【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养，尤其涉及一种cho细胞无血清培养基及其应用。
技术介绍
1、中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary，cho)细胞广泛应用于重组蛋白药物及抗体药物的生产，①不易受人类病毒感染具有高安全性；②翻译后修饰与人类细胞相似的rtp；③高密度ch0细胞可以适应化学定义的无血清培养基(cd-sfm)的悬浮培养，并产生分泌到培养基中的蛋白质，所以cho细胞是目前少数fda及各国药监部门认可的合法合规的产业化工程细胞株。最早成功开发并用于培养动物细胞的培养基通常由血浆、血清或组织提取物组成，这些生物成分复杂的、未定义的性质导致了可变性，增加了污染的风险，并阻止了对支持培养基中细胞生长所需的最低限度的、特定的营养成分的阐明，补料分批培养是大规模工业生产单克隆抗体和重组生物制药蛋白的方法。
2、如中国专利，申请号cn202010411552.7的一种由补料培养基共混的基础培养基，包括补料培养基a、补料培养基b和添加剂，所述补料培养基b的体积用量是补料培养基a的5-15％；所述补料培养基a包含有总浓度为12900-124000mg/l的氨基酸，总浓度为1210-12560mg/ml的无机盐和微量元素，总浓度为780-10260mg/l的维生素，以及总浓度为1300-8020mg/ml的其它成分；所述补料培养基b包含有总浓度为18000-180000mg/1的l-色氨酸、l-酪氨酸、l-半胱氨酸；所述添加剂包括总浓度0.103-1.251g/l的丙酮酸钠、乙醇胺、谷胱甘肽、精胺、柠檬酸铁铵、亚硒酸钠。
3、但长时间培养会导致培养基溶液中酸峰增加。
4、如中国专利，申请号cn202010230993.7的一种大规模干细胞培养方法，该方法包括以下步骤：将3d微胶囊溶胀，3d微胶囊呈蜂巢状，直径为0.5-10mm，微囊的孔径为10nm-10000nm；将单细胞悬液接种于溶胀后的3d微胶囊，干细胞的接种密度为1-8×105个/ml，再用扩增培养基对干细胞进行扩增培养，培养条件如下：静态培养1-3天，静态培养时的搅拌速度调至50-70rpm、ph调至7.0、d050％、温度为37±1℃，每隔2天补加一次培养基，灌流培养3-5天，灌流培养时的灌流流速由0.8vvd升至2vvd，调节搅拌速度升至100rpm，每隔2天补加一次培养基；用3d微胶囊溶解剂进行解囊；收获扩增细胞；该专利技术提供的大规模干细胞培养方法能够解决大规模培养时细胞难以收获的问题，且使用该方法培养的干细胞增殖效果好、活率高，收获时间短。
5、但海藻酸钠微胶囊在搅拌培养过程中易受剪切力破碎。
技术实现思路
1、本申请实施例通过提供一种cho细胞无血清培养基，解决了现有技术中酸峰高，微胶囊易破碎的问题，实现了长时间培养酸峰较低，微胶囊长时间培养不受剪切力破坏。
2、本申请实施例提供了一种ch0细胞无血清培养基，包括基础培养基、补料培养基和微胶囊。
3、进一步的，所述基础培养基包括：脯氨酸0.600g/l、丝氨酸1.248g/l、羟脯氨酸0.437g/l、精氨酸0.570g/l、丙氨酸0.483g/l、苏氨酸0.351g/l、缬氨酸0.660g/l、甲硫氨酸0.906g/l、组氨酸0.846g/l、异亮氨酸0.379g/l、苯丙氨酸0.473g/l、天门冬酰胺0.936g/l、亮氨酸0.899g/l、谷氨酸0.660g/l、赖氨酸盐酸0.443g/l、天冬氨酸0.664g/l、硫酸镁0.307g/l、氯化钾0.233g/l、氯化钙0.507g/l、氯化胆碱0.327g/l、肌醇0.291g/l、磷酸氢二钠0.924g/l、磷酸二氢钠0.262g/l、烟酰胺0.127g/l、vb120.109g/l、对氨基苯甲酸3.200g/l、乙醇胺1.773g/l、腐胺1.000g/l、吡哆素0.013g/l、维生素c0.003g/l、d-泛酸半钙0.005g/l、核黄素0.012g/l、生物素0.011g/l、叶酸0.005g/l、硫辛酸0.006g/l、柠檬酸铁铵0.001g/l、九水偏硅酸钠0.0132733g/l、七水硫酸锌0.0059133g/l、五水硫酸铜0.0160000g/l、mncl20.0030852g/l、二水钼酸钠0.0006414g/l、亚硒酸钠0.0001270g/l、六水硫酸镍0.0000329g/l、nav030.0000072g/l、氯化锡0.0000656g/l、二氧化锗0.0000109g/l、六水氯化铝0.0000356g/l、六水氯化钴0.0000007g/l。
