本发明专利技术公开了一种人参皂甙纳米微粒及其制备方法和用途。将人参皂甙、胆固醇和卵磷脂三者以重量比２０∶１∶１混合，用非离子表面活性剂助溶。人参皂甙、胆固醇和卵磷脂三者相互作用，自动形成纳米微粒。然后用透析或者超滤法除去非离子表面活性剂。由此形成的人参皂甙纳米微粒（Ｇｉｎｓｏｍｅ）在电子显微镜下观察为一种直径为６０～８０ｎｍ的球状微粒。Ｇｉｎｓｏｍｅ具有疫苗免疫佐剂的功能，增强疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫功能，只需要１０微克就可以显著提高抗原的免疫原性，在疫苗制造上具有广泛用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种人参皂甙纳米微粒(Ginsome)及其制备方法和用途。
技术介绍
佐剂是一类可以增强疫苗诱导的免疫反应强度或改变免疫反应类型的物质。自从上个世纪20年代Glenny发现氢氧化铝铝胶具有佐剂以来后，氢氧化铝铝胶是目前唯一经过批准的人用疫苗佐剂，已经广泛用于人兽疫苗的生产。但氢氧化铝铝胶佐剂有许多不足之处(1，2，3，4)，例如，1)它可促进IgE抗体产生，容易诱导机体产生过敏反应；2)注射后局部刺激性较大；3)多次注射含氢氧化铝铝胶的疫苗可以导致铝盐在局部累积，引起局部肌肉疾病；4)氢氧化铝铝胶主要促进Th2类免疫反应，而对Th1类免疫反应促进不大。Th1类免疫反应主要是针对细胞内寄生的病原微生物；Th2类免疫反应主要是针对细胞外寄生的病原微生物和寄生虫。所以，氢氧化铝铝胶主要用于细菌性菌苗的生产，而对于一些病毒疫苗的佐剂意义不大。传统疫苗一般用全菌体或全病毒制成，含有多种抗原成分，它们当中能够产生保护性免疫反应的只有少部分，其余的抗原非但没有必要，还会引起一定的副反应。随着免疫学基础理论研究的深入，以及抗原提纯技术和基因工程技术的发展，出现了许多亚单位抗原和多肽抗原，有的抗原已经能够人工合成。和传统菌疫苗比较，这些抗原具有分子量小、纯度高、安全性好的优点。但至今为止，开发成功的相关疫苗却为数甚少。其原因之一是纯化后抗原的免疫原性变差，难以诱导机体产生足够的免疫反应。因此，研究既促进Th1类又促进Th2类免疫反应的新型佐剂或提高亚单位疫苗的免疫效果具有重要意义。我们以前的研究表明，人参皂甙是一个安全的免疫佐剂。它不仅可以提高Th1类免疫反应，还可提高Th2类免疫反应(5，6，7，8， 9)。有关成果已经获得国家专利技术专利(10)。人参皂甙可以从中草药人参Panaxginseng C.A.Mey的根，西洋参Panax quinquefolium L.的根，三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的根，或者绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.的全草中提取，是一类具有三萜皂甙化学结构的化合物(11)。人参皂甙常用的提取方法是(12)用乙醇或甲醇溶剂提取，回收溶剂，将残渣溶于水，滤除不溶物，水溶液用石油醚、苯或乙醚等亲脂性有机溶剂作两相萃取，以除去亲脂性杂质。然后改用水饱和的丁醇萃取，使皂甙转移于丁醇。收集丁醇，减压蒸干，的粗制人参皂甙。将粗制的人参皂甙溶解于少量甲醇或乙醇中，然后逐滴加入丙酮，混合均匀，即析出人参皂甙。如此处理数次，即可获得精制人参皂甙。如此获得的人参皂甙需要较大剂量才能发挥佐剂作用，直接作为动物疫苗的免疫佐剂相对成本较高。参考文献1.Lindblad，L.B.& Sparck J.V.(1987)Basic concepts in the applicationof immunological adjuvants.Scand.J.Lab.Anim.Sci.141-132.Bomford，R.(1994)Adjuvants.InDale，M.M.et al.(Ed)Textbookof Immunopharmacology，3rded，Blackwell Scientific Publications，Oxford.pp.335-3393.Ott，G.，Nest，G.V.& Burke，R.L.(1994)The use of Muramyl peptidesas vaccine adjuvants.InInternational Business Communications-Newadvances in vaccine technologies and applications February 23-25，1994，pp.89-1144.Malakoff，D.Public Health.Aluminum is put on trial as a vaccinebooster.Science 2000，288，1323-13245.HU，S.，CONCHA，C，COORAY，R.HOLMBERG，O.Ginseng-enhanced oxidative andphagocytic activities of polymorphonuclear leucocytes from bovineperipheral blood and stripping milk.Vet.Res.1995，26，155-1616.CONCHA，C.，HU，S.，HOLMBERG，O.The proliferative responses of cowstripping milk and blood lymphocytes to pokeweed mitogen and ginsengin vitro.Vet.Res.1996，27，107-1157.HU，S.，CONCHA，C.，LIN，F.，PERSSON WALLER，K.Adjuvant effect of ginsengextracts on the immune responses to immunization againstStaphylococcus aureus in dairy cattle.Vet.Immunol.Immunopathol.2003，91，29-378.RIVERA，E.，DAGGFELDT，A.，HU，S.Ginseng extract in aluminium hydroxideadjuvanted vaccines improves the antibody response of pigs to porcineparvovirus and Erysipelothrix rhusiopathiae.Vet.Immunol.Immuopathol.2003，91，19-279.Rivera，E.，Hu，S.，Concha，C.Ginseng and aluminium hydroxide actsynergistically as vaccine adjuvants.Vaccine 2003，21，1149-115710.人参总皂甙和单体皂甙Rb1的疫苗佐剂用途(专利号ZL02110578.2)；11.宋小妹，唐志书(主编)，中草药化学成分提取分离与制备(第1版)，人民卫生出版社，北京，2004年，第33页，第51页，第206页，第394页。12.王宪楷(主编)，天然药物化学，第1版，人民卫生出版社出版，北京，1988年，第549页。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人参皂甙纳米微粒(Ginsome)及其制备方法和用途。人参皂甙纳米微粒(Ginsome)是一种含有人参皂甙、胆固醇和卵磷脂的直径为60～80nm的球状微粒。人参皂甙纳米微粒(Ginsome)的制备方法的步骤如下1)人参皂甙溶液的配制将人参皂甙溶解于蒸馏水，配成50～100mg/ml溶液，过滤除菌，备用；2)胆固醇/卵磷脂溶液的配制将非离子型表面活性剂，例如Mega-10，可用Sigma公司产品或辛基葡萄糖甙octylglucoside本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人参皂甙纳米微粒，其特征在于，它是一种含有人参皂甙、胆固醇、卵磷脂的直径为６０～８０ｎｍ的球状微粒。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡松华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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