【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于组培领域，具体涉及一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法。
技术介绍
1、我国工业大麻产业发展前景良好，但由于大麻属雌雄异株，为典型的异花授粉作物，在大麻的繁种过程中，核心种质资源的防杂保纯和雄性大麻植株繁殖十分困难，品种间极易串粉杂交。并且同一群体内不同个体间表现多样性，优良性状不稳定性等给育种工作带来困难。本专利技术专利通过对工业大麻的茎尖和茎段的组织培养技术，建立其无性繁殖体系，来稳定其优良特性，稳定杂种优势、快速提纯和繁殖优良单株和品种(系)，从而加快工业大麻育种进程，并通过对工业大麻快繁技术的优化，使其在室内繁殖成为可能，使工业大麻(特别是药用工业大麻)温室工厂化繁殖成为可能。可进行规模化、标准化生产，为市场提供丰富的种苗，此快繁技术的特点是繁殖速度快，不仅可以摆脱外界条件的影响，不受季节限制，而且可以节约育苗占地，降低生产成本。
2、cn 112616671 a，专利技术名称《一种获得工业大麻单性植株组培苗的方法》公开了获得工业大麻单性植株组培苗的方法，(1)外植体的选择与灭菌，取工业大麻种子，先用水冲洗，然后进行消毒处理；(2)灭菌后材料的培养，接种完的外植体放置于培养间，先暗培养再进行正常培养，直至长出新芽，每个种子发出来的新芽作为单独株系标记，转接到培养基上进行后续培养，至此工业大麻无菌体系建立；(3)单性无菌植株获得，取第2步培养出来的新芽，接种到分化培养基中，分化培养基配方如下：ms+1.0mg·l-1 6-ba+0.3g·l-1活性炭+25g·l-1蔗糖+5g
3、cn115152352b，专利技术名称《一种工业大麻无菌实生苗繁育方法》公开了繁育方法：种子精选，用清水浸泡直至种子顶破种皮露出白色胚根后剥去外种皮和内种皮，放入装有质量分数为0.2％的次氯酸钠的三角瓶中进行灭菌处理，培养皿培养得到无菌的发芽种子，转移到装有ms固体培养基的容器中继续培养得到无菌实生苗，最后进行移栽。本专利技术种子先浸泡种子至胚根顶破种皮后去除外种皮和内种皮，只将完全展开、裸露的子叶以及胚轴、胚根进行灭菌，低浓度的次氯酸钠对种子发芽基本无伤害，种子发芽率100％，长势好，灭菌率达到90-100％。
4、上述专利均是采用工业大麻种子，均是为了获得无菌苗，cn 112616671 a是进行单株标记后获得了单性植株；cn115152352b不做标记，只是采用完全不同手法和不同的灭菌方法使灭菌效率更高，获得的无菌苗长势更好。但是这两种方法都只是从种子获得无菌外植体，一个种子最多只能获得一株无菌苗，无法进行扩繁和加代。
5、尹品训等2005年发表于“西南农业学报”的《大麻的离体培养与快速繁殖》公开了外植体为生长季节取母株上的嫩梢，剪成带节茎段，常规灭菌后，接种到诱导培养基中进行培养。但是，该文献并非针对茎尖和茎段分别进行扩繁后，进行生根，移栽。
技术实现思路
1、本专利技术通过药用、纤维用及籽用工业大麻无菌实生苗或盆栽外植体的茎尖和茎段组织快繁技术解决工业大麻种质资源提纯保存，并能够将具有优良种质特性的后代材料快速纯化扩繁。
2、本专利技术的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，是按照以下步骤进行：
3、步骤一、外植体分化培养
4、1)将无菌茎尖外植体和无菌茎段的外植体分别接种于茎尖培养基和茎段培养基上培养；其中，茎尖培养基是向1l的dkw中加入盐溶液1～3ml、蔗糖20～40g、tdz 0.1～0.2mg/l、琼脂7～8g和活性炭；活性炭的终浓度400～500mg/l；茎尖培养基的ph＝5.8；
5、茎段培养基是向1l的dkw中加入盐溶液1～3ml、蔗糖20～40g、tdz 0.2～0.3mg/l、琼脂7～8g和活性炭；活性炭的终浓度400～500mg/l；茎段培养基的ph＝5.8；
6、2)将步骤1)茎段的外植体分化出的带有生长点的腋芽切下后接种到新的茎尖培养基上，培养至成株，备用；
7、3)将步骤1)茎尖外植体分化的成株，备用；
8、步骤二、生根培养
9、将步骤一中茎尖外植体以及茎段的外植体分化的成株分别转移至生根培养基g中培养；其中，生根培养基g是向1l的ms或dkw中加入蔗糖30g、琼脂8g和iba 1mg/l，或向1l的ms或dkw中加入蔗糖30g、琼脂8g、iba 1mg/l和活性炭，活性炭的终浓度400～500mg/l；生根培养基g的ph＝5.8；
10、步骤三、驯化及移栽
11、将生根后的植株直接驯化移栽。
12、进一步地，所述的工业大麻品为药用、纤维用、籽用或药用工业大麻。
13、进一步地，步骤一中所述的外植体是从实验室内、室外盆栽或大田种植的苗期工业大麻植株获得外植体，或者按照如下方法获得工业大麻植株的外植体：
14、工业大麻植株的无菌实生苗外植体繁育方法按照以下步骤进行：
15、一、种子精选挑选成熟、完整饱满、无病虫侵害、有光泽的工业大麻种子，种子净度达到100％，纯度达到100％，发芽率达到99％以上；
16、二、种子浸泡用清水浸泡直至种子顶破种皮露出白色胚根后剥去外种皮和内种皮；三、种子灭菌将剥去外种皮和内种皮的工业大麻种子放入装有质量分数为0.2％的次氯酸钠的三角瓶中进行灭菌处理，灭菌时间总计30～35分钟；灭菌分3次处理，每隔10～12分钟更换1次新的次氯酸钠，灭菌处理过程中摇动三角瓶以达到灭菌彻底的效果；灭菌处理后用无菌水冲洗种子3～4遍，将发芽种子表面的次氯酸钠冲洗干净；
