【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于再生医学，具体涉及一种将富血小板血浆（prp）和骨髓间充质干细胞（bmscs）负载于生物支架的方法。
技术介绍
1、富血小板血浆（prp）是最近发现的一种重要的血小板浓缩物，其中含有大量生长因子，可刺激组织缺损的修复，在口腔科及骨科领域，是一项热门的研究课题（fufa d,shealy b, jacobson m, et al. activation of platelet-rich plasma using solubletype i collagen[j]. journal of oral and maxillofacial surgery, 2008, 66(4):684-690）。当被应用于损伤部位时，prp中含有的pdgf，tgf-β，igf,egf,vegf等生长因子可以促使成纤维细胞dna合成增加，增加胶原蛋白合成和细胞外基质的分泌，提高组织损伤的修复效率（joshi s m, mastrangelo a n, magarian e m, et al. collagen-plateletcomposite enhances biomechanical and histologic healing of the porcineanterior cruciate ligament[j]. the american journal of sports medicine, 2009,37(12): 2401-2410）。
2、但是，将液体形式的prp应用于口腔或前交叉韧带等部位，纤溶酶的存在可能会
3、故基于此，提出本专利技术的技术方案。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，所述方法包括如下步骤：
2、（1）将富血小板血浆（prp）和骨髓间充质干细胞（bmscs）分别与抗凝剂混合，分别得到富血小板血浆-抗凝剂（prp-抗凝剂）混合液和骨髓间充质干细胞-抗凝剂（bmscs-抗凝剂）混合液；
3、（2）将所述富血小板血浆-抗凝剂混合液与所述骨髓间充质干细胞-抗凝剂混合液进行循环混合，得到富血小板血浆-骨髓间充质干细胞混合液（prp-bmscs）；
4、（3）将所述富血小板血浆-骨髓间充质干细胞混合液滴加至胶原生物支架表面或注射至胶原生物支架内部；
5、（4）待所述胶原生物支架被所述富血小板血浆-骨髓间充质干细胞混合液完全浸润后，即得到负载有富血小板血浆和骨髓间充质干细胞的胶原生物支架。
6、优选地，步骤（1）中，所述抗凝剂包括但不限于枸橼酸三钠、肝素、乙二胺四乙酸盐或草酸钠。
7、优选地，步骤（1）中，所述富血小板血浆-抗凝剂混合液中，富血小板血浆与抗凝剂的体积比为5:0.1，所述抗凝剂浓度为1~15wt.%。
8、优选地，步骤（1）中，所述骨髓间充质干细胞-抗凝剂混合液中，骨髓间充质干细胞与抗凝剂的体积比为5:0.1，所述抗凝剂浓度为1~15wt.%。
9、优选地，步骤（2）中，所述循环混合的次数为5~20次。
10、优选地，步骤（2）中，所述循环混合的温度为20~37℃。
11、优选地，步骤（3）中，所述滴加的速率为10~60滴/min。
12、优选地，步骤（3）中，所述注射的速率为0.5~3ml/min。
13、本专利技术的有益效果为：
14、本专利技术采用胶原生物支架作为prp的载体，胶原生物支架特有的多孔结构可以吸收大量的prp，并且保护其不受纤溶酶的作用，同时可以负载bmscs，这样便构建出了同时包含生物支架、种子细胞、生物因子三者的修复系统，切实的发挥prp的生物学功能，实现损伤部位的高效修复。
15、另外，本专利技术所述方法操作简单，仅需注射器和注射器连接管即可完成。且完成prp和bmscs负载的生物支架复合物已经具备了进行组织工程所需的三要素，即生物支架、种子细胞和生物因子，可以直接应用于损伤组织的修复与再生。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述抗凝剂包括枸橼酸三钠、肝素、乙二胺四乙酸盐或草酸钠。
3.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述富血小板血浆-抗凝剂混合液中，富血小板血浆与抗凝剂的体积比为5:0.1，所述抗凝剂浓度为1~15wt.%。
4.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述骨髓间充质干细胞-抗凝剂混合液中，骨髓间充质干细胞与抗凝剂的体积比为5:0.1，所述抗凝剂浓度为1~15wt.%。
5.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述循环混合的次数为5~20次。
6.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（2）中，所
7.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述滴加的速率为10~60滴/min。
8.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述注射的速率为0.5~3mL/min。
...【技术特征摘要】
1.一种将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述抗凝剂包括枸橼酸三钠、肝素、乙二胺四乙酸盐或草酸钠。
3.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述富血小板血浆-抗凝剂混合液中，富血小板血浆与抗凝剂的体积比为5:0.1，所述抗凝剂浓度为1~15wt.%。
4.根据权利要求1所述将富血小板血浆和骨髓间充质干细胞负载于生物支架的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述骨髓间充质干细胞-抗凝剂混合液中，骨髓间充质干细胞与抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：董文兴，许和平，贾晶，于啸天，韩金彤，张薇，
申请(专利权)人：北京天星医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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