【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，特别是再生医学领域。具体而言，本专利技术涉及一种新的产生心肌细胞的方法，所述方法利用jak2抑制剂和心肌细胞诱导转录因子，从分化的细胞例如成纤维细胞通过重编程产生心肌细胞。
技术介绍
0、专利技术背景
1、全世界2300万人患有心力衰竭，通常由心肌细胞损伤或心肌细胞功能障碍引起。心肌细胞丢失的一个常见原因是导致心肌梗死的缺血性心脏病，由于心脏再生能力有限，损伤是永久性和渐进性的。尽管在医学治疗方面取得了进展，但目前除了原位心脏移植外，还没有恢复肌肉质量的策略，而原位心脏移植受限于细胞来源数量和长期疗效。迄今为止，在人体试验中使用的细胞疗法已经证明移植的细胞不会大量变成心肌细胞，也不会在心脏中持续存在。多能干细胞来源的心肌细胞移植正在接受测试，如果在细胞存活、成熟和电生理整合等问题得到有效解决后，这可能是有价值的。利用细胞类型特异的转录因子(tf)将细胞原位重编程为在疾病中丢失的细胞类型，是一种很有希望的除细胞治疗以外的另一有效的组织再生方法。在心脏中，大量的非心肌细胞，主要是心脏成纤维细胞，可以通过转录因子转变为诱导的心肌细胞样细胞。
2、在啮齿类动物中，冠状动脉结扎后直接在心肌内注入3种心脏特异性tf：gata4、mef2c和tbx5(gmt)，导致非心肌细胞转化为与现有心肌细胞电耦合的心肌细胞样细胞，从而改善心脏功能，减少瘢痕大小。然而，效率仍然有限，特别是在体外，大多数细胞并没有被彻底实现重编程。体内存在的导致重编程质量提高的信号尚不清楚，但表明改变培养条件或信号途径可在
3、自第一代心肌细胞重编程成功问世以来，已经有很多关于增强心脏重编程效率的报道。通过改变gmt三个基因的计量学，在gmt基础上鉴定额外的基因，或者通过操纵信号通路，体外产生的心肌细胞样细胞的质量和效率都可以得到改善。在大多数情况下，效率的提高主要是在小鼠胚胎成纤维细胞中发现的；相反，对心脏成纤维细胞以及成体皮肤为起始的重编程却效果有限。尽管最近sirna介导的bmi1基因敲除，以及通过sb431542联合xav939的策略提高了体外心脏成纤维细胞重编程的效率，但仍有待于确定是否存在能进一步增强小鼠体内重编程或影响人心脏成纤维细胞重编程的方法。
4、因此，本领域仍然需要新的重编程方法，其能够在体内或体外通过重编程高效地产生功能性心肌细胞，从而治疗心脏疾病例如心力衰竭。
技术实现思路
0、专利技术简述
1、一方面，本专利技术提供一种将起始细胞重编程为心肌细胞的方法，所述方法包括抑制起始细胞中jak2的表达和/或活性，以及向所述起始细胞提供一或多种心肌细胞诱导转录因子，所述一或多种心肌细胞诱导转录因子包括mef2c和tbx5。
2、在一些实施方案中，所述方法不包括向所述起始细胞提供心肌细胞诱导转录因子gata4。
3、在一些实施方案中，所述方法不包括向所述起始细胞提供除mef2c和tbx5外的其它心肌细胞诱导转录因子。
4、在一些实施方案中，所述“抑制起始细胞中jak2的表达和/或活性”包括
5、i)特异性敲低或敲除起始细胞中jak2的表达，和/或
6、ii)使起始细胞与至少一种jak2抑制剂接触。
7、在一些实施方案中，通过向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的shrna、反义rna或sirna来敲低jak2的表达，或通过向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的基因编辑系统来敲低或敲除jak2的表达。
8、在一些实施方案中，向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的shrna或包含编码所述特异性靶向jak2的shrna的表达载体，优选地，所述特异性靶向jak2的shrna的编码序列包含选自seq id no:1或2的序列。
9、在一些实施方案中，所述方法还进一步包括使起始细胞与tgfβ抑制剂例如小分子化合物sb43152接触。
10、在一些实施方案中，所述起始细胞是成纤维细胞，例如皮肤成纤维细胞或心脏成纤维细胞。
11、在一些实施方案中，所述“抑制起始细胞中jak2的表达和/或活性”的步骤可以在“向所述起始细胞提供一或多种心肌细胞诱导转录因子”的步骤之前或之后或同时进行。