17、四、培养皿培养将ms固体培养基灭菌后分装入培养皿中，待培养基凝固冷却后将灭菌完成的种子接种到培养皿中，培养皿用报纸包裹后，放于培养箱中进行培养，培养2-3天，得到无菌的发芽种子；
18、五、繁殖将无菌的发芽种子转移到装有ms固体培养基的容器中继续培养10-15天，得到无菌实生苗；
19、步骤四所述培养条件为：温度为25℃，湿度为40-50％，光照强度为2000-2500lux，16h光照/8h黑暗；步骤五所述容器为组培瓶或试管；步骤五所述培养条件为：温度为25℃，湿度为40-50％，光照强度为4000-5000lux，16h光照/8h黑暗；步骤六所述移栽方法为：选择株型完整、茎秆粗壮、根系完整的无菌实生苗移栽，出瓶时将培养基与无菌实生苗一起取出，洗净根部的培养基和琼脂，转移到装有基质的盆中，基质需要提前灭菌；所述基质由粗椰糠、细椰糠和泥炭组成；粗椰糠、细椰糠和泥炭的质量比为0.15:0.35:0.5；所述基质的灭菌方法为：在121℃的高压锅中湿热灭菌30-40分钟；步骤四和五中所述ms固体培养基中含有的营养元素包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物，每升培养基含有18-20g琼脂粉；所述大量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行：
2.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于所述的工业大麻品为药用、纤维用、籽用或药用工业大麻。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤一中所述的外植体是从实验室内、室外盆栽或大田种植的苗期工业大麻植株获得外植体，或者按照如下方法获得工业大麻植株的外植体：
4.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤一中所述的外植体灭菌方式为先用70～75％酒精灭菌1min，再用0.5％次氯酸钠溶液消毒处理2～3min，外植体消毒后用无菌水冲洗3～4次。
5.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤1)中的无菌茎尖外植体和无菌茎段的外植体分别接种于茎尖培养基和茎段培养基上培养的条件均为温度24～25℃，湿度40-50％，光照强度200
6.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤1)中的茎尖外植体培养成株后，继续切成茎尖和茎段进行分化扩繁，或者直接进行生根培养。
7.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤2)中的茎段的外植体培养成株后，继续切成茎段进行分化扩繁，或者直接进行生根培养。
8.根据权利要求1或7所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤2)中茎段的外植体分化出的带有生长点的腋芽是按照如下方式获取：
9.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于生根培养条件为：温度24～25℃，湿度40-50％，光照强度2000-2500Lux，16h光照/8h黑暗。
10.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤三中的驯化移栽是将生根后的组培苗转移至培养基质中，进行培养，所述的培养基质为粗椰糠、细椰糠、泥炭按照质量比0.1～0.2:0.3～0.4:0.5的比例混合而成，或者蛭石、珍珠岩按照质量比1:1的比例混合而成，或者灭菌后的营养花土。
...【技术特征摘要】
1.一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于它是按照以下步骤进行：
2.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于所述的工业大麻品为药用、纤维用、籽用或药用工业大麻。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤一中所述的外植体是从实验室内、室外盆栽或大田种植的苗期工业大麻植株获得外植体，或者按照如下方法获得工业大麻植株的外植体：
4.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤一中所述的外植体灭菌方式为先用70～75％酒精灭菌1min，再用0.5％次氯酸钠溶液消毒处理2～3min，外植体消毒后用无菌水冲洗3～4次。
5.根据权利要求1所述的一种利用茎尖和茎段组织培养进行的工业大麻快速纯化扩繁的方法，其特征在于步骤1)中的无菌茎尖外植体和无菌茎段的外植体分别接种于茎尖培养基和茎段培养基上培养的条件均为温度24～25℃，湿度40-50％，光照强度2000-2500lux，16h光照/8h黑暗。
6.根据权利要求1所述的一种利用...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨柳，高嫱，李泽宇，潘红丽，芮海英，李娜，王迪，冯鹏，李肖白，师臣，韩冰，韩墨，赵践韬，刘洋，张丽娜，任翠梅，李冬梅，陈刚，
申请(专利权)人：黑龙江省农业科学院大庆分院，
类型：发明
国别省市：
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