(arginase)等分子，抑制t细胞和nk细胞功能，促进肿瘤进展。
3、目前的肿瘤免疫治疗手段都存在各种各样的问题，例如，pd-1/pd-l1等阻断抗体响应率有限且易出现复发的现象；car-t细胞疗法在治疗实体瘤时作用有限；自体car-nkt疗法显示出较强的毒性，一款靶向gd2的临床实验由于有患者死亡遭美国fda暂停。中性粒细胞作为在
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、现有技术对于n1型中性粒细胞和n2型中性粒细胞的研究逐渐深入，但仍未出现有效的逆转中性粒细胞功能的方法。对此，本专利技术基于代谢方式的改变在免疫细胞的功能转变中起着重要作用这一原理，拟通过代谢调控来达到逆转n2型中性粒细胞功能的目的。
3、用于解决问题的方案
4、本专利技术第一方面提供了一种逆转n2型中性粒细胞的功能的方法，所述方法包括向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤。
5、在一些实施方案中，所述胆汁酸包括鹅去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、石胆酸和6-乙基鹅去氧胆酸中的一种或多种。
6、在一些实施方案中，在所述向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤前，所述方法还包括在体外诱导n2型中性粒细胞的步骤。
7、在一些实施方案中，在所述向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤中，所述胆汁酸的添加量为使n2型中性粒细胞的生长环境中含有40～60μm胆汁酸。
8、在一些具体的实施方案中，所述向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤包括向体外诱导产生的n2型中性粒细胞中添加胆汁酸，或向含有n2型中性粒细胞的个体输送胆汁酸。在一些实施方案中，所述输送包括口服。
9、在一些实施方案中，所述逆转n2型中性粒细胞的功能包括如下(i)～(iii)中的任意一种或多种：
10、(i)使n2型中性粒细胞分泌免疫抑制因子的能力降低或消失；
11、(ii)使n2型中性粒细胞产生或增强分泌免疫促进因子的能力；
12、(iii)使n2型中性粒细胞抑制淋巴细胞增殖的能力降低或消失。
13、在一些具体的实施方案中，所述免疫抑制因子包括il-10、tgf-β和精氨酸酶中的一种或多种，所述免疫促进因子包括nos2、nox2和ifn-γ中的一种或多种，所述淋巴细胞包括t细胞和nk细胞。
14、本专利技术的第二方面提供了一种功能逆转的n2型中性粒细胞，所述功能逆转的n2型中性粒细胞通过本专利技术第一方面所述的方法制备得到。
15、在一些实施方案中，所述功能逆转的n2型中性粒细胞具有的功能包括如下(i)～(iii)中的任意一种或多种：
16、(i)降低或消失的分泌免疫抑制分子的能力；
17、(ii)产生或增强的分泌免疫促进因子的能力；
18、(iii)降低或消失的抑制淋巴细胞增殖的能力。
19、在一些具体的实施方案中，所述免疫抑制因子包括il-10、tgf-β和精氨酸酶中的一种或多种，所述免疫促进因子包括nos2、nox2和ifn-γ中的一种或多种，所述淋巴细胞包括t细胞和nk细胞。
20、本专利技术第三方面提供了本专利技术第二方面所述的功能逆转的n2型中性粒细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途；
21、在一些具体的实施方案中，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、食道癌、结肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肾透明细胞癌、黑色素瘤、纤维瘤和鼻咽癌中的任意一种或多种。
22、本专利技术第四方面提供了一种用于预防和/或治疗肿瘤的方法，所述方法包括逆转n2型中性粒细胞的功能的步骤。
23、在一些具体的实施方案中，所述方法包括向对其有需要的个体施用本专利技术第二方面所述的功能逆转的n2型中性粒细胞的步骤。
24、在另一些具体的实施方案中，所述方法包括向对其有需要的个体施用胆汁酸的步骤，胆汁酸在个体内逆转n2型中性粒细胞的功能。
25、在一些具体的实施方案中，所述肿瘤包括肝癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、食道癌、结肠癌、膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肾透明细胞癌、黑色素瘤、纤维瘤和鼻咽癌中的任意一种或多种。
26、专利技术的效果
27、本专利技术首先提供了一种逆转n2型中性粒细胞的功能的方法，通过向n2型中性粒细胞的生长环境中添加胆汁酸，使得其分泌细胞因子等的能力发生了有效逆转，使得n2型中性粒细胞趋近于n1型中性粒细胞。同时胆汁酸代谢调控的n2型中性粒细胞对例如cd8+t细胞等淋巴细胞的增殖抑制作用消失，进而可以通过免疫细胞间的相互作用，激活抗肿瘤免疫，发挥抗肿瘤作用。并且实验数据显示，在小鼠黑色素瘤模型和小鼠结肠癌模型中，经胆汁酸给药后的小鼠肿瘤明显小于对照组，证明胆汁酸可以通过逆转n2型中性粒细胞的功能有效抑制肿瘤的发展。
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1.一种逆转N2型中性粒细胞的功能的方法，其特征在于，所述方法包括向N2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胆汁酸包括鹅去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、石胆酸和6-乙基鹅去氧胆酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述向N2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤前，所述方法还包括在体外诱导N2型中性粒细胞的步骤。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述向N2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤中，所述胆汁酸的添加量为使N2型中性粒细胞的生长环境中含有40～60μM胆汁酸。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述逆转N2型中性粒细胞的功能包括如下(i)～(iii)中的任意一种或多种：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述免疫抑制因子包括IL-10、TGF-β和精氨酸酶中的一种或多种，所述免疫促进因子包括NOS2、NOX2和IFN-γ中的一种或多种，所述淋巴细胞包括T细胞和NK细胞。
7.一种功能逆转的N2型
8.根据权利要求7所述的功能逆转的N2型中性粒细胞，其特征在于，所述功能逆转的N2型中性粒细胞具有的功能包括如下(i)～(iii)中的任意一种或多种：
9.根据权利要求8所述的功能逆转的N2型中性粒细胞，其特征在于，所述免疫抑制因子包括IL-10、TGF-β和精氨酸酶中的一种或多种，所述免疫促进因子包括NOS2、NOX2和IFN-γ中的一种或多种，所述淋巴细胞包括T细胞和NK细胞。
10.根据权利要求7～9中任一项所述的功能逆转的N2型中性粒细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途；
...【技术特征摘要】
1.一种逆转n2型中性粒细胞的功能的方法，其特征在于，所述方法包括向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胆汁酸包括鹅去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、石胆酸和6-乙基鹅去氧胆酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤前，所述方法还包括在体外诱导n2型中性粒细胞的步骤。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述向n2型中性粒细胞中添加胆汁酸的步骤中，所述胆汁酸的添加量为使n2型中性粒细胞的生长环境中含有40～60μm胆汁酸。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述逆转n2型中性粒细胞的功能包括如下(i)～(iii)中的任意一种或多种：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述免疫抑制因子包括il-1...
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