12、在另一方面，本专利技术还提供一种通过本专利技术的方法制备的心肌细胞。
13、在另一方面，本专利技术还提供一种药物组合物，其包含通过本专利技术的方法制备的心肌细胞和药学上可接受的载体。
14、在另一方面，本专利技术还提供通过本专利技术的方法制备的心肌细胞或本专利技术的药物组合物在制备用于在对象中治疗心脏疾病的药物中的用途。在一些实施方案中，所述对象是人。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种将起始细胞重编程为心肌细胞的方法，所述方法包括抑制起始细胞中Jak2的表达和/或活性，以及向所述起始细胞提供一或多种心肌细胞诱导转录因子，所述一或多种心肌细胞诱导转录因子包括MEF2C和TBX5。
2.权利要求1的方法，其中所述方法不包括向所述起始细胞提供心肌细胞诱导转录因子Gata4。
3.权利要求1的方法，其中所述方法不包括向所述起始细胞提供除MEF2C和TBX5外的其它心肌细胞诱导转录因子。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述“抑制起始细胞中Jak2的表达和/或活性”包括
5.权利要求4的方法，其中通过向所述起始细胞导入特异性靶向Jak2的shRNA、反义RNA或siRNA来敲低Jak2的表达，或通过向所述起始细胞导入特异性靶向Jak2的基因编辑系统来敲低或敲除Jak2的表达。
6.权利要求5的方法，其中向所述起始细胞导入特异性靶向Jak2的shRNA或包含编码所述特异性靶向Jak2的shRNA的表达载体，优选地，所述特异性靶向Jak2的shRNA的编码序列包含选自SEQ ID NO:1或2的序列。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述方法还进一步包括使起始细胞与TGFβ抑制剂例如小分子化合物SB43152接触。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述起始细胞是成纤维细胞，例如皮肤成纤维细胞或心脏成纤维细胞。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述“抑制起始细胞中Jak2的表达和/或活性”的步骤可以在“向所述起始细胞提供一或多种心肌细胞诱导转录因子”的步骤之前或之后或同时进行。
10.一种通过权利要求1-9中任一项的方法制备的心肌细胞。
11.一种药物组合物，其包含权利要求10的心肌细胞和药学上可接受的载体。
12.权利要求10的心肌细胞或权利要求11的药物组合物在制备用于在对象中治疗心脏疾病的药物中的用途。
13.权利要求12的用途，其中所述对象是人。
...【技术特征摘要】
1.一种将起始细胞重编程为心肌细胞的方法，所述方法包括抑制起始细胞中jak2的表达和/或活性，以及向所述起始细胞提供一或多种心肌细胞诱导转录因子，所述一或多种心肌细胞诱导转录因子包括mef2c和tbx5。
2.权利要求1的方法，其中所述方法不包括向所述起始细胞提供心肌细胞诱导转录因子gata4。
3.权利要求1的方法，其中所述方法不包括向所述起始细胞提供除mef2c和tbx5外的其它心肌细胞诱导转录因子。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述“抑制起始细胞中jak2的表达和/或活性”包括
5.权利要求4的方法，其中通过向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的shrna、反义rna或sirna来敲低jak2的表达，或通过向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的基因编辑系统来敲低或敲除jak2的表达。
6.权利要求5的方法，其中向所述起始细胞导入特异性靶向jak2的shrna或包含编码所述特异性靶向jak2的s...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵扬，王浩，
申请(专利权)人：南京昕瑞再生医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。