【技术实现步骤摘要】
本公开涉及核酸药物，具体涉及一种抑制lpa基因表达的双链寡核苷酸及其应用。
技术介绍
1、脂蛋白(a)（lp(a)，lpa）是一种低密度脂蛋白变体，由与纤溶酶原（plg）同源的高分子量糖蛋白apo(a)亚型和ldl样颗粒形成二硫键共价结合构成，是一种具有apo(a)基团的低密度脂蛋白样蛋白。lpa是编码载脂蛋白(a)（apo(a)）的基因的名称，主要表达在肝脏，其表达仅限于人类和非灵长类动物。血浆lp(a)浓度大部分是由lpa基因决定，这在揭示lp(a)与心血管疾病的因果关系中起关键作用。脂蛋白(a)水平是多种心血管疾病的直接致病因素，与心血管疾病密切相关，如心肌梗死、下肢动脉病变、外周动脉粥样硬化以及主动脉瓣狭窄等疾病。利用孟德尔随机化研究证实lp(a)水平升高是心血管疾病的病因之一，lp(a)与心血管疾病风险呈连续相关，在2100个心血管疾病的候选基因中发现，lpa基因的变异是最强的心血管遗传危险因素。因此，lp(a)在心血管疾病中的病因性作用成为了研究热点。
2、小干扰rna（sirna）基于rna干扰机制，可以序列特异性的方式抑制或阻断目的基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。因此通过抑制lpa基因的表达，能够在细胞水平上对脂蛋白(a)水平异常引发的疾病、特别是心血管疾病进行预防和治疗。成人血脂异常防治指南将>30 mg/d1定义为lp(a)异常，以此为标准，约30%的既往有心血管事件的患者存在lp(a)异常，尽管lp (a)水平升高常见，但缺乏针对性治疗药物。因此，开发抑制lpa基因表达并能够治疗与lp
3、有鉴于此，特提出本公开。
技术实现思路
1、针对心脑血管疾病需求，本公开以lpa基因为靶点开发了能够降低胆固醇水平、进而预防或控制代谢综合征的小核酸分子药物。本公开的第一目的在于提供一种抑制lpa基因表达的双链寡核苷酸及其缀合物、药物组合物、试剂盒以及它们在抑制或降低lpa基因表达或治疗lpa基因介导的疾病或症状的方法和用途。
2、为解决上述技术问题，本公开特采用如下技术方案：
3、在本公开的第一方面，本公开提供了一种抑制lpa基因表达的双链寡核苷酸，所述双链寡核苷酸包含正义链和反义链，所述正义链包含核苷酸序列i，所述反义链包含核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii分别由17-21个核苷酸组成；其中，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii长度相等且基本互补形成双链体区域，所述基本互补是指所述正义链和所述反义链在所述双链体区的错配不超过3个核苷酸，所述核苷酸序列i为lpa基因表达的mrna中由17-19个连续核苷酸组成的核苷酸序列；其特征在于，所述反义链还包含由1-3个核苷酸组成的核苷酸序列iii。
4、所述核苷酸序列iii中的至少1个为双取代修饰核苷酸，所述双取代修饰核苷酸指核苷酸的核糖2’位羟基和氢被[2’-r1-2’-r2]取代的核苷酸。与相应位置的核苷酸为未修饰的核苷酸的 sirna相比，包含所述双取代修饰核苷酸的sirna的稳定性增加。
5、在本公开的一些具体实施方案中，所述核苷酸序列iii长度为两个核苷酸，按照5'末端到3'末端的方向，位于反义链第20-21位；
6、在本公开的一些具体实施方案中，r1和r2各自独立地选自卤素、取代/非取代的c1-c6烷基或取代/非取代的c1-c6烷氧基。
7、在本公开的一些具体实施方案中，所述双取代修饰核苷酸为核糖2’位羟基和氢被[2’-f-2’-甲基]取代的核苷酸。
8、在本公开的一些具体实施方式中，所述反义链包含表1中seq id no: 2、4、6、8、10、12、14和16中任一序列中的至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个或至少21个连续核苷酸的核苷酸序列，或包含与该连续核苷酸之间具有1、2或3个核苷酸差异的核苷酸序列；和/或，所述正义链包含表1中seq id no: 1、3、5、7、9、11、13和15中任一序列中的至少15个、至少16个、至少17个、至少18个或至少19个连续核苷酸的核苷酸序列，或包含与该连续核苷酸之间具有1、2或3个核苷酸差异的核苷酸序列。
9、在本公开的一些具体实施方案中，所述反义链包含seq id no.2、4、6、8、10、12、14或16中所示的任一条序列，或与上述任一序列具有1个或2个核苷酸差异的核苷酸序列。
