【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法。
技术介绍
1、药物性磷脂病(dipl)是一种磷脂储存障碍，其特征是细胞和组织中多层体(髓样体)的异常积累。目前已有超过350种候选药物和已上市药物被报道可引起dipl。大多数引起dipl的化合物是阳离子两亲性的(亲脂性的)。
2、在非临床研究中，一种特殊的bmp，di22:6-bmp是组织dipl的可靠生物标志物，可以在血浆/血清和尿液中监测。使用di-22:6-bmp作为dipl的非侵入性生物标志物，提供了一种监测dipl与药物毒性的时间过程的方法，包括相关器官系统的发病和恢复时间。
3、由于bmp、溶酶体功能和磷脂积累之间的相互联系，di-22:6-bmp的变化可作为早期dipl的敏感标志物。研究表明，与其他磷脂相比，di-22:6bmp更能预测dipl，与组织损伤的相关性更小，使其成为dipl的更特异性标志物。此外，人类和实验动物体内di-22:6-bmp的浓度可以使用lc-ms/ms等生物分析方法进行精确定量。
4、karol l.thompson等于2012年建立了液相色谱-串联质谱法来测定大鼠尿液中的di-22:6-bmp，但方法的主要目的是发现di-22:6-bmp和其他可增加尿中肾毒性的磷脂对dipl的特异性。
5、nanjun liu,elizabeth a等于2014年使用液相色谱-串联质谱法来测定人血清、血浆和尿液中的di-22:6-bmp的浓度，但该研究主要目的是证明di-22:6-b
6、综上所述，目前通过lc-ms/ms测定di-22:6-bmp的研究很少，且相关研究没有详细地说明分析方法，因此需要一种灵敏、快速、便捷的分析方法来定量分析检测di-22:6-bmp。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，包括以下步骤：
4、预处理，采集血清，加入内标溶液，加入异丙醇和蒸馏水，涡流及离心后取上清液，氮气吹干，加入复溶剂涡流混匀后为待测样品；
5、色谱，将待测样品液相色谱分离，采用菲罗门luna柱，梯度洗脱，洗脱时间为3min，，流速0.5ml/min，柱温50℃，自动进样器温4℃，进样量5.0μl，流动相a为含0.02％氨水的水溶液，流动相b为含0.02％氨水的异丙醇。
6、质谱，采用电喷雾离子源，负离子检测，毛细管电压3.00kv，脱溶剂温度600℃，脱溶剂气流速1000l/hr，bmp定量分析离子对m/z 865.2→327.1，cone电压(cv)30v，collision能量(ce)30ev。14：0bmp(s,r)定量分析离子对m/z 665.2→227.0，cone电压(cv)30v，collision能量(ce)35ev。
7、优选地，所述的测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于：所述预处理步骤，其中未知样品预处理，取血清样品100μl。随后都分别加入50.0μl内标溶液(14：0bmp(s,r)1.00ng/ml)、100μl异丙醇和100μl蒸馏水，再加入500μl乙酸乙酯，涡旋混匀，离心(4℃，12000rpm，5min)，取上清液500μl，40℃，氮气吹干，加入200μl复溶剂(异丙醇：蒸馏水＝1:1)复溶，涡流混匀后取5.00μl样品进样。标准曲线和质控样品使用含5％牛血清白蛋白溶液配制。
8、优选地，所述的测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于：所述内标溶液为14：0bmp(s,r)。
9、优选地，所述的测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于：所述质谱采用负离子检测并且检测bmp的母离子，是m/z 865.2。
10、优选地，所述的测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于：所述色谱步骤，菲罗门luna柱，流动相a为含氨水的水溶液，流动相b为含氨水的异丙醇。
11、借由上述方案，本专利技术至少具有以下优点：
12、1、本专利技术具有灵敏高，bmp定量下限浓度为0.2ng/ml。
13、2、本专利技术样品用量少仅为100μl适合临床前研究。
14、3、本专利技术检测速度快，检测时间为3.0min适合大批量研究样品分析。
15、4、本专利技术采用液液萃取的方法进行预处理，操作简便适合大批量研究样品分析。
16、上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
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1.测定大鼠、犬血清中BMP的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定大鼠、犬血清中BMP的检测方法，其特征在于：所述预处理步骤，其中未知样品预处理，取血清样品100μL。随后都分别加入50.0μL内标溶液(14：0BMP(S,R)1.00ng/mL)、100μL异丙醇和100μL蒸馏水，再加入500μL乙酸乙酯，涡旋混匀，离心(4℃，12000rpm，5min)，取上清液500μL，40℃，氮气吹干，加入200μL复溶剂(异丙醇：蒸馏水＝1:1)复溶，涡流混匀后取5.00μL样品进样。标准曲线和质控样品使用含5％牛血清白蛋白溶液配制。
3.根据权利要求2所述的测定大鼠、犬血清中BMP的检测方法，其特征在于：所述内标溶液为14：0BMP(S,R)。
4.根据权利要求1所述的测定大鼠、犬血清中BMP的检测方法，其特征在于：所述质谱采用负离子检测并且检测大鼠、犬血清中BMP的母离子，是m/z 865.2。
5.根据权利要求1所述的测定大鼠、犬血清中BMP的检测方法，其特征在于：所述色谱步骤，菲罗门Luna柱，流
...【技术特征摘要】
1.测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的测定大鼠、犬血清中bmp的检测方法，其特征在于：所述预处理步骤，其中未知样品预处理，取血清样品100μl。随后都分别加入50.0μl内标溶液(14：0bmp(s,r)1.00ng/ml)、100μl异丙醇和100μl蒸馏水，再加入500μl乙酸乙酯，涡旋混匀，离心(4℃，12000rpm，5min)，取上清液500μl，40℃，氮气吹干，加入200μl复溶剂(异丙醇：蒸馏水＝1:1)复溶，涡流混匀后取5.00μl样...
【专利技术属性】
技术研发人员：左正龙，宗于健，沈永惠，崔如玉，邹小芳，顾文涛，苏彩娟，袁梦，胡万秋，董海慧，谢欣，谢丹，曹佩佩，杨卓，王亚楠，杨勇，
申请(专利权)人：苏州澄耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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