【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物饲料添加剂生产，尤其涉及一种酿酒酵母培养物及制备方法。
技术介绍
1、仔猪在早期断奶时由于“消化道发育不完善”和环境、饲料等变化，易受应激影响，导致食欲不佳和肠道粘膜免疫屏障受损，常出现腹泻等问题，在限抗、禁抗的背景下，增强仔猪肠道健康和提高免疫调节能力是提高仔猪生长能力及降低仔猪死亡率的关键。
2、酵母菌，特别是酿酒酵母（saccharomycescerevisiae），在动物饲料添加剂中得到了广泛应用，尤其是仔猪饲养中，酿酒酵母培养物具有富含丰富的蛋白质、氨基酸、b族维生素和功能性代谢产物，如β-葡聚糖和甘露寡糖，这些成分能够有效促进仔猪的生长、增强免疫力和改善消化功能，此外，酿酒酵母培养物还具有一定的抗氧化作用，有助于缓解仔猪在饲养过程中面临的环境应激。
3、然而，现有技术中为了增强发酵效果，通常采用多种微生物菌株的混合发酵方法，试图通过不同菌株的协同作用获得更高的产物质量和更广泛的功能性，这种多种微生物的发酵方式可以提供丰富的代谢产物和营养物质，改善饲料的消化利用率和营养含量，但在实际操作过程中却存在微生物之间相互干扰，各微生物发酵条件不同导致发酵效果不佳，并且多菌种发酵可能导致某些代谢产物的不稳定，或出现不良副产物积累，如部分微生物发酵过程中会产生大量的有机酸、乙醇或其他挥发性化合物，影响发酵物料的风味或功能性，甚至可能产生一些对仔猪健康有害的物质，这会直接影响发酵物料的适口性和营养价值，降低饲料添加剂的效果。
技术实现思路
1、
2、一种酿酒酵母培养物的制备方法，包括以下步骤：
3、s1：昆布和锦葵叶的混合发酵
4、将昆布和锦葵叶干燥粉碎后浸泡在热水中，再进行高温灭菌得到无菌昆布溶液，在无菌昆布溶液中加入磷酸氢二钾、酵母提取物和葡萄糖混合均匀，调节ph后得到昆布培养基，将斜面保存的根霉菌菌株和米曲霉菌株分别进行活化扩培，得到根霉菌种子液和米曲霉种子液，将根霉菌种子液和米曲霉种子液混合后接种至昆布培养基中发酵，得到昆布发酵产物；
5、s2：高抗氧酵母的筛选
6、分别将白酒糟ⅰ、白酒糟ⅱ和白酒糟ⅲ进行梯度稀释，然后取各梯度酒糟样品进行划线培养，挑选具有酵母菌形态及菌落最大的菌株进行纯化培养，得到纯化酵母菌株ⅰ、纯化酵母菌株ⅱ和纯化酵母菌株ⅲ，将纯化酵母菌株ⅰ、纯化酵母菌株ⅱ和纯化酵母菌株ⅲ进行摇床培养，得到发酵菌液ⅰ、发酵菌液ⅱ和发酵菌液ⅲ，测定并计算各发酵菌液nadh含量与dcw含量的比值，然后选取比值最高的发酵菌液ⅰ作为酿酒酵母发酵菌液；
7、s3：发酵物料的制备与发酵
8、将麸皮、昆布发酵产物、漆酶、燕麦、糖蜜、乳清粉、硫酸铵和半胱氨酸以混合搅拌均匀后静置，再进行蒸汽灭菌，冷却后得到发酵物料，在发酵物料中加入酿酒酵母发酵菌液，调节水分含量后平铺于发酵床上进行发酵，得到固体发酵产物，再将固体发酵产物烘干粉碎，得到酿酒酵母培养物。
9、进一步地，步骤s1昆布和锦葵叶的混合发酵，包括以下步骤：
10、s1.1：将8-10重量份的昆布和4-6重量份的锦葵叶置于烘干箱中，以45-50℃的温度干燥至含水量为10-15%，然后研磨成粉末置于容器中，加入80-100重量份的55-60℃的热水，保持温度浸泡25-30分钟后以121-125℃的温度高温灭菌12-15分钟，冷却至室温后得到无菌昆布溶液，将无菌昆布溶液置于经过高温杀菌的容器中，加入0.1-0.2重量份的磷酸氢二钾、0.4-0.6重量份的酵母提取物和0.8-1重量份的葡萄糖，混合均匀并设置ph为5.5-6，得到昆布培养基；
11、s1.2：将斜面保存的根霉菌菌株和米曲霉菌株分别接种于pda固体培养基中，根霉菌菌株以28-30℃活化培养24-28小时，米曲霉菌株以28-30℃活化培养32-36小时，将活化后的根霉菌菌株和米曲霉菌株分别采用无菌水冲洗，并用无菌生理盐水稀释培养液中的孢子浓度至107-108cfu/ml，得到根霉菌孢子悬浮液和米曲霉孢子悬浮液，将根霉菌孢子悬浮液以2-5%的接种量接种至pdb培养基中，再在150-200rpm，28-30℃的条件下进行恒温摇床培养12-18小时，得到根霉菌种子液，将米曲霉孢子悬浮液以2-5%的接种量接种至pdb培养基中，再在150-200rpm、28-30℃的条件下进行恒温摇床培养18-24小时，得到米曲霉种子液；