4、进一步的，所述加料培养基包括：脯氨酸4.195g/l、丝氨酸10.590g/l、羟脯氨酸1.159g/l、精氨酸7.900g/l、丙氨酸2.569g/l、苏氨酸4.792g/l、缬氨酸5.825g/l、甲硫氨酸3.082g/l、组氨酸2.757g/l、异亮氨酸7.536g/l、苯丙氨酸7.213g/l、天门冬酰胺12.450g/l、亮氨酸8.014g/l、谷氨酸14.297g/l、赖氨酸盐酸11.162g/l、天冬氨酸11.720g/l、硫酸镁1.250g/l、氯化钾4.200g/l、氯化钙1.200g/l、氯化胆碱1.890g/l、肌醇3.240g/l、磷酸氢二钠6.667g/l、磷酸二氢钠2.281g/l、烟酰胺0.213g/l、vb120.095g/l、对氨基苯甲酸0.100g/l、乙醇胺0.119g/l、腐胺0.130g/l、吡哆素0.170g/l、维生素c0.250g/l、d-泛酸半钙0.050g/l、核黄素0.076g/l、生物素0.063g/l、叶酸0.121g/l、硫辛酸0.075g/l、柠檬酸铁铵0.130g/l、九水偏硅酸钠0.0360000g/l、七水硫酸锌0.0641230g/l、五水硫酸铜0.0100725g/l、mncl20.0100200g/l、二水钼酸钠0.0101040g/l、亚硒酸钠0.0100500g/l、六水硫酸镍0.0100088g/l、nav030.0100027g/l、氯化锡0.0100082g/l、二氧化锗0.0100360g/l、六水氯化铝0.0100816g/l、六水氯化钴0.0103000g/l、氯化锂0.0103000g/l、酪氨酸68.25g/l、半胱氨酸57.78g/l、色氨酸24.71g/l。
5、进一步的，所述微胶囊为海藻酸钠微胶囊，为蜂巢状，直径为0.1-3mm，所述3d微胶囊的孔径为5nm-8000nm。
6、进一步的，所述微胶囊的制备方法为：
7、s1、将重量百分比为1-3wt％的海藻酸钠溶液与重量百分比为0.1-2wt％的明胶溶液以(0.1-1)：1的比例混合均匀，获得第一混合液；
8、在第一混合溶液中加入起泡剂，起泡剂在第一混合溶液中的浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基、补料培养基和微胶囊。
2.如权利要求1所述的一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基包括：脯氨酸0.600g/L、丝氨酸1.248g/L、羟脯氨酸0.437g/L、精氨酸0.570g/L、丙氨酸0.483g/L、苏氨酸0.351g/L、缬氨酸0.660g/L、甲硫氨酸0.906g/L、组氨酸0.846g/L、异亮氨酸0.379g/L、苯丙氨酸0.473g/L、天门冬酰胺0.936g/L、亮氨酸0.899g/L、谷氨酸0.660g/L、赖氨酸盐酸0.443g/L、天冬氨酸0.664g/L、硫酸镁0.307g/L、氯化钾0.233g/L、氯化钙0.507g/L、氯化胆碱0.327g/L、肌醇0.291g/L、磷酸氢二钠0.924g/L、磷酸二氢钠0.262g/L、烟酰胺0.127g/L、VB120.109g/L、对氨基苯甲酸3.200g/L、乙醇胺1.773g/L、腐胺1.000g/L、吡哆素0.013g/L、维生素C0.003g/L、D-泛酸半钙0.005g/L、核黄素0.012g/L、生物素0.
