本发明专利技术公开了一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，涉及动物食性鉴定技术领域，包括如下步骤：S1、对目标动物粪便样品所需的基因片段提取、质控、测序和分析；S2、采集目标动物的主要食物并制作参照标本；S3、对样品进行多重过筛，分离大小不同的颗粒并分别记录干重；S4、将分离后的大小不同的颗粒制成显微镜玻片进行鉴定，并计算每种食物在整个粪样中的比例；S5、对获得的食性数据进行检验；该多重过筛处理粪便的食性检测方法，通过利用不同食物在动物体内中的消化程度不同，从而对粪便中的不同大小体积的颗粒进行预先地分离，以更便捷更精确地识别动物的食性，为动物生态学食性鉴定领域提供了一种低成本、快捷、精确的检测方法。
1、野生动物食性的探究是一个复杂而多样的领域，不同种类的野生动物因其生态环境、生理结构和生活习性的不同，展现出了丰富多样的食性特征。探究野生动物食性对生态平衡与食物关系网、环境健康指标、生态分析等方面具有重要意义。了解野生动物的食性有助于揭示它们在生态系统中的角色和地位，包括它们与其他生物（如捕食者、竞争者、共生者）的相互关系；通过分析野生动物的食性变化，可以评估生态系统健康状况和稳定性，为生态修复和保护提供科学依据。
2、目前dna宏条形码技术在量化动物食性中被广泛应用，其拥有精度高且识别范围广等优点。但在针对混群现象普遍且粪便难以分辨，故需要大量重复检测样本的研究对象（如草食性雁类）来说成本较高，所以分析这类动物的食性时通常使用粪便混样法将多只动物的粪便混合一起进行检测，但这种方法的缺点是不能够精确地识别单个个体的具体食性。而粪便显微镜检测法作为另一种传统的食性检测方法，虽然可以降低检测成本并识别单个个体，但这种方法本质上是对食物中未消化的部分进行识别，对鉴别人员的识别能力具有一定要求，且食物的被消化难易程度不同，导致食物在粪便中不同的颗粒大小能相差一百倍以上。在实验过程中往往会将体积较小的颗粒过筛分离出去或者直接忽略掉，而这种现象在粪便显微镜检测中会严重干扰识别结果，对最终获得的食性信息准确度产生极大的影响，所以传统的粪便显微镜检测法和dna宏条形码技术均具有相当的局限性，不能完好地适用于所有物种的食性研究当中。
r/>技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，以解决现有技术中的上述不足之处。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，包括如下步骤：
3、s1、首先对目标动物粪便样品中的dna进行提取，然后通过pcr技术对dna中的目的基因进行扩增并构建文库，最后对文库进行质控、测序和分析，获得目标动物的食性数据；
4、s2、根据s1获得的食性数据，在目标动物的栖息地附近采集目标动物的主要食物并制作参照标本；
5、s3、对目标动物粪便样品进行多重过筛处理，分离粪便中大小不同的颗粒并分别记录干重；
6、s4、将分离后的大小不同的颗粒制成显微镜玻片进行食物物种鉴定，并通过s3中记录的干重来计算每种食物在整个粪样中的比例，从而获得目标动物的食性数据；
7、s5、将s4所取得的食性数据与s1所取得的食性数据进行检验，验证结果的准确性。
8、进一步地，s1所述目的基因为叶绿体的ribulosebisphosphate carboxylase大亚基基因。
9、进一步地，s1所述分析过程包括如下步骤：将测序获得的序列按 100%的序列相似度进行归并，生成特征性序列 asvs以及丰度数据表格；将丰度值低于全体样本测序总量0.001%的asv去除，然后对剩余asv特征序列与green genes数据库中的参考序列相比对，获取每个asv所对应的分类学信息，获得目标动物的主要食物种类。
10、进一步地，所述s3包括如下步骤：
11、s31、将粪便加水浸泡后制成显微镜玻片进行观察，利用血球计数板来计算粪便颗粒体积，从而根据粪便颗粒体积选择可以对粪便颗粒进行分离的筛网；
12、s32、通过筛网对粪便样本进行水冲过筛，充分过筛并收集过筛后的粪便悬浊液；
13、s33、将粪便悬浊液静止沉淀，再次进行水冲过筛，并重复此步骤，直至过筛后的液体中所含有粪便颗粒的干重应不超过粪便样本总干重的1%；
14、s34、对各个筛网上的粪便颗粒采用直接刮去和水冲后低速离心弃上清的方法进行收集，将第k个筛网上的粪便样本烘干并称重，记录干重为mk。
15、进一步地，s4所述显微镜玻片制作及鉴定包括如下步骤：
16、s41、将分离后的粪样放置于小烧杯中，加入浓硝酸，静置后再水浴加热，加水稀释，倒入300目网筛用蒸馏水冲洗至颜色恒定；