12、s1.3：将根霉菌种子液和米曲霉种子液以1：（2-3）的体积比混合得到混合种子液，然后将混合种子液接种至昆布培养基中，接种量占昆布培养基质量的2-3wt％，在28-32℃下发酵40-48小时，得到昆布发酵产物。
13、进一步地，步骤s2高抗氧酵母的筛选，包括以下步骤：
14、s2.1：分别将等质量不同产地的白酒糟ⅰ、白酒糟ⅱ和白酒糟ⅲ置于容器中，加入9倍重量份的无菌水进行震荡稀释，得到第一梯度酒糟样品，再取1重量份的第一梯度酒糟样品加入9倍重量份的无菌水进行震荡稀释，得到第二梯度酒糟样品，重复上述步骤直至得到第五梯度酒糟样品，然后分别取各梯度酒糟样品100-200μl涂布于yped培养基中，每梯度酒糟样品设置3-4个平行组，均在28-30℃下培养2-3天，挑选具有酵母菌形态及菌落最大的菌株在yped培养基中进行划线培养，然后继续挑选菌落最大的菌株置于yped培养基中进行划线培养，重复挑选划线培养2-3次，直至挑选的单菌落在显微镜镜检下无其他杂菌，得到纯化酵母菌株ⅰ、纯化酵母菌株ⅱ和纯化酵母菌株ⅲ；
15、s2.2：分别将纯化酵母菌株ⅰ、纯化酵母菌株ⅱ和纯化酵母菌株ⅲ以3-5%的接种量接种至250-300ml装有液体培养基的摇瓶中，摇瓶中液体培养基的含量为100-150ml，液体培养基为未加入琼脂的yped培养基，然后在150-180rpm，28-30℃的条件下摇床培养36-40小时，得到发酵菌液ⅰ、发酵菌液ⅱ和发酵菌液ⅲ；
16、s2.3：分别取30-40ml发酵菌液ⅰ、发酵菌液ⅱ和发酵菌液ⅲ以8000-10000rpm的转速离心5-6分钟，抽滤去除上清液，然后用蒸馏水清洗后再次离心并抽滤去除上清液，65-70℃干燥至恒重，测定dcw，再分别取80-100μl去除的上清液，利用elisa试剂盒和酶标仪测定其吸光值，并根据nadh标准曲线换算得到酵母细胞中nadh的含量，计算nadh含量与dcw含量的比值，然后选取比值最高的发酵菌液ⅰ作为酿酒酵母发酵菌液。
17、进一步地，步骤s3发酵物料的制备与发酵，包括以下步骤：
18、s3.1：将麸皮、昆布发酵产物、漆酶、燕麦、糖蜜、乳清粉、硫酸铵和半胱氨酸以（60-70）：（10-15）：（0.02-0.03）本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤S1昆布和锦葵叶的混合发酵，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤S2高抗氧酵母的筛选，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤S3发酵物料的制备与发酵，包括以下步骤：
5.根据权利要求2所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤S1.2中的根霉菌菌株和米曲霉菌株均保存于中国工业微生物菌种保藏管理中心，其中根霉菌菌株保藏编号为CICC40244，米曲霉菌株保藏编号为CICC40636。
6.根据权利要求3所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤S2.2中的液体培养基为未加入琼脂的YPED培养基。
7.一种酿酒酵母培养物，其特征在于，其由上述权利要求1-6任一项的一种酿酒酵母培养物的制备方法制备得到。
【技术特征摘要】
1.一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤s1昆布和锦葵叶的混合发酵，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤s2高抗氧酵母的筛选，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种酿酒酵母培养物的制备方法，其特征在于，步骤s3发酵物料的制备与发酵，包括以下步骤：
5.根据权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金玲，梅晓明，
申请(专利权)人：山东鹤来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。