【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于功能材料，具体涉及一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、纳米药物载体有助于提升小分子药物在肿瘤部位的富集效率和提升血液循环半衰期等。除此之外，具有肿瘤微环境主动响应的载体可以重塑肿瘤微环境，如改变乏氧和降低肿瘤细胞的还原性谷胱甘肽的浓度等，这对于一些依靠活性氧进行肿瘤杀灭的治疗类型(如光动力治疗、声动力治疗等)有着更积极的意义。
2、以二氧化锰为主体的纳米颗粒是近年来纳米载体研究的一大明星物质。它可以被用作产氧试剂，也被用于消耗肿瘤细胞内的谷胱甘肽(gsh)。然而，在实际的肿瘤微环境中，二氧化锰的多响应性使这两项功能的发挥产生了一定的矛盾性，尤其是影响其对肿瘤细胞内gsh的消耗能力。研究表明，肿瘤细胞外的h2o2在微酸的环境下就可以高效地与二氧化锰发生反应。但是，与之相悖的一个事实是高浓度的gsh主要分布在肿瘤细胞内部。由此可以预见，二氧化锰纳米颗粒在递送至肿瘤细胞内之前，就可以被h2o2所大量消耗和降解。因而，二氧化锰纳米颗粒对肿瘤细胞内的gsh的调控能力仍有待提高。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺点，提供一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体及其制备方法和应用，以解决二氧化锰难以顺序消耗双氧水产氧和中和还原性谷胱甘肽的问题。
2、为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
3、一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，包括以下步骤：
4、步骤1，氯化锰溶
5、步骤2，在mno2-pro溶液中滴加丙酮，反应后获得混合物，在混合物中滴加戊二醛混合，离心纯化后获得自聚交联的白蛋白保护的二氧化锰纳米颗粒，将所述自聚交联的白蛋白保护的二氧化锰纳米颗粒和磷酸缓冲溶液混合后，获得mp溶液；
6、步骤3，向mp溶液中依次滴加磷酸缓冲液、过氧化氢酶溶液、丙酮以及戊二醛溶液，搅拌后离心纯化，获得二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体。
7、本专利技术的进一步改进在于：
8、优选的，步骤1中，所述氯化锰溶液的浓度为5～20mg/ml；所述白蛋白溶液的浓度为2～20mg/ml。
9、优选的，步骤1中，氯化锰溶液和白蛋白溶液的混合比例为1：9。
10、优选的，步骤2中，丙酮和mno2-pro溶液的体积比为(2～5)：1。
11、优选的，步骤2中，mno2-pro溶液和戊二醛的体积比为50:1。
12、优选的，步骤3中，所述过氧化氢溶酶溶液的溶质为过氧化氢酶，溶剂为磷酸缓冲溶液，浓度为5～25mg/ml。
13、优选的，步骤3中，mp溶液、磷酸缓冲液、过氧化氢酶溶液、戊二醛的体积比为500:1000:(500～1000):3；
14、步骤3中，丙酮和mp溶液的混合体积比为(1.5～3)：1。
15、一种通过上述任意一项制备方法制得的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体，所述二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体为核壳结构，包括外壳和内核，所述外壳的成分为戊二醛交联的过氧化氢酶；所述内核的成分为戊二醛交联的白蛋白保护的二氧化锰纳米颗粒。
16、一种上述的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，用于装载药物。
17、一种上述的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，用于在肿瘤微环境中依次消耗双氧水和还原性谷胱甘肽。
18、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
19、本专利技术公开了一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，具体的制备步骤包括：1)制备白蛋白保护的二氧化锰纳米颗粒；2)通过丙酮溶剂反向沉淀以及戊二醛交联制备聚集的二氧化锰纳米颗粒；3)引入适量过氧化氢酶。整个反应过程中，通过丙酮溶剂反向沉淀以及戊二醛交联制备二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体。本专利技术通过反向溶剂沉淀的方法，制备了二氧化锰白蛋白融合的纳米颗粒(mp)，进一步使用反向溶剂沉淀，并以交联剂进行固定，使过氧化氢酶能包覆于mp表面而制备mp@cat。
20、本专利技术还公开了一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体，该纳米载体为核壳结构，该核壳结构最外部的外壳为过氧化氢酶，过氧化氢酶作为壳体，内部包裹有多个颗粒，内部的颗粒相互交联反应在一起，形成聚集状态的多个颗粒。该结构使得过氧化氢酶作为首层保护，能够在整个颗粒在移动过程中，过氧化氢酶首先和过氧化氢反应，保护二氧化锰纳米颗粒。而白蛋白之间通过表面的羟基、羧基等相互反应，形成了相对较大的聚集形的颗粒，该聚集形颗粒之间相互粘结，因为颗粒不均匀，使得颗粒之间有缝隙，这些缝隙能够作为良好的药物载体，该结构能够承载较多的药物。
