【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一套检测马健康情况的引物集合和微流控芯片。
技术介绍
1、亨德拉病毒(hendravirus，hev)属于亨德拉病毒是属于副黏液病毒科，受亨德拉病毒感染的病马会出现发烧、呼吸困难、面部肿胀、行动迟缓等症状，有的甚至口鼻出血，几天之内，死亡，人感染了也会因肾衰竭，呼吸系统会受到影响然后无法呼吸导致死亡。
2、尼帕病毒(nipah virus，nvd)是一新型人兽共患病毒，它是rna病毒，属于副粘病毒科，能引起广泛的血管炎，感染者有发热、严重头痛、脑膜炎等症状，给人及动物带来严重危害。
3、水泡性口炎(vesicular stomatitis virus，vsv)，本病是马、牛和猪的一种病毒性疾病。其特征为口腔粘膜、乳头皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂，但很少发生死亡。感染这种病毒的马可能会发烧、进食困难、体重减轻或变得跛脚。感染的动物一般在一周后康复。最常见的并发症是局部继发细菌和真菌感染，以及乳房炎等。
4、马传染性子宫炎(contagious equine metritis，cea)是革兰氏阴性微嗜气性泰勒杆菌引起的一种主要通过交配传播的马属动物传染病，主要危害繁殖母马，以发生子宫颈炎、子宫内膜炎及阴道炎为特征，公马感染后无临床症状。隐性感染的繁殖母马和种公马是传染源。除交配感染外，也可经污染物发生间接接触传染。公马在交配时尿道生殖道粘膜感染本菌后,可导致长达数月乃至数年的带菌状态。
5、传统的上述病毒检测方法主要包括采用传统培养基法(病原微生物分离
技术实现思路
1、本专利技术提供了一套检测马健康情况的引物集合和微流控芯片，可同时完成亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的检测，准确性高、灵敏度高、特异性强。
2、本专利技术提供了一套检测马健康情况的引物集合，包括针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒设计的lamp引物组。
3、优选的，包括分别针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的seq id no.25～seq id no.28所示的序列设计所述lamp引物组。
4、优选的，针对亨德拉病毒设计的lamp引物组包括核苷酸序列依次如seq id no.1～seq id no.6所示的正向外引物hev-f3、反向外引物hev-b3、正向内引物hev-fip、反向内引物hev-bip、正向环引物hev-lf和反向环引物hev-lb；
5、针对尼帕病毒设计的lamp引物组包括核苷酸序列依次如seq id no.7～seq idno.12所示的正向外引物nvd-f3、反向外引物nvd-b3、正向内引物nvd-fip、反向内引物nvd-bip、正向环引物nvd-lf和反向环引物nvd-lb；
6、针对水泡性口炎病毒设计的lamp引物组包括核苷酸序列依次如seq id no.13～seq id no.18所示的正向外引物vsv-f3、反向外引物vsv-b3、正向内引物vsv-fip、反向内引物vsv-bip、正向环引物vsv-lf和反向环引物vsv-lb；
7、针对马传染性子宫炎病毒设计的lamp引物组包括核苷酸序列依次如seq idno.19～seq id no.24所示的正向外引物cem-f3、反向外引物cem-b3、正向内引物cem-fip、反向内引物cem-bip、正向环引物cem-lf和反向环引物cem-lb。
8、优选的，针对每种病毒设计的lamp引物组中，正向外引物的浓度为0.1～1μm，反向外引物的浓度为0.1～5μm，正向内引物和反向内引物的浓度均为0.1～5μm，正向环引物和反向环引物的浓度均为0.1～3μm。
9、优选的，针对每种病毒设计的lamp引物组中，正向外引物的浓度为0.3～0.5μm，反向外引物的浓度为1～2μm，正向内引物和反向内引物的浓度均为2.4～3.4μm，正向环引物和反向环引物的浓度均为1～2μm。
10、本专利技术还提供了上述引物集合在制备同时检测亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的工具中的应用。
11、优选的，所述工具包括微流控芯片。
12、本专利技术还提供了一种同时检测亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的微流控芯片，在所述微流控芯片的反应孔中分别配制针对不同病毒的lamp反应体系；
13、每种病毒的lamp反应体系以25μl计，包括：冻干体系mix，正向外引物的浓度为0.1～1μm，反向外引物的浓度为0.1～5μm，正向内引物和反向内引物的浓度均为0.1～5μm，正向环引物和反向环引物的浓度均为0.1～3μm。
