【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细菌内毒素检测领域，具体涉及一种胆固醇细菌内毒素的检测方法。
技术介绍
1、在医药领域，注射剂的安全性极为重要，特别是使用动物脑组织提取物生产的胆固醇作为注射剂辅料时。胆固醇的纯度和安全性直接关联到注射剂的质量和临床安全。为保障注射剂安全，必须对胆固醇进行严格的安全性检测，制热物质作为全性检查的重要指标，根据其生产工艺分析制热物质主要为细菌内毒素。
2、国家药典委员会在胆固醇(供注射用)标准草案公示稿(2020年10月26日)中规定采用动态浊度法进行细菌内毒素检查。然而，在实际应用中，采用该法检测胆固醇细菌内毒素时，部分批次样品检测结果超出标准草案限值50倍以上、供试品阳性对照细菌内毒素回收率超出标准规定(50％～200％)，并导致检测产品无法配制成澄清溶液的情况，影响了检测结果的准确性。这些问题不仅影响了胆固醇质量的准确评估，也给注射剂的安全性和可靠性带来了风险。因此，迫切需要改进现有检测方法或开发新的有效检测手段，以确保胆固醇和注射剂的安全性和质量满足标准。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的上述问题，本申请提供一种胆固醇细菌内毒素的检测方法。
2、为解决上述问题，本专利技术提供如下技术方案：
3、本申请提供一种胆固醇细菌内毒素的检测方法，包括以下步骤：
4、将供试品原液及供试品阳性对照原液按比例稀释后，制得供试品原液稀释液及供试品阳性对照原液稀释液，分别与鲎试剂混合均匀，置于内毒素检测仪检测，测定结束后，按照标准
5、其中，供试品原液通过向胆固醇中加入无水乙醇和聚山梨酯80的混合液制备；
6、供试品阳性对照原液通过将细菌内毒素标准溶液与胆固醇溶液混合制得，且细菌内毒素标准溶液的溶剂为细菌内毒素检查用水。
7、在本申请的一种实施方式中，胆固醇与无水乙醇和聚山梨酯80的混合液的用量比为20mg:1ml。
8、在本申请的一种实施方式中，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1-3。
9、在本申请的一种实施方式中，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1.25-1.5。
10、在本申请的一种实施方式中，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8:1.25或9:1.5。作为优选，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8:1.25。此时供试品稀释液澄清，供试品阳性对照原液稀释液的细菌内毒素的回收率在77％～127％之间。
11、在本申请的一种实施方式中，使用细菌内毒素检查用水分别将供试品原液及供试品阳性对照原液稀释100倍。
12、在本申请的一种实施方式中，供试品原液稀释液与鲎试剂的体积比为1:1；供试品阳性对照原液稀释液与鲎试剂的体积比为1:1。
13、在本申请的一种实施方式中，供试品阳性对照原液的制备方法为：将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水配制成细菌内毒素标准溶液，将细菌内毒素标准溶液添加到20mg/ml的胆固醇溶液中，制得含细菌内毒素10eu/ml的胆固醇溶液。
14、在本申请的一种实施方式中，供试品阳性对照原液的制备方法为：将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水配制成2000eu/ml的细菌内毒素标准溶液，取2000eu/ml细菌内毒素标准溶液10μl加入到2ml胆固醇溶液(20mg/ml)中，混匀，得含细菌内毒素10eu/ml的胆固醇溶液。
15、在本申请的一种实施方式中，细菌内毒素标准溶液的浓度可根据实际需要进行调整，然后保持10μl的加样量不变，调整20mg/ml胆固醇溶液的体积。
16、在本申请的一种实施方式中，将细菌内毒素标准溶液，用细菌内毒素检查用水稀释成不同浓度的细菌内毒素溶液，分别与试剂等比例混合均匀，置于内毒素检测仪检测，将获得的数据进行线性回归分析，构建得到标准曲线。
17、与现有技术相比，本申请通过对药典公示稿的供试品原液的制备方法进行改进，使用无水乙醇和聚山梨酯80的混合液代替无水乙醇，并对供试品阳性液的制备方法进行改进，使用细菌内毒素检查用水代替聚氧乙烯(35)蓖麻油水溶液，使用本申请方法进行胆固醇细菌内毒素检测，供试品溶液澄清，供试品阳性对照细菌内毒素回收率为77％-127％，保证了检测结果的准确性。
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1.一种胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，胆固醇与无水乙醇和聚山梨酯80的混合液的用量比为20mg:1ml。
3.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1-3。
4.根据权利要求3所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1.25-1.5。
5.根据权利要求4所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8:1.25或9:1.5。
6.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，使用细菌内毒素检查用水分别将供试品原液及供试品阳性对照原液稀释100倍。
7.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，供试品原液稀释液与鲎试剂的体积比为1:1；供试品阳性对照原液稀释液与鲎试剂的体积比为1:1。
8.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特
9.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，将细菌内毒素标准溶液，用细菌内毒素检查用水稀释成不同浓度的细菌内毒素溶液，分别与鲎试剂等比例混合均匀，置于内毒素检测仪检测，将获得的数据进行线性回归分析，构建得到标准曲线。
...【技术特征摘要】
1.一种胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，胆固醇与无水乙醇和聚山梨酯80的混合液的用量比为20mg:1ml。
3.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1-3。
4.根据权利要求3所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8-9:1.25-1.5。
5.根据权利要求4所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，无水乙醇与聚山梨酯80的体积比为8:1.25或9:1.5。
6.根据权利要求1所述的胆固醇细菌内毒素的检测方法，其特征在于，使用细菌内毒素检查用水分别将供试品原液及供试...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱姝姝，秦瑶，胡艳芳，杨文静，
申请(专利权)人：南京绿叶制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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