【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医用材料领域，尤其涉及一种羊膜提取物多肽水凝胶及其制备方法和应用。
技术介绍
1、近年来，临床上开展羊膜移植手术，来促进角膜损伤修复，减少角膜混浊，越来越被广泛应用。羊膜移植虽然是一种很好的促进角膜损伤修复、减少角膜混浊的方法，但在临床上存在诸多问题，比如羊膜需要眼库制备和储存，基层医院难以开展；羊膜移植手术需要缝线固定，可能损伤眼表，增加感染风险；由于羊膜需2-3周时间才能被完全吸收，患者术后视力可能暂时下降；同时，许多患者需接受多次手术。因其活性成分易丢失，目前尚未开发出成品羊膜相关眼药。
2、羊膜提取物(ame)的生产工艺多种多样且不规范，大多数人胎盘膜产品在脱水和辐照后都失去活性。在生产ame前，各种保存羊膜方法的效果尚未得到充分研究，生产后，未保存的滴剂保质期较短。在不影响脱水、辐照或低温保存效果的情况下，如何正确保存ame是一个巨大的挑战。每一种不同的加工和保存ame的方法都可能导致各种活性生物分子的结构或功能性质的变化。
3、目前上市的人胎盘膜产品有湿态羊膜和干羊膜，均是用于手术缝线固定在眼睛表面，没有制成药物使用的产品。现在国际上将羊膜提取物作为药物开发，大多处于临床实验阶段，并没有正在上市的产品。这些产品设计在药物使用上，有极大的不方便性，比如有的需要冻干保存，有的需要7天内使用，这样很难保证患者的依从性，不利于药物发挥功能。
4、cn101040616a公开了一种药物羊膜及其制备方法，药物羊膜含有外源性细胞生长因子，其制备方法是通过将羊膜浸没于含有外源性细
5、综上所述，如何提供一种活性成分含量高、保质期长、稳定性高的羊膜提取物，并将其应用于促进角膜损伤修复，已成为目前本领域亟待解决的问题之一。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种羊膜提取物多肽水凝胶及其制备方法和应用，制备羊膜提取物的操作步骤简单，最大程度的保留了羊膜的活性成分，并将其与多肽溶液混合，获得了羊膜提取物多肽水凝胶，利用多肽水凝胶既保存药物活性成分且实现药物缓释，生物相容性好，解决了羊膜临床应用上无法长时间保存的难题。
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种羊膜提取物的制备方法，所述羊膜提取物的制备方法包括：将羊膜冻融后撕除纤维母细胞层和海绵层，剩余组织浸入液氮中冷冻，研磨后获得羊膜粉末，与生理盐水混合，过滤后离心取上清，得到所述羊膜提取物。
4、羊膜分为上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层，上皮细胞层、基底膜和致密层的结构均质性高，并且含有羊膜的主要活性成分，本专利技术通过冻融过程，使致密层和纤维母细胞层之间连接变得疏松，可以直接撕除，从而提高了羊膜活性成分的浓度。
5、优选地，所述冻融中冷冻的温度为-20～-40℃(例如可以是-20℃、-22℃、-24℃、-26℃、-28℃、-30℃、-32℃、-34℃、-36℃、-38℃或-40℃等)。
6、优选地，所述冻融中冷冻的时间为12～20h(例如可以是12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h或20h等)。
7、优选地，所述冻融中解冻的升温速度为0.5～1℃/min(例如可以是0.5℃/min、0.55℃/min、0.6℃/min、0.65℃/min、0.7℃/min、0.75℃/min、0.8℃/min、0.85℃/min、0.9℃/min、0.95℃/min或1℃/min等)；
8、优选地，所述冻融中解冻的最终温度为0～8℃(例如可以是0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等)。
9、本专利技术通过设定冻融过程中冷冻和解冻条件，提升了去除纤维母细胞层和海绵层的效率。
10、优选地，所述羊膜冻融前还包括使用复合溶液冲洗羊膜的步骤。
11、优选地，所述复合溶液中含有50～150μg/ml(例如可以是50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、110μg/ml、120μg/ml、130μg/ml、140μg/ml或150μg/ml等)庆大霉素和20～30μg/ml(例如可以是20μg/ml、21μg/ml、22μg/ml、23μg/ml、24μg/ml、25μg/ml、26μg/ml、27μg/ml、28μg/ml、29μg/ml或30μg/ml等)两性霉素b。
12、优选地，所述羊膜冻融后还包括生理盐水冲洗去除复合溶液的步骤。
13、优选地，获得所述羊膜提取物前还包括干燥的步骤。