14、优选的，所述微流控芯片包括8个反应孔。
15、本专利技术还提供了一种同时检测亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的试剂盒，包括上述微流控芯片。
16、优选的，利用所述微流控芯片进行检测时，以口鼻拭子或生殖道拭子提取的dna为模板。
17、有益效果：本专利技术提供了一套检测马健康情况的引物集合，包括针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒设计的lamp引物组，针对每种病毒分别设计一对外引物、一对内引物和一对环引物，由于环引物的加入，极大地加速了反应的进程，缩短了反应所需的时间，能够在30min内检出10个拷贝的病毒核酸。
18、本专利技术所述引物集合可与微流控芯片结合，仅通过荧光值变化就可进行判定，从而实现对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒、马传染性子宫炎病毒的快速检测，准确性高、灵敏度高、特异性强。利用本专利技术所述方法进行同时检测时，整个反应过程不需要开盖，极大地减少了污染的可能性，具有现场应用的前景。
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1.一套检测马健康情况的引物集合，其特征在于，包括针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒设计的LAMP引物组。
2.根据权利要求1所述引物集合，其特征在于，包括分别针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的SEQ ID No.25～SEQ IDNo.28所示的序列设计所述LAMP引物组。
3.根据权利要求1或2所述引物集合，其特征在于，针对亨德拉病毒设计的LAMP引物组包括核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～SEQ ID No.6所示的正向外引物HeV-F3、反向外引物HeV-B3、正向内引物HeV-FIP、反向内引物HeV-BIP、正向环引物HeV-LF和反向环引物HeV-LB；
4.根据权利要求3所述引物集合，其特征在于，针对每种病毒设计的LAMP引物组中，正向外引物的浓度为0.1～1μM，反向外引物的浓度为0.1～5μM，正向内引物和反向内引物的浓度均为0.1～5μM，正向环引物和反向环引物的浓度均为0.1～3μM。
5.权利要求1～4任一项所述引物集合在制备同时检测亨德拉病毒、尼
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述工具包括微流控芯片。
7.一种同时检测亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的微流控芯片，其特征在于，在所述微流控芯片的反应孔中分别配制针对不同病毒的LAMP反应体系；
8.根据权利要求7所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片包括8个反应孔。
9.一种同时检测亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求7或8所述微流控芯片。
10.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，利用所述微流控芯片进行检测时，以口鼻拭子或生殖道拭子中提取的基因组DNA为模板。
...【技术特征摘要】
1.一套检测马健康情况的引物集合，其特征在于，包括针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒设计的lamp引物组。
2.根据权利要求1所述引物集合，其特征在于，包括分别针对亨德拉病毒、尼帕病毒、水泡性口炎病毒和马传染性子宫炎病毒的seq id no.25～seq idno.28所示的序列设计所述lamp引物组。
3.根据权利要求1或2所述引物集合，其特征在于，针对亨德拉病毒设计的lamp引物组包括核苷酸序列依次如seq id no.1～seq id no.6所示的正向外引物hev-f3、反向外引物hev-b3、正向内引物hev-fip、反向内引物hev-bip、正向环引物hev-lf和反向环引物hev-lb；
4.根据权利要求3所述引物集合，其特征在于，针对每种病毒设计的lamp引物组中，正向外引物的浓度为0.1～1μm，反向外引物的浓度为0.1～5μm，正向内引物和反向内引...
【专利技术属性】
技术研发人员：薛青红，秦义娴，苏佳，高金源，王兆丽，吴华伟，孙淼，高月异，
申请(专利权)人：中国兽医药品监察所，
类型：发明
国别省市：
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