【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物医药，尤其涉及一种鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原、制备方法及其应用。
技术介绍
1、鲍曼不动杆菌感染是临床上一种严重的医院获得性感染，对公共卫生和临床治疗构成了严重威胁。鲍曼不动杆菌具有极强的耐药性，对常规抗生素产生高度耐药，尤其对碳青霉烯类抗生素的抗药性愈发严重，使其感染治疗变得异常棘手。此外，鲍曼不动杆菌在医院环境中极易传播，尤其对于免疫系统较弱的患者，如重症患者和免疫抑制患者，其感染风险更加突出。由于多药耐药菌株的增加以及高发病率和死亡率，鲍曼不动杆菌已被列入世界卫生组织（who）的耐药细菌和抗菌药物耐药性重点研究名单。
2、鲍曼不动杆菌感染对患者健康产生了严重的危害，可能导致多种严重的并发症，如肺部感染、败血症、脑膜炎等，甚至危及生命。在当前情况下，尚未有专门针对鲍曼不动杆菌的有效疫苗上市，这导致了在防控鲍曼不动杆菌感染方面的一系列挑战。因此，开发一种能够预防和控制鲍曼不动杆菌感染的疫苗显得尤为迫切和必要。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原、制备方法及其应用，旨在解决现有技术中的针对鲍曼不动杆菌感染的治疗和预防效果不佳的问题。
2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供了一种鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原，所述鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4
5、第三方面，本申请提供了一种如第一方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的制备方法，包括如下步骤：
6、a）质粒构建，原核表达：
7、将如seq id no.2所示的核苷酸序列克隆到载体中，利用pcr方法进行扩增，以获得pcr产物，将获得的pcr产物连接至载体中，构建重组表达载体；将构建的重组表达载体导入原核表达系统进行诱导表达，
8、b）进行离心收集：
9、收集诱导表达后的菌液进行离心，弃去上清液，加入pbs缓冲液混匀后，利用超声裂解，然后再进行离心，收集上清液；
10、c）获取含有gst标签的ba71_03257融合蛋白：
11、将步骤b）收集的菌种在含氨苄抗性的lb培养基中进行培养至od600为0.8时，加入iptg诱导剂置于摇床中进行诱导，然后离心收集菌体，加入pbs重悬菌体后，用高压均质仪器破碎，破碎后进行离心，收集上清液并与gst标签蛋白纯化树脂进行结合，获得含有gst标签的ba71_03257融合蛋白；
12、d）提取ba71_03257目的蛋白：
13、待步骤c）中的上清液与gst标签蛋白纯化树脂结合完毕后，利用酶切方法，将ba71_03257目的蛋白和gst标签分开，并进行收集；
14、e）纯化ba71_03257目的蛋白：
15、使用离子交换柱对步骤d）收集的ba71_03257目的蛋白进行进一步纯化，获取高纯度的ba71_03257重组蛋白抗原。
16、根据一种优选实施方式，在步骤a）中，所述表达载体为pgex-6p-2质粒，所述原核表达系统为大肠杆菌bl21（de3）感受态。
17、第四方面，本申请提供了第一方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原在制备治疗或预防鲍曼不动杆菌感染的药物中的应用。
18、根据一种优选实施方式，所述药物为鲍曼不动杆菌疫苗。
19、第五方面，本申请提供了一种由第一方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原免疫动物制备的鲍曼不动杆菌ba71_03257特异性抗体。
20、第六方面，本申请提供了第五方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257特异性抗体在制备治疗或预防鲍曼不动杆菌感染的药物中的应用。
21、第七方面，本申请提供了一种鲍曼不动杆菌检测试剂盒，包括第一方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原，和/或，
22、第五方面所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257特异性抗体。
23、基于上述技术方案，本申请提供的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原、制备方法及其应用至少具有如下有益技术效果：
24、本申请提供的一种鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原为治疗和预防鲍曼不动杆菌感染的药物例如疫苗提供了一种新的抗原储备，填补了目前该领域的空白。本申请提供的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的制备工艺简洁、操作步骤易控制易实现，所得到的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白纯度较高，产量较高，适用于大规模生产。
25、另一方面，利用本申请的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原制备的疫苗无毒副作用，能够产生高效价的抗体，具有良好的抗鲍曼不动杆菌感染的免疫保护效果，适用于制备特异性抗体。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种编码权利要求1所述的鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种如权利要求1所述的鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤a）中，所述表达载体为pGEX-6P-2质粒，所述原核表达系统为大肠杆菌BL21（DE3）感受态。
5.权利要求1所述的鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原在制备治疗或预防鲍曼不动杆菌感染的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物为鲍曼不动杆菌疫苗。
7.一种由权利要求1所述的鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原免疫动物制备的鲍曼不动杆菌BA71_03257特异性抗体。
8.权利要求7所述的鲍曼不动杆菌BA7
9.一种鲍曼不动杆菌检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的鲍曼不动杆菌BA71_03257重组蛋白抗原，和/或，
...【技术特征摘要】
1.一种鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原，其特征在于，所述鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.一种编码权利要求1所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.一种如权利要求1所述的鲍曼不动杆菌ba71_03257重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤a）中，所述表达载体为pgex-6p-2质粒，所述原核表达系统为大肠杆菌bl21（de3）感受态。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：王宁，石云，周杨杨，李彦，陈凯，杨红，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。