17、s42、将样品放到小烧杯中，用胶头滴管取少量样品置于载玻片上，滴一滴蒸馏水使样品散开，用镊子使之充分展开，然后盖上盖玻片，用滤纸吸去多余的水分；
18、s43、在显微镜中随机选取的视野内对颗粒进行识别，直到在每份分离后的样本内识别100个颗粒为止。
19、进一步地，s4所述计算每种食物在整个粪样中的比例的计算方法为以每个筛网所筛出的粪便干重mk为权数对第i种植物在整个粪便样本中所占据的比例进行计算。
20、进一步地，所述加权平均的计算公式为：
21、；
22、其中pai为第i个物种在被分离的这部分粪样中所占的面积比例；
23、通过上述公式计算每种食物在整个粪便样本中的比例。
24、进一步地，所述pai的计算公式为：
25、
26、其中di为在被分离的每部分粪便样品中所记录的第i个物种的颗粒数量，si为在被分离的每部分粪便样品中所记录的第i个物种的平均面积，且如果该碎片为未消化的完整柱状颗粒，则si记为实际测量面积的π倍。
27、进一步地，s5所述检验为重复方差分析检验。
28、与现有技术相比，本专利技术提供的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，利用不同食物在动物体内中的消化程度不同，继而在粪便中所形成的体积不同，从而对粪便中的不同大小体积的颗粒进行预先地分离，以更便捷更精确地识别动物的食性，最后在以基因宏条形码技术进行准确性的验证，为动物生态学食性鉴定领域提供了一种低成本、快捷、精确的检测方法，对动物生态学领域的研究具有重要意义。
本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，S1所述目的基因为叶绿体的ribulosebisphosphate carboxylase大亚基基因。
3.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，S1所述分析过程包括如下步骤：将测序获得的序列按100%的序列相似度进行归并，生成特征性序列ASV以及丰度数据表格；将丰度值低于全体样本测序总量0.001%的ASV去除，然后对剩余ASV特征序列与Green genes数据库中的参考序列相比对，获取每个ASV所对应的分类学信息，获得目标动物的主要食物种类。
4.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，所述S3包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，S4所述显微镜玻片制作及鉴定包括如下步骤：
6.根据权利要求4所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，S4所述计算每种食物在整个粪样中的比例的计算方法为以每个筛网所筛出的粪便干重Mk为权数对第i种植物在整个粪便样本中所占据的比例进行计算。
7.根据权利要求6所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，所述计算的公式为：
8.根据权利要求7所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，所述PAi的计算公式为：
9.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，S5所述检验为重复方差分析检验。
...
【技术特征摘要】
1.一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，s1所述目的基因为叶绿体的ribulosebisphosphate carboxylase大亚基基因。
3.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法，其特征在于，s1所述分析过程包括如下步骤：将测序获得的序列按100%的序列相似度进行归并，生成特征性序列asv以及丰度数据表格；将丰度值低于全体样本测序总量0.001%的asv去除，然后对剩余asv特征序列与green genes数据库中的参考序列相比对，获取每个asv所对应的分类学信息，获得目标动物的主要食物种类。
4.根据权利要求1所述的一种多重过筛处理粪便的食性检测方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹业爱，王声泽，谢永宏，李峰，邓正苗，张娉杨，张思琪，吴滔，李冬梅，
申请(专利权)人：中国科学院亚热带农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。