21、本专利技术还公开了一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，该载体依靠物理吸附作用装载不同形式的小分子药物，对多种小分子药物具备良好的物理吸附装载能力，可以作为小分子药物的递送载体。因而，二氧化锰-过氧化氢纳米载体有望与匹配的药物小分子组装成具备肿瘤微环境调控的纳米药物，提升肿瘤的治疗效果。该物质既可以用于药物递送，又能有效的重塑肿瘤微环境，为活性氧依赖的肿瘤治疗手段提质增效。为肿瘤的化疗、光动力治疗提供了一种方便的药物载体。
22、本专利技术还公开了一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，该二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体通过顺序引入双氧水以及还原性谷胱甘肽的模拟测试，证明该二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体具备程序化消耗双氧水和还原性谷胱甘肽的能力，可以满足对肿瘤微环境高浓度过氧化氢和高浓度还原性谷胱甘肽的调控。该二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体在递送至肿瘤细胞内之前，表面的过氧化氢酶先和过氧化氢反应消耗，运送至肿瘤内部后，肿瘤内部的gsh穿过白蛋白和二氧化锰纳米颗粒反应，二氧化锰消耗gsh。除此之外，通过在溶液中模拟纳米颗粒与肿瘤组织相互作用的一般过程证明，本专利技术所制备的mp@cat能够抵抗双氧水的侵蚀，在与双氧水作用30分钟，其二氧化锰的保留量仍有约80％；同时，当其接触到还原性谷胱甘肽，仍可以迅速将其中和，从而在理论上实现了顺序消耗双氧水和还原性谷胱甘肽的目的。
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1.一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述氯化锰溶液的浓度为5～20mg/mL；所述白蛋白溶液的浓度为2～20mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤1中，氯化锰溶液和白蛋白溶液的混合比例为1：9。
4.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤2中，丙酮和MnO2-Pro溶液的体积比为(2～5)：1。
5.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤2中，MnO2-Pro溶液和戊二醛的体积比为50:1。
6.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述过氧化氢溶酶溶液的溶质为过氧化氢酶，溶剂为磷酸缓冲溶液，浓度为5～25mg/mL。
7.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征
8.一种通过权利要求1-7任意一项制备方法制得的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体，其特征在于，所述二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体为核壳结构，包括外壳和内核，所述外壳的成分为戊二醛交联的过氧化氢酶；所述内核的成分为戊二醛交联的白蛋白保护的二氧化锰纳米颗粒。
9.一种权利要求8所述的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，其特征在于，用于装载药物。
10.一种权利要求8所述的二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的应用，其特征在于，用于在肿瘤微环境中依次消耗双氧水和还原性谷胱甘肽。
...【技术特征摘要】
1.一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述氯化锰溶液的浓度为5～20mg/ml；所述白蛋白溶液的浓度为2～20mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤1中，氯化锰溶液和白蛋白溶液的混合比例为1：9。
4.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤2中，丙酮和mno2-pro溶液的体积比为(2～5)：1。
5.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤2中，mno2-pro溶液和戊二醛的体积比为50:1。
6.根据权利要求1所述的一种二氧化锰-过氧化氢酶纳米载体的制备方法，其特征...
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