14、优选地，所述过滤前还包括将羊膜粉末与生理盐水的混合液在0～8℃(例如可以是0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等)下以80～120r/min(例如可以是80r/min、85r/min、90r/min、95r/min、100r/min、105r/min、110r/min、115r/min或120r/min等)旋转混合40～55h(例如可以是40h、42h、44h、46h、48h、50h、52h或55h等)。
15、本专利技术通过在过滤之前将羊膜粉末和生理盐水旋转混合，保证羊膜中活性成分完全释放并溶解于生理盐水中。
16、优选地，所述羊膜粉末与生理盐水的比例为1g：(2～4)ml。
17、上述(2～4)的具体点值可以选择2、2.5、2.8、3、3.2、3.5或4等。
18、优选地，所述过滤的滤膜孔径为50～100μm(例如可以是50μm、60μm、70μm、80μm、90μm或100μm等)。
19、优选地，所述离心的转速为2000～4000r/min(例如可以是2000r/min、2200r/min、2400r/min、2600r/min、2800r/min、3000r/min、3200r/min、3400r/min、3600r/min、3800r/min或4000r/min等)。
20、优选地，所述离心的时间为10～20min(例如可以是10min、12min、14min、15min、16min、18min或20min等)。
21、优选地，所述离心的温度为22～28℃(例如可以是22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃或28℃等)。
22、优选地，所述羊膜提取物的制备方法包括：
23、从胎盘中钝性分离羊膜，使用含有50～150μg/ml庆大霉素和20～30μg/ml两性霉素b的复合溶液冲洗羊膜，在-20～-40℃条件下冷冻12～20h，将冷冻羊膜以0.5～1℃/min的升温速度升温至0～本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述羊膜提取物的制备方法包括：将羊膜冻融后撕除纤维母细胞层和海绵层，剩余组织浸入液氮中冷冻，研磨后获得羊膜粉末，与生理盐水混合，过滤后离心取上清，得到所述羊膜提取物。
2.根据权利要求1所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述冻融中冷冻的温度为-20～-40℃；
3.根据权利要求1或2所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述羊膜冻融前还包括使用复合溶液冲洗羊膜的步骤；
4.根据权利要求1～3任一项所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述过滤前还包括将羊膜粉末与生理盐水的混合液在0～8℃下以80～120r/min旋转混合40～55h；
5.根据权利要求1～4任一项所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述离心的转速为2000～4000r/min；
6.一种羊膜提取物，其特征在于，使用权利要求1～5任一项所述的羊膜提取物的制备方法制备得到所述羊膜提取物。
7.一种羊膜提取物多肽水凝胶，其特征在于，所述羊膜提取物多肽水凝胶含有权利要求6所述的羊膜提取物和多肽溶
8.根据权利要求7所述的羊膜提取物多肽水凝胶，其特征在于，所述多肽溶液中多肽的质量百分含量为0.5％～2％；
9.根据权利要求7或8所述的羊膜提取物多肽水凝胶，其特征在于，所述羊膜提取物多肽水凝胶由包括如下的制备方法制得：在0～8℃下搅拌混匀羊膜提取物和多肽溶液。
10.如权利要求1～5任一项所述的羊膜提取物的制备方法、权利要求6所述的羊膜提取物或权利要求7～9任一项所述的羊膜提取物多肽水凝胶中的任意一种或至少两种的组合在制备治疗眼部疾病药物中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述羊膜提取物的制备方法包括：将羊膜冻融后撕除纤维母细胞层和海绵层，剩余组织浸入液氮中冷冻，研磨后获得羊膜粉末，与生理盐水混合，过滤后离心取上清，得到所述羊膜提取物。
2.根据权利要求1所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述冻融中冷冻的温度为-20～-40℃；
3.根据权利要求1或2所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述羊膜冻融前还包括使用复合溶液冲洗羊膜的步骤；
4.根据权利要求1～3任一项所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述过滤前还包括将羊膜粉末与生理盐水的混合液在0～8℃下以80～120r/min旋转混合40～55h；
5.根据权利要求1～4任一项所述的羊膜提取物的制备方法，其特征在于，所述离心的转速为2000～4000r...
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