10、在本公开的一些具体实施方案中，所述正义链包含seq id no.1、3、5、7、9、11、13和15中所示的任一条序列，或与上述任一序列具有1个或2个核苷酸差异的核苷酸序列。
11、在本公开的一些具体实施方案中，所述反义链包含seq id no.2、4、6、8、10、12、14或16中所示的任一条序列，且所述正义链包含seq id no.1、3、5、7、9、11、13或15中所示的任一条序列。
12、在本公开的一些具体实施方案中，所述双链寡核苷酸选自下列中的一组或多组：
13、1）反义链具有如seq id no.2所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.1所示核苷酸序列；
14、2）反义链具有如seq id no.4所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.3所示核苷酸序列；
15、3）反义链具有如seq id no.6所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.5所示核苷酸序列；
16、4）反义链具有如seq id no.8所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.7所示核苷酸序列；
17、5）反义链具有如seq id no.10所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.9所示核苷酸序列；
18、6）反义链具有如seq id no.12所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.11所示核苷酸序列；
19、7）反义链具有如seq id no.14所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.13所示核苷酸序列；
20、8）反义链具有如seq id no.16所示核苷酸序列，且正义链具有如seq id no.15所示核苷酸序列。
21、表1
22、
23、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸还可根据需要含有修饰的核苷酸，所述修饰的核苷酸不会导致所述sirna抑制lpa基因表达的功能明显削弱或丧失。
24、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸的正义链或反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸，例如，所述修饰的核苷酸为核糖基团以及任选的磷酸基团被修饰的核苷酸基团，但不限于此。
25、在本公开可选的实施方式中，所述双链寡核苷酸中的全部核苷酸基本上都选自经修饰的核苷酸。其中，“该双链寡核苷酸中的全部核苷酸基本上都选自经修饰的核苷酸”是本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制LPA基因表达的双链寡核苷酸，所述双链寡核苷酸包含正义链和反义链，所述正义链包含核苷酸序列I，所述反义链包含核苷酸序列II，所述核苷酸序列I和所述核苷酸序列II分别由17-21个核苷酸组成；其中，所述核苷酸序列I和所述核苷酸序列II长度相等且基本互补形成双链体区域，所述基本互补是指所述正义链和所述反义链在所述双链体区的错配不超过3个核苷酸，所述核苷酸序列I为LPA基因表达的mRNA中由17-19个连续核苷酸组成的核苷酸序列；其特征在于，所述反义链还包含由1-3个核苷酸组成的核苷酸序列III，所述核苷酸序列III中的至少1个核苷酸为双取代修饰核苷酸，所述双取代修饰核苷酸指核苷酸的核糖2’位羟基和氢被[2’-R1-2’-R2]取代的核苷酸，R1和R2各自独立地选自卤素、取代/非取代的C1-C6烷基或取代/非取代的C1-C6烷氧基。
2.根据权利要求1所述的双链寡核苷酸，其特征在于，核苷酸序列III长度为两个核苷酸，按照5'末端到3'末端的方向，位于反义链第20-21位；所述双取代修饰核苷酸为核糖2’位羟基和氢被[2’-F-2’-甲基]取代的核苷酸。
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