3.如权利要求1所述的一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述加料培养基包括：脯氨酸4.195g/L、丝氨酸10.590g/L、羟脯氨酸1.159g/L、精氨酸7.900g/L、丙氨酸2.569g/L、苏氨酸4.792g/L、缬氨酸5.825g/L、甲硫氨酸3.082g/L、组氨酸2.757g/L、异亮氨酸7.536g/L、苯丙氨酸7.213g/L、天门冬酰胺12.450g/L、亮氨酸8.014g/L、谷氨酸14.297g/L、赖氨酸盐酸11.162g/L、天冬氨酸11.720g/L、硫酸镁1.250g/L、氯化钾4.200g/L、氯化钙1.200g/L、氯化胆碱1.890g/L、肌醇3.240g/L、磷酸氢二钠6.667g/L、磷酸二氢钠2.281g/L、烟酰胺0.213g/L、VB120.095g/L、对氨基苯甲酸0.100g/L、乙醇胺0.119g/L、腐胺0.130g/L、吡哆素0.170g/L、维生素C0.250g/L、D-泛酸半钙0.050g/L、核黄素0.076g/L、生物素0.063g/L、叶酸0.121g/L、硫辛酸0.075g/L、柠檬酸铁铵0.130g/L、九水偏硅酸钠0.0360000g/L、七水硫酸锌0.0641230g/L、五水硫酸铜0.0100725g/L、MnCl20.0100200g/L、二水钼酸钠0.0101040g/L、亚硒酸钠0.0100500g/L、六水硫酸镍0.0100088g/L、NaVO30.0100027g/L、氯化锡0.0100082g/L、二氧化锗0.0100360g/L、六水氯化铝0.0100816g/L、六水氯化钴0.0103000g/L、氯化锂0.0103000g/L、酪氨酸68.25g/L、半胱氨酸57.78g/L、色氨酸24.71g/L。
4.如权利要求1所述的一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述微胶囊为海藻酸钠微胶囊，为蜂巢状，直径为0.1-3mm，所述3D微胶囊的孔径为5nm-8000nm。
5.如权利要求1所述的一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，所述微胶囊的制备方法为：
6.如权利要求5所述的一种CH0细胞无血清培养基，其特征在于，培养方法具体为将CH0单细胞悬液接种于双层微胶囊，细胞的接种密度为1-8×105个/ml，再用基础培养基对干细胞进行培养，培养条件如下：静态培养1-3天，静态培养时的搅拌速度调至50-70rpm、pH调至7.0、DO50％、温度为37±1℃，并在第三天开始加入加料培养基，补料频率为每隔一天一次，并且调节搅拌速度升至100rpm，在第15天时使用微胶囊溶解剂进行解囊后收获；加入的双层微胶囊在基础培养基中的比例为500-1000g/L。
7.如权利要求5所述的一种CHO细胞无血清培养基，其特征在于，解囊剂为碳酸氢钠和柠檬酸钠，其质量比为1：1。
8.如权利要求...
【技术特征摘要】
1.一种cho细胞无血清培养基，其特征在于，包括基础培养基、补料培养基和微胶囊。
2.如权利要求1所述的一种cho细胞无血清培养基，其特征在于，所述基础培养基包括：脯氨酸0.600g/l、丝氨酸1.248g/l、羟脯氨酸0.437g/l、精氨酸0.570g/l、丙氨酸0.483g/l、苏氨酸0.351g/l、缬氨酸0.660g/l、甲硫氨酸0.906g/l、组氨酸0.846g/l、异亮氨酸0.379g/l、苯丙氨酸0.473g/l、天门冬酰胺0.936g/l、亮氨酸0.899g/l、谷氨酸0.660g/l、赖氨酸盐酸0.443g/l、天冬氨酸0.664g/l、硫酸镁0.307g/l、氯化钾0.233g/l、氯化钙0.507g/l、氯化胆碱0.327g/l、肌醇0.291g/l、磷酸氢二钠0.924g/l、磷酸二氢钠0.262g/l、烟酰胺0.127g/l、vb120.109g/l、对氨基苯甲酸3.200g/l、乙醇胺1.773g/l、腐胺1.000g/l、吡哆素0.013g/l、维生素c0.003g/l、d-泛酸半钙0.005g/l、核黄素0.012g/l、生物素0.011g/l、叶酸0.005g/l、硫辛酸0.006g/l、柠檬酸铁铵0.001g/l、九水偏硅酸钠0.0132733g/l、七水硫酸锌0.0059133g/l、五水硫酸铜0.0160000g/l、mncl20.0030852g/l、二水钼酸钠0.0006414g/l、亚硒酸钠0.0001270g/l、六水硫酸镍0.0000329g/l、nav030.0000072g/l、氯化锡0.0000656g/l、二氧化锗0.0000109g/l、六水氯化铝0.0000356g/l、六水氯化钴0.0000007g/l。
3.如权利要求1所述的一种cho细胞无血清培养基，其特征在于，所述加料培养基包括：脯氨酸4.195g/l、丝氨酸10.590g/l、羟脯氨酸1.159g/l、精氨酸7.900g/l、丙氨酸2.569g/l、苏氨酸4.792g/l、缬氨酸5.825g/l、甲硫氨酸3.082g/l、组氨酸2.757g/l、异亮氨酸7.536g/l、苯丙氨酸7.213g/l、天门冬酰胺12.450g/l、亮氨酸8.014g/l、谷氨酸14.297g/l、赖氨酸盐酸11.162g/l、天冬氨酸11.720g/l、硫酸镁1.250g/l、氯化钾4.200g/l、氯化钙1.200g/l、氯化胆碱1.890g/l、肌醇3.240g/l、磷酸氢二钠6.667g/l、磷酸二氢钠2.281g/l、烟酰胺0.213g/l、vb120.095g/l、对氨基苯甲酸0.100g/l、乙醇胺0.119g/l、腐胺0.130g/l、吡哆素0.170g/l、维生素c0.250g/l、d-泛酸半钙0.050g/l、核黄素0.076...
【专利技术属性】
技术研发人员：王龙，杨一鸣，王猛，
申请(专利权)人：上海多宁生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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