【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及海洋生物，更具体的说是涉及一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法。
技术介绍
1、水母(外文名：jelly fish，拉丁学名：scyphozoa)，别称海蜇，是刺胞动物门钵水母纲动物，是海洋浮游生物的重要组成部分，在各个海域均有分布。受全球气候变化和人类活动的影响，水母数量激增，除危害沿海渔业生产外，水母的大量繁殖也造成了生态灾害，对沿岸生活和海事活动造成影响。如何有效应对水母暴发态势，找到高效利用水母这一海洋灾害生物的方法成为研究热点。
2、水母的伞部经腌制后作为食品，在我国食用历史已达上千年，并有作为治疗高血压、支气管炎、气管炎、胃溃疡和哮喘等症的中药的记载，具有经济价值与药用价值。除伞部外，水母的触手上密布刺丝囊，刺丝囊中含有大量毒素成分，在水母防御和捕食方面起着非常重要的作用，水母毒素具有多种生物活性，如抗氧化、抑制肿瘤迁移、抗血栓等，具有极大的开发新型海洋药物潜力。但水母毒素不耐热、易氧化，因此分离、纯化难度较大，制备高纯度、高活性的水母毒素成为目前水母毒素研究的瓶颈。
3、目前获得水母毒素的方法主要是用自动降解法来分离刺丝囊，例如cn101822692a一种水母毒素去溶血毒性的方法，公开了将水母触角在4℃下，一定量的海水或nacl溶液中放置1～4天，等待水母自动降解后，采用离心法回收得到小球状的刺丝囊，此法得到的刺丝囊细胞具有纯净，活性好的优点。但此法具有较多缺点，如水母触角只能一次性利用，不能循环持续使用，即便水母触手可以再生，也需7-10天才能再生完成，耗时较长，不利于工业化水母毒
4、水母在有触手的情况下，再生刺丝囊仅需2天时间，如果能单独采集刺丝囊，不损伤水母触手，那将缩短采集周期，有利于实现连续化、工业化生产，因此，如何提供一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法具有重要意义。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术提供了一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，包括以下步骤：
4、(1)使用覆网淀粉凝固体靠近成年水母，诱导成年水母对所述覆网淀粉凝固体进行防御和捕猎一段时间，回收覆网淀粉凝固体；
5、(2)采用纯化水对步骤(1)回收的覆网淀粉凝固体冲洗、剥去网后，切块、水冷粉碎，得到淀粉凝固体粉末；
6、(3)向步骤(2)得到的淀粉凝固体粉末中加入纯化水溶解，滴加碘水，使用低温a-淀粉酶，于0～4℃条件下酶解至溶液呈无色，获得酶解液；
7、(4)对步骤(3)得到的酶解液进行冷冻离心，收集下层沉淀，用干净海水洗涤2-3次后，再次冷冻离心，得到水母刺丝囊细胞；
8、(5)采用组织研磨器对步骤(4)得到的水母刺丝囊细胞进行研磨破碎后，冷冻离心，收集上层液，即为水母毒素蛋白粗纯液。
9、优选的，步骤(1)所述覆网淀粉凝固体由以下方法制得：(11)按比例将淀粉、增稠剂和纯化水混合，在搅拌条件下，加热煮沸至无沉淀后，倒入底层铺有一层尼龙纱网的2cm深的模具中，晾至室温，得到淀粉凝固体；(12)在淀粉凝胶固体未完全凝固时，再覆盖一层尼龙纱网，凝固，脱模，即得到覆网淀粉凝固体。
10、优选的，步骤(11)所述比例为以总质量100％计，淀粉占20-30％，增稠剂占2-5％，剩余为纯化水。
11、优选的，步骤(11)所述淀粉为玉米淀粉或土豆淀粉。
12、优选的，步骤(11)所述所述增稠剂为黄原胶或卡拉胶。
13、优选的，步骤(11)所述搅拌的转速为100-150r/min。
14、优选的，步骤(11)或步骤(12)所述尼龙纱网的孔径均为2mm。
15、优选的，步骤(2)所述切块的大小为5×5cm。
16、优选的，步骤(2)所述水冷粉碎的温度为4℃，目数为80目。
17、优选的，步骤(3)所述淀粉凝固体粉末、所述纯化水、所述低温a-淀粉酶的质量比为1g:10ml：5g。
18、优选的，步骤(3)所述低温a-淀粉酶的酶活≥2000u/g。
19、优选的，步骤(4)或步骤(5)所述冷冻离心的条件均为4℃，1000g冷冻离心15min。
20、优选的，步骤(5)所述冷冻组织研磨器的条件为4600rpm破碎180s。
21、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，通过覆网淀粉凝固体诱导水母防御和捕猎行为，使水母的刺丝囊脱落并粘附到覆网淀粉凝固体中，对水母损害小，其再生时间短，仅需2天，实现了循环收集水母刺丝囊的目的，生产可持续性极具优势；使用酶法分解淀粉凝固体时间较水母自溶时间更短，利于缩短生产时间；收集的刺丝囊及其毒素，受外界蛋白污染可能性小，初步纯化分离出的蛋白仅为水母毒素蛋白，为后续进一步纯化创造良好的基础。
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1.一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(1)所述覆网淀粉凝固体由以下方法制得：
3.根据权利要求2所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述比例为以总质量100％计，淀粉占25-30％，增稠剂占2-5％，剩余为纯化水。
4.根据权利要求2或3所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述淀粉为玉米淀粉或土豆淀粉；所述增稠剂为黄原胶或卡拉胶。
5.根据权利要求2所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述搅拌的转速为100-150r/min。
6.根据权利要求2所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)或步骤(12)所述尼龙纱网的孔径均为2mm。
7.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(2)所述切块的大小为5×5cm；
8.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于
9.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(4)或步骤(5)所述冷冻离心的条件均为4℃，1000g冷冻离心15min。
10.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(5)所述冷冻组织研磨器的条件为4600rpm破碎180s。
...【技术特征摘要】
1.一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(1)所述覆网淀粉凝固体由以下方法制得：
3.根据权利要求2所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述比例为以总质量100％计，淀粉占25-30％，增稠剂占2-5％，剩余为纯化水。
4.根据权利要求2或3所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述淀粉为玉米淀粉或土豆淀粉；所述增稠剂为黄原胶或卡拉胶。
5.根据权利要求2所述的一种活体水母毒素蛋白的粗纯方法，其特征在于，步骤(11)所述搅拌的转速为100-150r/min。
6.根据权利要求2所述的一种活...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹惠园，应芳，程泽华，李丰，范丽娟，许京楠，
申请(专利权)人：原海生物大连有限公司，
类型：发明
国别省市：
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